轉(zhuǎn)基因食品及其安全性評(píng)價(jià)技術(shù)概述-資料下載頁(yè)
2025-02-26 22:45本頁(yè)面
【正文】 植物所不擁有的啟動(dòng)子、終止 子、標(biāo)記基因等為目的。216。 蛋白質(zhì)檢測(cè)方法對(duì)含量低及深加工的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品無(wú)法檢測(cè)，故 DNA檢測(cè)方法應(yīng)用范圍相對(duì)要廣。216。 目前國(guó)內(nèi)外對(duì)采用轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品為原料 ,經(jīng)深加工或精加工的食品即使采用 DNA檢測(cè)方法 ,也無(wú)法檢出轉(zhuǎn)基因成分。例如 :醬油、色拉油的制成要經(jīng)過(guò)發(fā)酵、加熱和分離等工序 ,導(dǎo)入的外源 DNA及其產(chǎn)生的蛋白質(zhì)已經(jīng)分解。所以迄今為止還無(wú)有效的檢測(cè)方法來(lái)判斷是否含轉(zhuǎn)基因成分 ,這在國(guó)際生物界是一個(gè)公認(rèn)的難題。 GMF成分檢測(cè)外源蛋白質(zhì)的檢測(cè) 外源基因的檢測(cè)蛋白質(zhì)印跡法蛋白芯片試紙條法“側(cè)流 ”型免疫測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)PCR Southern雜交 基因芯片定性 PCR 實(shí)時(shí)定量熒光 PCR法定量競(jìng)爭(zhēng)性QCPCR法 PCRELISA法定量 PCR 反轉(zhuǎn)錄RTPCR法其它技術(shù)(一 )基因水平的檢測(cè)方法u轉(zhuǎn)基因技術(shù)將從各種生物中克隆出來(lái)的基因片斷插入到靶向受體中時(shí)，一般要構(gòu)建啟動(dòng)子、終止子、選擇標(biāo)記基因、報(bào)告基因等。u從基因水平進(jìn)行轉(zhuǎn)基因的檢測(cè)就是要檢測(cè)受體的核酸序列、目的片斷的整合位點(diǎn)、基因多態(tài)性、目的片斷的含量分析以及啟動(dòng)子、終止子、選擇標(biāo)記基因、報(bào)告基因等。 u導(dǎo)入基因較蛋白質(zhì)具熱穩(wěn)定性 ,加工工序影響較小 ,且存在GMO的任何部位組織。u可直接檢測(cè)啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因片斷、目的基因片斷。u當(dāng)前約 75% 的轉(zhuǎn)基因植物中使用 Ca MV35S啟動(dòng)子 ,其次是胭脂堿和章魚(yú)堿合成酶的 NOS啟動(dòng)子和 Ocs啟動(dòng)子。常用的終止子是胭脂堿合成酶的 NOS終止子和Rubisco小亞基基因的 3’端區(qū)域。u所以當(dāng)前對(duì)啟動(dòng)子和終止子的檢測(cè)實(shí)際上是對(duì) Ca MV35S啟動(dòng)子和 NOS終止子的檢測(cè)。GMF成分檢測(cè)外源蛋白質(zhì)的檢測(cè) 外源基因的檢測(cè)蛋白質(zhì)印跡法蛋白芯片試紙條法“側(cè)流 ”型免疫測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)PCR Southern雜交 基因芯片定性 PCR 實(shí)時(shí)定量熒光 PCR法定量競(jìng)爭(zhēng)性QCPCR法 PCRELISA法定量 PCR 反轉(zhuǎn)錄RTPCR法其它技術(shù)(二 )外源蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法 (Westernblot)216。 把從樣品中提取的蛋白質(zhì)用凝膠電泳分離成大小不同的分子作為抗原 ,并將其轉(zhuǎn)移到固體支持物上 ,用含有放射性標(biāo)記的抗體做探針與之雜交 ,通過(guò)放射性自顯影檢測(cè)外源基因的表達(dá)產(chǎn)物。216。 靈敏度為 15ng (ELISA)216。 復(fù)雜基質(zhì)對(duì)它的準(zhǔn)確性和精確度有干擾 .216。 只適合未加工的原材料的檢測(cè)。3.“側(cè)流 ”型免疫測(cè)定 (Lateral Flow)u該法與 ELISA相似 .操作簡(jiǎn)單 ,能用于野外測(cè)試。u目標(biāo)蛋白一般是水溶的且抗體具有高度專(zhuān)一性 ,樣品僅需粗提便達(dá)到測(cè)試要求 ,與 DNA測(cè)定比 ,特性蛋白分析的樣品處理簡(jiǎn)單。u因?yàn)榭贵w只識(shí)別沒(méi)有變性的蛋白 ,免疫蛋白實(shí)驗(yàn)通常僅限于對(duì)植物葉、種子的分析。u在外源基因并不表達(dá)蛋白情況下 ,無(wú)法對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行免疫學(xué)蛋白測(cè)定 ,只能采用轉(zhuǎn)基因 DNA的測(cè)定。 (LateralFlowStrip)u此法與 ELISA相似。是將特異的抗體交聯(lián)到試紙條上和有顏色的物質(zhì)上 ,當(dāng)紙上抗體和特異抗原結(jié)合后 ,再和帶有顏色的特異抗體進(jìn)行反應(yīng) ,就形成了帶有顏色的三明治機(jī)構(gòu) ,并且固定在試紙條上 ,如果沒(méi)有抗原 ,則沒(méi)有顏色。u此法操作相對(duì)簡(jiǎn)單。目前市場(chǎng)上也出現(xiàn)了一些此類(lèi)測(cè)試的試劑盒。u此法原理和操作過(guò)程與基因芯片是類(lèi)似的 ,只是其原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合而不是堿基對(duì)的互補(bǔ)雜交。u此方法現(xiàn)在僅原理上可以 ,實(shí)際操作過(guò)程中還有一定的困難 ,如特異外源蛋白的獲得等。外源蛋白質(zhì)檢測(cè)方法 — 小結(jié)216。 優(yōu)勢(shì) :除蛋白芯片法外?？焖?,具有一定的靈敏度 ,也能進(jìn)行半定量 ,尤其是試紙條法 ,不需特殊儀器設(shè)備 ,適用于現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)或初篩。216。 局限性 : ,每種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品都要開(kāi)發(fā)和建立專(zhuān)門(mén)的檢測(cè)試劑和方法 ,而轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品種類(lèi)繁多 ,要建立所有轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的蛋白質(zhì)檢測(cè)法工作量很大。 ,其蛋白質(zhì)很容易被破壞 ,從而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 ,甚至有的插入基因根本不表達(dá)或表達(dá)量很低。這些都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。演講完畢，謝謝觀
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