【正文】 n)作用位點就是核糖體 30S亞基上的 S12蛋白質，正常情況下鏈霉素與 S12蛋白結合使蛋白質的生物合成不能進行，細胞停止生長。 rpsL基因的變異使鏈霉素失去結合位點，從而使該基因型的菌株具有了對鏈霉素的抗性 (Strr)。 Tn5(Transposon)是帶有卡那霉素 (Kanamycine)抗性基因的轉座子，當 Tn5轉位到大腸桿菌基因組時，能使此菌株獲得卡那霉素的抗性 (Kan r)。 Tn10(Transposon)是帶有四環(huán)素 (tetracycline)抗性基因的轉座子。當 Tn10轉位至大腸桿菌基因組時，能使此菌株獲得四環(huán)素的抗性 (Tet r)。 大腸桿菌基因型及遺傳符號說明（ 6） ? 能量代謝相關的基因型 lacZ(Lactose)是大腸桿菌中 lac操縱子的結構基因，表達 β半乳糖苷酶，分解乳糖為半乳糖苷。 lacZ 基因的變異或缺失將直接導致 β半乳糖苷酶活性缺失。 lacZ M15是表達 β半乳糖苷酶 α片斷的一段基因，當△ M15時， β半乳糖苷酶沒有活性。 lac操縱子上的結構基因有 lacZ(β半乳糖苷酶 )、 lacY(透性酶 )、 lacA(乙?；D移梅 )得以正常表達。 ara(Arabinose)表達阿拉伯糖代謝所需的各種酶，其中 araA表達阿拉伯糖異構酶、 araB表達核酮糖激酶、 araC表達阻遏蛋白， araD表達 L核酮糖 4磷酸差向異構酶、 araE表達低親和型 L阿拉伯糖轉運蛋白、 araF表達 L阿拉伯糖結合蛋白、 araG表達高親和性的 L阿拉伯糖轉運蛋白。 gal(Galactose)表達半乳糖代謝所需的各種酶類及調節(jié)蛋白，其中 galE表達尿苷二磷酸 (UDG)半乳糖 4差向異構酶、 galK表達半乳糖激酶、 galP表達半乳糖透性酶、 galR表達半乳糖操縱子的阻遏蛋白、 galT表達半乳糖 1磷酸尿苷酰轉移酶、 galU表達葡萄糖 1磷酸尿苷酰轉移酶。 大腸桿菌基因型及遺傳符號說明（ 7） ? 氨基酸代謝相關的基因型 thy A(Thymine）表達胸苷酸合成酶，參與胸腺嘧啶的代謝。 thyA基因的變異可以利用胸腺嘧啶進行菌株篩選。 proA(Proline)表達 γ谷氨酸磷酸還原酶，作用于脯氨酸生物合成的第二步。 proA基因的變異或缺失，使脯氨酸的生物合成受阻，在用最小培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞時需要特別添加脯氨酸。 proB(Proline)表達谷氨酸巖 5磷酸激酶，它能催化三磷酸鹽與谷氨酸鹽結合形成谷氨酸 5磷酸鹽，是脯氨酸合成的第一步。 proB基因的變異或缺失，使脯氨酸合成受阻，在用最小培養(yǎng)基培養(yǎng)時需特別添加脯氨酸。 thr(Thronine)包含 thrA、 thrB和 thrC三種基因。 thrA表達天冬氨酸激酶及 I高絲氨酸脫氫酶，thrB表達高絲氨酸激酶， thrC表述蘇氨酸合成酶。 thr 基因的變異使細胞不能合成蘇氨酸，用最小培養(yǎng)基培養(yǎng)時需添加蘇氨酸。 大腸桿菌基因型及遺傳符號說明（ 8） ? 維生素代謝相關的基因型 bioH(Biotin)表達的蛋白能催化前生物素到生物素的轉化，還能對庚二酰 CoA有優(yōu)先的阻害作用。 bioH基因的變異使細胞不能自身合成生物素，在最小培養(yǎng)基中必須添加生物素，細胞才能正常生長。 thi(Thiamin)表達硫胺素，包含有 thiA 、 thiB 、 thiC 、 thiD 、 thiK 、 thiL 等。 thiA表達硫氨素噻唑轉運蛋白、 thiB表達硫氨素磷酸鹽焦磷酸化酶、 thiC表達硫氨素嘧啶轉運蛋白、thiD表達磷酸甲基化嘧啶激酶、 thiK表達硫氨素激酶、 thiL表達硫氨素甲磷酸激酶。 thi的變異使硫氨素的生物合成不能進行，最小培養(yǎng)基中必須添加硫氨素（ VB1），細胞才能正常生長。 大腸桿菌基因型及遺傳符號說明（ 9） ? 蛋白酶相關的基因型 lon(long form)表達 ATP依賴型蛋白分解酶 (La)，它對外源的異型蛋白質具有特異性的分解作用。 lon基因的變異或缺失，使細胞中的這種異型蛋白質分解酶不能得到表達，這對于保持克隆體目的蛋白的穩(wěn)定是非常有利的。 ompT(Outer membrane protein)表達特異性的外膜蛋白分解酶，它特異性地分解與細胞膜結合的含鐵腸菌素受體蛋白。 ompT基因的變異使膜結合性蛋白分解酶活性缺失，有利于融合蛋白的表達。 大腸桿菌基因型及遺傳符號說明（ 10） ? 1物質轉運結合相關的基因型 tonA(Transport)和 fhuA(Ferric hydroxamateuptake)基因處于基因組圖同一位點，它們的作用也相同，都是表達外膜受體蛋白。這種受體蛋白與鐵絡合物結合，并與 tonB 蛋白相互協(xié)調作用，把鐵化合物運至細胞質中。 tonA和 fhuA基因的變異使細胞對鐵離子的吸收受到阻害，同時使細胞對某些抗菌素及噬菌體更敏感，有利于質粒轉化和菌體篩選。 tsx(Tsix)基因表達 T6噬菌體和大腸桿菌素 K的受體蛋白，它結合于細胞膜的外表面，對 T6噬菌體和大腸桿菌素 K進入細胞起關鍵作用。另外 tsx受體蛋白還有與核苷酸特異性結合的功能，是核苷酸特異性運輸通道的第一步，在核苷酸的吸收方面也起重要作用。 tsx 基因的變異使外界某些噬菌體及大腸桿菌素等對細胞的侵噬變得困難，有利于細胞基因組的穩(wěn)定。 cysA(Cysteine)基因表達硫酸鹽 /硫代硫酸鹽轉移蛋白，參與細胞對硫酸鹽的吸收與轉運，通過 cysA蛋白轉運的硫酸鹽將參與半胱氨酸的生物合成。 cysA基因的變異使半胱氨酸的生物合成受到影響，在培養(yǎng)此基因型的菌株時要注意添加半胱氨酸。 ? 1其他 deoR(Deoxyribose)是大腸桿菌中 deo操縱子的調節(jié)基因，它表達的阻遏蛋白對 deo操縱子具有重要的調控作用。 deo操縱子含有 deoA、 deoB、 deoC和 deoD等結構基因，分別表達DNA代謝所需的酶類，即胸腺嘧啶磷酸化酶、磷酸轉位酶、脫氧核糖磷酸醛縮酶和嘌呤核苷磷酸化酶。 deoR基因的變異，使 deo操縱子的阻遏蛋白不能表達，宿主細胞合成大量的 dCTP，可以選擇性地改善大分子 DNA的轉化。 relA(Relaxed)是松弛調節(jié)基因，對 RNA的合成具有調節(jié)抑制作用。同時 relA基因還表達ATP:GTP3`焦磷酸轉移酶，負責在氨基酸饑餓狀態(tài)下鳥苷 3` ,5`二磷酸 (ppGpp)的合成，以適應饑餓環(huán)境。 tyrT(Tyrosine)基因專門負責轉錄酪氨酸 tRNA(轉運 RNA)， tyrT基因的變異使以酪氨酸為主的蛋白質的合成受阻。 大腸桿菌基因型及遺傳符號說明（ 12） ? DH5α? ： F–， φ80， lacZΔM15， Δ(lacZYAargF)U169， recA1， endA1，hsdR17 (rK–, mK+) ， phoA， supE44 ， gyrA96 ， relA1 課堂小練習 F：缺失 F質粒 . Φ80：宿主攜帶 λ噬菌體 φ 80. lacZ ΔM15：刪除編碼 β半乳糖苷酶的部分 lacZ基因 (α片斷的一段基因 ). Δ(lacZYAargF)U169： lacZYA表示 lacZ(β半乳糖苷酶 )、 lacY(透性酶 )、 lacA(乙?；D移梅 )， argF基因是精氨酸合成酶， U169表示三個 lac基因和 argF基因之間缺失了 10000bp. hsdR17 (rK–, mK+) ： R17代表特異性識別蛋白發(fā)生變異， (rK–, mK+) 表示由于 R17的變異而導致 K12株來源的 hsdR 功能缺失 . phoA： 大腸桿菌堿性磷酸酶 . gyrA96 ：突變 DNA解旋酶 常用于基因工程的宿主菌 ，菌株不同，基因型亦不同，不同載體要求不同菌株。 如： DH5: F–, endA1, hsdR17(rk–,mk+ ),supE44,thi–,λ–,recA1, relA1,gyrA96 DH5α: F–, endA1, hsdR17(rk–,mk+ ),supE44,thi–,λ–, recA1, relA1,gyrA96。 φ80dlacZ△ M15, △ (lacZYAargF)U169 E .coli DH5αF’: F’, endA1, hsdR17(rk–,mk+ ),supE44,thi–, λ–, recA1, relA1, gyrA96,φ80dlacZ△ M15, △ (lacZYAargF)U169 i. 三者均有重組基因缺陷，外源 DNA可存活，且不發(fā)生重組。 ii. DH5α和 DH5αF’都具有一個可供遺傳標記 lacZα檢測的遺傳背景。 iii. DH5αF’可供 M13mp系列載體配套使用， M13病毒的感染需要 F’的存在。 ? 啟動子是位于結構基因 539。端上游的 DNA序列，能活化 RNA聚合酶，使之與模板 DNA準確的結合并具有轉錄起始的特異性。 ? 啟動子本身并不控制基因活動，而是通過與稱為轉錄（ transcription）因子的這種蛋白質（ proteins）結合而控制基因活動的。 ? TATA框的主要作用是使轉錄精確地起始； CAAT框和 GC框則主要是控制轉錄起始的頻率，特別是 CAAT框對轉錄起始頻率的作用更大。 ? Kozak序列和 SD序列對于 mRNA的翻譯起重要作用。 啟動子 啟動子可分為 誘導型啟動子 和 組成型啟動子 兩大類，后者包括 CMV， SV40， T7, pMC1，PGK啟動子等。 組成型啟動子 (constitutive promoter)是指在該類啟動子控制下，結構基因的表達大體恒定在一定水平上，在不同組織、部位表達水平沒有明顯差異。 誘導型啟動子 (inducible promoter)是指在某些特定的物理或化學信號的刺激下，該種類型的啟動子可以大幅度地提高基因的轉錄水平。 CMV啟動子： 巨細胞病毒的啟動子。 CMV啟動子（增強子）被廣泛應用于構建高效真核表達載體。 CMV是大家公認的啟動真核基因表達的最有力量的啟動子。 ? 終止子 (terminator T)是給予 RNA聚合酶轉錄終止信號的 DNA序列。在一個操縱元中至少在構基因群最后一個基因的后面有一個終止子。 ? 終止子位于 poly(A)位點下游，長度在數百堿基以內的結構。 終止子 終止子可分為兩類：一類不依賴于蛋白質輔因子就能實現終止作用。另一類則依賴蛋白輔因子才能實現終止作用。這種蛋白質輔因子稱為釋放因子，通常又稱 ρ因子。 兩類終止子有共同的序列特征。在轉錄終止點前有一段回文序列。 ? 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 , February 26, 2023 ? 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 12:24:3312:24:3312:242/26/2023 12:24:33 PM ? 1以我獨沈久，愧君相見頻。 :24:3312:24Feb2326Feb23 ? 1故人江海別，幾度隔山川。 12:24:3312:24:3312:24Sunday, February 26, 2023 ? 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 :24:3312:24:33February 26, 2023 ? 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 2023年 2月 26日星期日 下午 12時 24分 33秒 12:24: ? 1比不了得就不比，得不到的就不要。 。 2023年 2月 下午 12時 24分 :24February 26, 2023 ? 1行動出成果，工作出財富。 2023年 2月 26日星期日 12時 24分 33秒 12:24:3326 February 2023 ? 1做前，能夠環(huán)視四周；做時，你只能或者最好沿著以腳為起點的射線向前。 下午 12時 24分 33秒 下午 12時 24分 12:24: ? 沒有失敗，只有暫時停止成功！。 , February 26, 2023 ? 很多事情努力了未必有結果，但是不努力卻什么改變也沒有。 12:24:3312:24:3312:242/26/2023 12:24:33 PM ? 1成功就是日復一日那一點點小小努力的積累。 :24:3312:24Feb2326Feb23 ? 1世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 12:24:3312:24:3312:24Sunday, February 26, 2023 ? 1不知香積寺，數里入云峰。 :24:3312:24:33February 26, 2023 ? 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 2月 26日星期日 下午 12時 24分 33秒 12:24: ? 1楚塞三湘接，荊門九派通。 。 2023年 2月 下午 12時 24分 :24February 26, 2023 ? 1少年十五二十時，步行奪得胡馬騎。 2023年 2月 26日星期日 12時 24分 33秒 12:24:3326 February 2023 ? 1空山新雨后，天氣晚來秋。 下午 12時 24分 33秒 下午 12時 24分 12:24: ? 楊柳散和風，青山澹吾慮。 , February 26, 2023 ?