【正文】 鼠放在濾紙 (也可用淺色吸水紙 )上，以濕糞多少表示腹瀉的程度，也可分別記錄正常便、軟便 (便形不零散 )、爛便 (便形中間崩散 )和瀉下便：觀(guān)察給番瀉葉 (或大黃、蓖麻油 )后 16h，每小時(shí)換紙 1次， 724h后計(jì)數(shù)。 3．注意點(diǎn) (1)小鼠必須分籠 (或分格 )單獨(dú)飼養(yǎng)觀(guān)察，籠底網(wǎng)眼適當(dāng)稍大，以便濕糞可隨時(shí)掉至籠下。或用大玻璃漏斗罩住小鼠，更易于觀(guān)察，可避免糞便沾在籠網(wǎng)。 (2)試驗(yàn)前應(yīng)先將小鼠分籠飼養(yǎng)，觀(guān)察 1— 2日，有泄瀉 (濕糞 )的動(dòng)物不應(yīng)選取進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 (3)造模前先給受試藥物，劑量和療程根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果制定。 (4)由于藥材來(lái)源，質(zhì)量等關(guān)系，大黃、番瀉葉的提取方法、劑量也可根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整。 (5)濕糞的識(shí)別，指近似圓形的糊狀軟糞或稀糞，在濾紙上，其周?chē)凶厣h(huán)帶，而正常的干糞則呈餅棍形或梭形，在濾紙上，其周?chē)伙@顏色。 (6)給瀉下藥后， 1— 6h，每小時(shí)換濾紙 1次，必要時(shí)可縮短換紙時(shí)間，如不及時(shí)換紙，容易造成糞重疊，影響計(jì)數(shù)， 6h后，濕糞減少，可少換或不換紙。 (7)評(píng)價(jià)試藥的止瀉作用，計(jì)算和比較各組小鼠 24h濕糞總數(shù)。也可比較排濕糞的動(dòng)物數(shù)，或比較各組不同糞便性質(zhì)的數(shù)，根據(jù)試驗(yàn)具體情況考慮。 肝纖維化、肝硬化藥 一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 肝纖維化、肝硬化是一種或多種病因長(zhǎng)期或反復(fù)作用引起的慢性進(jìn)行性彌漫性肝臟損害的 — 種疾病。在我國(guó)本病發(fā)病的主要病因是病毒性肝炎、血吸蟲(chóng)病、乙醇中毒、毒物和藥物、膽汁淤積、循環(huán)障礙和代謝紊亂等。一是可引起脂肪積蓄形成脂肪肝，二是肝細(xì)胞受到反復(fù)而廣泛的損害，肝細(xì)胞變性、壞死，繼而由肝細(xì)胞的再生和纖維組織增生，使肝臟組織結(jié)構(gòu)破壞，質(zhì)地變硬，發(fā)生硬化。 根據(jù)肝硬化的臨床表現(xiàn)特點(diǎn)，屬中醫(yī)的”臌脹”、“黃疸”、”脅痛”、“積聚”等病證，形成肝硬化的病機(jī)，早期是肝脾的功能失調(diào)。先是肝氣失條達(dá)，郁結(jié)日久，脾失健運(yùn)，濕濁不化，進(jìn)一步阻滯氣機(jī)，脾虛及氣機(jī)阻滯，使瘀血蘊(yùn)里，絡(luò)脈壅塞，日久則成痞呋。瘀結(jié)日久，肝脾進(jìn)一步受損，水濕停聚并波及了腎。因此氣滯、血瘀、水停是肝硬化的三個(gè)重要病理變化。中醫(yī)早期治療多疏通肝氣，兼顧補(bǔ)脾運(yùn)濕，中期化瘀、行氣，補(bǔ)脾并養(yǎng)血柔肝，晚期化瘀逐水，健脾益腎。西醫(yī)則注重休息，高熱量高蛋白飲食，此外藥物的治療是補(bǔ)充維生素 c、 E及 B族，保肝用肝太樂(lè)、維內(nèi)肝等。青霉胺被認(rèn)為有纖維化作用，免疫功能調(diào)節(jié)劑可調(diào)整機(jī)體免疫功能，因此臨床均可使用，、但需注意青霉胺副反應(yīng)較多，其他藥物療效不夠穩(wěn)定，故防治脂肪肝、肝纖維化、肝硬化的藥物尚需進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。 二、藥效學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) (一 )對(duì)疾病動(dòng)物模型的防治作用試驗(yàn) 1，常用動(dòng)物模型 (1)乙硫氨酸模型：乙硫氨酸有左旋、右旋及消旋光學(xué)異構(gòu)體，乙硫氨酸可引起肝臟脂肪變性。由于化學(xué)結(jié)構(gòu)與硫氨酸相似．后者為體內(nèi)甲基轉(zhuǎn)換的供體，乙硫氨酸與之競(jìng)爭(zhēng)，取代甲基而提供乙基，使肝臟蛋白質(zhì)合成發(fā)生障礙，使生成的 RNA和蛋白質(zhì)含有乙基而非甲基，由于蛋白質(zhì)合成障礙，導(dǎo)致三酰甘油 (甘油三酯 )蓄積于肝臟，引起脂肪肝，長(zhǎng)期給藥可形成肝硬化或肝痼，此模型操作簡(jiǎn)便，成功率高，適合抗脂肪肝藥物篩選。 (2)營(yíng)養(yǎng)不良、乙醇、四氯化碳復(fù)合因素肝硬化模型：采用兩種方法造成營(yíng)養(yǎng)不良性肝硬化，一是給予高脂肪、低蛋白質(zhì)、低膽堿飲食，使肝肌發(fā)生脂肪變性，逐漸形成肝硬化，二是食物缺乏營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如胱氨酸、蛋氨酸、維生素 K等，引起肝細(xì)胞壞死，發(fā)展為肝硬化，上述兩種營(yíng)養(yǎng)不良法再加上乙醇和四氯化碳，可加速脂肪肝的發(fā)展，因脂肪變性的肝細(xì)胞對(duì) CCl4損傷作用敏感，故大量肝細(xì)胞壞死，網(wǎng)狀支架塌陷，纖維增生，發(fā)展為肝硬化。 (3)酒精 (乙醇 )性肝損傷、肝纖維化、肝硬化模型：乙醇能改變生物膜的蛋白和脂質(zhì)的比例，導(dǎo)致膜的損傷，能改變膜對(duì)鈣的通透性，使大量鈣內(nèi)流而致細(xì)胞死亡。乙醇還能結(jié)合到膜的脂質(zhì)層，使膜的生理功能發(fā)生改變。動(dòng)物灌服乙醇后首先經(jīng)胃腸道吸收，先進(jìn)入門(mén)靜脈，通過(guò)毛細(xì)管迅速散到全身細(xì)胞內(nèi)、外液，進(jìn)入體內(nèi)的乙醇 90％ — 98％在肝臟代謝，所以消化系統(tǒng)的損害較之其他系統(tǒng)就比較突出，大鼠連續(xù)服用 2— 3個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間，開(kāi)始肝損傷逐漸便可發(fā)展為脂肪肝、肝纖維化，最后導(dǎo)致乙醇性肝硬化。 (4)豬血清 (PS)大鼠肝纖維化模型： PS反復(fù)腹腔注射可形成肝纖維化 實(shí)驗(yàn)可采用 PS與甲基亞硝胺 (DMA)合用繡發(fā)肝細(xì)胞纖維化，模型與 CCl4誘發(fā)的纖維增生不同，不是細(xì)胞壞死造成的。 DMA與 PS誘發(fā)的肝纖維化分別是通過(guò)抑制膠原酶活性和刺激脯氨酰羥化酶，與肝細(xì)胞壞死性炎癥無(wú)關(guān)。 (5)四氯化碳反復(fù)給與造成肝硬化：反復(fù)給予 CCl4可造成肝中毒，致使肝細(xì)胞變性、纖維增生而致肝硬化。病理變化有肝結(jié)構(gòu)紊亂，靜脈回流受阻，肝靜脈高壓，促進(jìn)肝內(nèi)動(dòng)靜脈吻合支形成致使肝細(xì)胞供血減少、血清白蛋白減少，血漿凝集素減低，纖維蛋白原減少和血清轉(zhuǎn)氨酶升高。 2 方法學(xué)評(píng)價(jià) 脂肪肝、肝纖維化動(dòng)物模型較急慢肝損傷動(dòng)物模型較難復(fù)制，時(shí)間長(zhǎng)且程度不一，復(fù)合法所制模型較穩(wěn)定，一般 6星期末全部動(dòng)物叫達(dá)到重度纖維化及肝硬化，作為防治肝纖維化藥物篩選用，近來(lái)，長(zhǎng)期給乙醇制品 (如市場(chǎng)所售烈性酒 )造成脂肪肝的模型以及豬血清動(dòng)物模型也逐漸多用于研究，有所創(chuàng)新，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠，與臨床肝硬化病癥近似。 (二 )陽(yáng)性對(duì)照藥 前述抗急慢性肝損傷的中西藥也可防治肝纖維化、肝硬化。西藥抗肝纖維化的藥有亞甲藍(lán)，它抑制乙醇誘導(dǎo)的前膠原基因的表達(dá)，起抗乙醇肝纖維化作用。此外，皮質(zhì)激素、青霉胺、秋水仙素和 Y— 干擾素均可分別作用于膠原的不同環(huán)節(jié)，起到抑制膠原合成的作用，可作為陽(yáng)性對(duì)照藥用。 三、肝纖維化、肝硬化、脂肪肝模型的建立方法 (一 )豬血清誘導(dǎo)免疫損傷性肝纖維化大鼠模型 1．原理 豬血清可刺激大鼠產(chǎn)生抗豬血清抗體形成免疫化合物沉積于肝竇和血管，激活補(bǔ)體，引起炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，釋放炎癥介質(zhì)，造成肝細(xì)胞損傷、壞死，形成纖維化。 2．方法 實(shí)驗(yàn)采用雄性 Wistar種大鼠，體重 130g左右。新鮮豬血離心取血清，濾過(guò)除菌備用。每只大鼠腹腔注射豬血清 0. 5ml，每星期 2次，連續(xù) 8— 12星期。處死大鼠后，取血清做血清生化檢測(cè)，同時(shí)取肝臟進(jìn)行組織學(xué)觀(guān)察。見(jiàn)不同程度的病變。 3. 注意事項(xiàng) (1)豬血清復(fù)制免疫性肝纖維化模型以第四早期為最重，該模型纖維化出現(xiàn)較早，出現(xiàn)率高達(dá) 86． 7％。 (2)實(shí)驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇。 (3)必須進(jìn)行病理組織學(xué)的檢查，以確定纖維化的程度。 4．評(píng)價(jià) 豬血清誘導(dǎo)肝纖維化動(dòng)物模型方法簡(jiǎn)便、周期短、經(jīng)濟(jì)可靠。動(dòng)物模型穩(wěn)定性好，發(fā)生率高，動(dòng)物損傷小．生長(zhǎng)狀態(tài)良好，死亡率低，目前認(rèn)為該模型有望成為肝纖維化的較理想的動(dòng)物模型。 (二 )CCl4復(fù)合因素肝纖維化模型 1．原理 玉米粉僅含 9％蛋白質(zhì)，只能滿(mǎn)足鼠正常蛋白質(zhì)需要量之一半，且此蛋白質(zhì)中缺乏色氨酸與蛋氨酸，這些氨基酸屬趨脂物質(zhì)．缺乏會(huì)導(dǎo)致肝脂肪變，以致纖維化，加入膽固醇增加機(jī)體對(duì)膽堿需要量，從而加速脂肪肝的發(fā)展。脂肪變性的肝細(xì)胞對(duì) CCl4損傷作用敏感，肝細(xì)胞大量壞死，網(wǎng)狀架塌陷，纖維增生，發(fā)展肝硬化。 2 方法 采用 SD或 Wistar雄性大鼠，體重 150200g，實(shí)驗(yàn)第一日皮下注射 40％CCl4植物油溶液 0． 3～ 0． 5ml／ l00g(體重 )，以后每隔 3日 (或 4日 )皮下注射 40％CCl43ml／ kg(體重 )。以 79. 5％單純玉米粉加 20％豬油、 0. 5％膽固醇成混合飼料，另外 30％乙醇為飲料飼養(yǎng)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)第六星期末，即可形成肝硬變。 3．注意 (1)肝纖維化肝硬化所測(cè)血清生化學(xué)指標(biāo)與急慢性肝損傷模型類(lèi)似，可選擇幾項(xiàng)進(jìn)行，但必須測(cè)定血或肝組織脯氨酸含量和肝膠原蛋白含量。 (2)病理組織學(xué)觀(guān)察十分重要，采用 HE染色和膠原纖維染色等方法進(jìn)行。側(cè)重于成纖維細(xì)胞、纖維細(xì)胞和增生的膠原纖維的觀(guān)察。 謝謝觀(guān)看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. 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