【導(dǎo)讀】A、研究擇要--------------------------------------------------------------------------------------------------第2頁。B、縮略語------------------------------------------------------------------------------------------------------第5頁。六、體系的有效性確定方法---------------------------------------------第21頁。中乙型肝炎病毒表面抗原。聚顯色；若為陰性標(biāo)本，在檢測線區(qū)域不能形成雙抗體夾心復(fù)合物，因此不顯色。無論HBsAg是否存在于測試樣本中，一條有色條帶都會出現(xiàn)在對照線區(qū)內(nèi)。試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。此規(guī)格每張有效長度均以34cm計(jì)，折合34板。酒紅色后，計(jì)時(shí)繼續(xù)加熱10分鐘即可。待溶液冷卻至室溫后，加入純化水補(bǔ)充至4000ml。備注：每1000板需要該比例膠體金溶液的體積為8000毫升。的比例加入Y-002/HBsAg，混勻，靜。經(jīng)3次30分鐘的離心，離。金標(biāo)抗體溶液按每張無紡布涂布10ml均勻涂布，室溫晾干18－20小時(shí)即可。生產(chǎn)中間體條組分S4。硝酸纖維反應(yīng)膜沿膜上密虛線標(biāo)志線分切。調(diào)試自動噴膜機(jī)，噴液量設(shè)定為，導(dǎo)軌速度。包被后的硝酸纖維素膜過夜晾干。

　　

【正文】 果表明，加入不同抗凝劑的 樣本檢測結(jié)構(gòu)和對照結(jié)果完全一致， 同時(shí)測試后試紙的背景干凈。 溶血、黃疸及 血脂 的樣品對本試劑的檢測結(jié)果的干擾 分別取 4 份內(nèi)質(zhì)控參考品 （每份包括 N P4及不同濃度的最低檢出限參考品） ，其中的 1 份為對照，另外 3 份中依 次加入血紅素 、甘油三酯 、血紅蛋白 4mg/ml，使用本公司生產(chǎn)的 乙型肝炎病毒表面抗原檢測試劑盒 (膠體金法 )進(jìn)行檢測。結(jié)果如下， 表 18 溶血、黃疸及 血脂 的樣品對本試劑的檢測結(jié)果的干擾 不同干擾物 檢測樣本 對照 血紅素 甘油三酯 N1 － － － － P4 ＋ ＋ ＋ ＋ HBsAg1ng/ml － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ HBsAg4ng/ml ＋ ＋ ＋ ＋ 第 19 頁 共 23 頁 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，加入不同物質(zhì)分別模擬溶血、黃疸及脂血， 測試結(jié)果和對照完全一致 。即在測試濃度水平，輕度、重度溶血、黃疸及脂血的樣品對本試劑盒的檢測結(jié)果基本沒有干擾。但仍推薦使用清澈、無溶血及黃疸的血清或血漿樣品進(jìn)行檢測。 縱上所述，該試劑對檢測樣本的要求有： 樣本采集前對受檢者無特殊要求，不需禁食， 按照常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室程序收集血清 /血漿 樣 本。 樣 本收集后應(yīng)盡快分離血清 /血漿以避免融血。嚴(yán)重溶血和乳糜樣本不能用于檢測，以免引起誤判；已經(jīng)進(jìn)行加熱處理的樣本及已被微生物污染的樣本不能用于檢測 。 血 清 樣 本應(yīng)收集在不含任何抗凝劑的試管中，血漿 樣 本應(yīng)收集于含有正常使用量檸檬酸鈉、肝素、 EDTA 等抗凝劑的容器中。如果需要， 樣 本中可加入 %疊氮鈉作為防腐劑。 樣本收集后應(yīng)盡快檢測，不能將 樣 本在室溫放置太長的時(shí)間。如果收集的當(dāng)天不使用，應(yīng)當(dāng)冷藏 28℃ 保存，超過 7天應(yīng)當(dāng)冷凍于 20 ℃ 保存。應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，使用前不得超過 23 次。 檢測前應(yīng)將 樣 本恢復(fù)至室溫，冷凍的 樣 本應(yīng)等完全融化后方可使用。 四．試劑用量 樣本量 因?yàn)楸驹嚄l的加樣方法為直接將有箭頭標(biāo)志線一端插入裝有血清 樣 本的容器，要求深 度不可超過標(biāo)志線，所以插入的深度與插入后的吸附時(shí)間均對吸附的樣本量有關(guān)系。在這里主要討論插入的深度 ， 以樣本在試條上的移行速度、背景的干凈純度和是否能觀察反應(yīng)為依據(jù)進(jìn)行以下不同反應(yīng)時(shí)間的比較試驗(yàn)。 在這里只討論插入的深度距標(biāo)志線低于 10mm 大于 5mm，因?yàn)橹灰軌驖M足上述深度的最佳吸附試劑，就一定能夠滿足插入的深度距標(biāo)志線小于 5mm，不超過標(biāo)志線的情況。 第 20 頁 共 23 頁 表 19 樣品吸附時(shí)間的確定 時(shí)間 移行速度 30min反應(yīng)結(jié)果 2秒 很慢 有紅色，不清晰、集中，不能觀察反應(yīng) 5秒 慢 略有紅色，不清晰、集 中，基本能觀察反應(yīng) 8秒 較慢 背景干凈，色帶清晰，略有不集中，基本能觀察反應(yīng) 11秒 快 背景干凈，色帶清晰、集中，能正常觀察反應(yīng) 14秒 快 背景干凈，色帶清晰、集中，能正常觀察反應(yīng) 試驗(yàn)結(jié)果表明，待檢樣品吸附時(shí)間過短，樣品在測試條上的遷移速度慢，不能在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察反應(yīng)結(jié)果，且影響檢測的靈敏度，容易造成弱陽性樣本的漏檢；待檢樣品加樣量過多，試劑條顯色條帶易擴(kuò)散，且容易出現(xiàn)假陽性條帶。 持試條將有箭頭標(biāo)志線一端插入 樣 本 收集 容器中 ，確保樣本液面直到標(biāo)記線且浸沒時(shí)間應(yīng)大于 10～ 15 秒 (注：深度不可 超過標(biāo)志線橫線 )，然后取出平放或粘切在測試卡 (可用記錄紙代替 )開始計(jì)時(shí) 觀察測試結(jié)果。 五．體系的反應(yīng)條件 反應(yīng)時(shí)間 為確定反應(yīng)結(jié)果的最佳觀察時(shí)間， 需要考慮膜條褪白情況， 用 最低檢出限參考品進(jìn)行檢測確認(rèn)，結(jié)果如下 表 20 最低檢測線樣本觀察結(jié)果 反應(yīng)時(shí)間 (min) 檢測樣本 2 5 7 10 15 20 30 60 1ng/ml / / / － － － － － － － － ＋ － 4ng/ml / / / － ＋ ＋ ＋ ＋ 從上述結(jié)果可以看出，當(dāng)時(shí)間小于 10 分鐘時(shí)，不能正確觀察結(jié)果；大于 10 分鐘時(shí)，膜面完全褪白， 15 分鐘時(shí)， 3ng/ml 顯陽性， 30 分鐘時(shí) ， 60分鐘時(shí)，由于膜面變干等原因， 。 第 21 頁 共 23 頁 表 21 反應(yīng)時(shí)間的 膜面褪白時(shí)間 確定試驗(yàn) 反應(yīng)時(shí)間 反應(yīng)結(jié)果 1 min 樣品將測試條觀察部分整個(gè)浸濕，質(zhì)控線隱約可見，背景為微紅色 2 min 質(zhì)控線已經(jīng)比較清楚，檢測線隱約可見，背景為微紅色 5min 質(zhì)控線、檢測線均已經(jīng)比較清楚，微紅色背景逐漸褪去 10 min 質(zhì)控線、檢測線均已經(jīng)比較清楚，觀察部分背景基本 干凈 15min 質(zhì)控線、檢測線清晰、集中，觀察部分背景基本干凈 20min 質(zhì)控線、檢測線清晰、集中，觀察部分背景干凈 30 min 質(zhì)控線、檢測線清晰、集中，觀察部分背景干凈 60 min 質(zhì)控線、檢測線顏色變深，條帶略有擴(kuò)散，觀察部分背景干凈 上述試驗(yàn)結(jié)果，對待檢樣品反應(yīng)結(jié)果的觀察以質(zhì)控線、檢測線的清晰與集中程度，以及背景的干凈程度判斷，最佳目測判斷結(jié)果的時(shí)間應(yīng)在 10－ 30 分鐘讀取， 30 分鐘后條帶顏色和集中程度開始變化。 強(qiáng)陽性標(biāo)本可以在 2 分鐘顯色，弱陽性樣本會在 10～30分鐘顯色， 為了判斷 結(jié)果的準(zhǔn)確和一致，結(jié)果判定以 30分鐘內(nèi)為準(zhǔn)。 2 環(huán)境變化對檢測結(jié)果影響 (1)溫度 為確定最適反應(yīng)溫度，用 最低檢出限參考品 按照不同實(shí)驗(yàn)溫度 2－ 8℃ 、 16℃ 、 25℃ 、30℃ 、 37℃ 、 45℃ 下進(jìn)行檢測，持試條將有箭頭標(biāo)志線一端插入裝有血清標(biāo)本的容器10秒鐘，然后取出平放 30分鐘觀察結(jié)果。主要考察測試條靈敏度和特異性，其次考察條帶的集中和清晰程度以及樣品的移行速度。 試驗(yàn)結(jié)果表明， 2－ 8℃ 顯色條帶變淺，顯色條帶集中，但是靈敏度和樣品的移行速度略有降低； 37℃ 以上試驗(yàn)樣品的移行速度加快，顯色條帶略有擴(kuò)散，顏色略有 變深；相反 16℃ 、 25℃ 、 30℃ 的試驗(yàn)均正常。 因此，我們選擇最佳的實(shí)驗(yàn)溫度為 15－ 30℃ 。 (2)濕度 為確定最適反應(yīng)濕度，用 最低檢出限參考品 進(jìn)行不同濕度的對照 20%、 40%、 60%、80%下進(jìn)行測定。主要考察測試條的移行速度，其次考察條帶的集中和清晰程度。 第 22 頁 共 23 頁 試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著濕度的升高，試條的移行速度變慢。但是 20%試條顯色條帶的不整體，略有擴(kuò)散和變深； 80%的顯色條帶略有變淺； 40%、 60%反應(yīng)體系很正常，顯色條帶清晰、集中。因此，我們選擇最佳的試驗(yàn)環(huán)境濕度為 30%－ 70%。 六 ．體系的有效性 確定方法 (校準(zhǔn)、質(zhì)控方法 ) 內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn) 本公司生產(chǎn)的 乙型肝炎病毒表面抗原檢測試劑盒 (膠體金法 )有一個(gè)內(nèi)在的質(zhì)控指標(biāo)，即對照線作為內(nèi)在的過程控制。如果操作過程正常，樣品體積足量、樣品和測試試劑在硝酸纖維素膜層析正常、以及待測樣本、對照線和膠體金標(biāo)記具有活性，一條直觀的有色條帶總在對照線區(qū)域出現(xiàn)。 另外，如果試劑的有效、裝置工作正常，結(jié)果觀察窗口的背景將變白，同時(shí)提供一個(gè)直觀的結(jié)果。這將被看作為一個(gè)內(nèi)在的過程控制。 如果對照線區(qū)域不能出現(xiàn)有色條帶，將測試無效，應(yīng)當(dāng)重新進(jìn)行測試。應(yīng)當(dāng)聯(lián)系供應(yīng)商進(jìn)行咨詢。 外 控標(biāo)準(zhǔn) 本試劑不提供對照標(biāo)準(zhǔn)品。推薦用戶定期使用外控標(biāo)準(zhǔn)對產(chǎn)品的性能進(jìn)行確認(rèn)，如果和預(yù)期的結(jié)果不符，應(yīng)當(dāng)停止使用該產(chǎn)品，同時(shí)聯(lián)系供應(yīng)商。 對于怎樣取得對照樣本等，可以和生產(chǎn)商進(jìn)行聯(lián)系，也可以按照測試實(shí)驗(yàn)室建立的標(biāo)準(zhǔn)、國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等建立。 第 23 頁 共 23 頁 附 圖 1 乙型肝炎病毒表面抗原檢測試劑盒 (膠體金法 )流程圖 物料 工序 檢驗(yàn) 入庫 中間站 關(guān)鍵 工序 特殊工序 試劑 配 液 包 被 膠體金溶液制備 硝酸纖維膜 封 閉 金標(biāo)抗體制備 涂布、干燥 干 燥 內(nèi)包裝 無紡布 金標(biāo)抗體反應(yīng)膜 硝酸纖維反應(yīng)膜 組裝、切條 外包裝 單人份條 中間體條 外包裝材料 內(nèi)包裝材料 輔料 入庫 (1)鼠抗 HBsAg單克隆抗體 A (2)羊抗鼠 IgG 多克隆抗體 鼠抗 HBsAg 單克隆抗體