【正文】 C 肽 A 肽 信號肽酶 人胰島素的生產(chǎn)方法 直接提取法制人胰島素 迄今為止，有四種大規(guī)模生產(chǎn)人胰島素的方法： 早期人的胰島素是從人的胰臟中直接分離純化的，由于原料 供應的限制，其產(chǎn)量遠遠不能滿足日益增多的糖尿病人的臨 床需求。 人胰島素的生產(chǎn)方法 化學合成法制人胰島素 根據(jù)人胰島素 A鏈和 B鏈的序列，由單個氨基酸從頭合成。這 條化學全合成的路線從技術(shù)上來說是能夠做到的，但其生產(chǎn) 成本奇高，從而也限制了產(chǎn)品的廣泛應用。 人胰島素的生產(chǎn)方法 化學轉(zhuǎn)型法制人胰島素 豬的胰島素可從原料豐富的豬胰臟中提取獲得，而且豬胰島素 與人胰島素只在 B鏈的 C末端有一個氨基酸的差異，豬的為 Ala， 人 的為 Thr， 因此將豬胰島素在體外酶促轉(zhuǎn)化為人胰島素不失為一種 選擇。 上述思路的技術(shù)路線是：在 pH為 67的有機相中使胰蛋白酶催 化其逆反應，該酶在過量的蘇氨酸叔丁酯的存在下，將豬胰島素 B 鏈 C末端的丙氨酸交換下來，所形成的人胰島素叔丁酯再用三氯乙 酸脫去叔丁酯基團，最終獲得人胰島素。該過程的總轉(zhuǎn)化率為 60% 但工藝路線耗時，分離純化操作復雜，產(chǎn)品的價格不菲。 人胰島素的生產(chǎn)方法 基因工程法制人胰島素 1982年，美國 Ely LiLi公司首先使用重組大腸桿菌生產(chǎn)人胰島 素，成為世界上第一個上市的基因工程藥物。 1987年， Novo公司 又推出了利用重組酵母菌生產(chǎn)人胰島素的新工藝。 上述由基因工程菌合成的重組人胰島素在體外胰島素 受體結(jié)合 性能、淋巴細胞和成纖維細胞的應答能力、降血糖作用、血漿藥代 動力學 等指標上均與天然胰島素沒有任何區(qū)別，而且還具有 無免疫 原性、注射吸收迅速等 優(yōu)點，充分展示了基因工程在生物醫(yī)藥領(lǐng)域 中的巨大潛力。 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 A鏈和 B鏈分別表達法 基因工程菌的構(gòu)建策略 ： tac tac bGal bGal A peptide B peptide ori ori Apr Apr Met Met Met Met M M N C M M N C 化學合成 A鏈 和 B鏈的編碼 序列 S S S S 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 A鏈和 B鏈分別表達法 表達產(chǎn)物的后處理路線： M M N C M M N C bGal bGal A B CNBr 處理 N C C N S S N C N C N C N C Cys 體外氧化和重折疊 分離純化 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 A鏈和 B鏈分別表達法 生產(chǎn)技術(shù)的評價： 由于 A鏈和 B鏈上共存在六個半胱氨酸殘基，體外二硫鍵的正 確配對率較低，通常只有 10% 20%，因此采用這條工藝路線生 產(chǎn)的重組人胰島素每克成本高達 100美元 以上。 為了進一步降低生產(chǎn)成本，美國 Ely LiLi公司隨后又建立了第 二條生產(chǎn)重組人胰島素的工藝路線。 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 人胰島素原 表達法 基因工程菌的構(gòu)建策略： tac bGal C peptide ori Apr Met Met M M N C B peptide A peptide 人胰島素原的 cDNA 重組人胰島素原 轉(zhuǎn)化 分離純化 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 人胰島素原表達法 表達產(chǎn)物的后處理路線： S S S S C N 胰蛋白酶 C peptide A peptide B peptide M R R K R CNBr R S S S S C N N C S S S S R 羧肽酶 B B鏈中第 22位上的 Arg和第 29 位上的 Lys由于良好折疊的原 因，對胰蛋白酶不敏感 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 人胰島素原 表達法 生產(chǎn)技術(shù)的評價： 在人胰島素原表達工藝中，由于 C肽的存在，胰島素原能形成 良好的空間構(gòu)象，三對二硫鍵的正確配對率也相應提高，折疊率高 達 80%以上。雖然這條工藝路線并不比 AB鏈分別表達法更為簡捷， 而且還要使用兩種高純度的酶制劑，但理想的折疊率在很大程度上 彌補了工藝繁瑣的缺陷，使得每克最終產(chǎn)品的成本僅 50美元。 目前美國 Ely LiLi公司采用此工藝年產(chǎn) 十幾噸 的重組人胰島素。 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 A鏈和 B鏈同時表達法 tac bGal ori Apr Met Met M M N C B peptide A peptide 化學合成 AB鏈編碼序列 重組人胰島素 轉(zhuǎn)化 分離純化 CNBr 處理 特異性裂解 體外折疊 重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建 分泌型重組人胰島素表達法 上述三種重組大腸桿菌的構(gòu)建路線均采用胰島素或胰島素原編碼序列與大腸桿菌 b半乳糖苷酶 基因拼接的方法，所產(chǎn)生的融合型重組蛋白表達率高、穩(wěn)定性強，但不能分泌，只要以包涵體的形式存在于胞質(zhì)中。一種能促進融合蛋白分泌的工程菌構(gòu)建策略是將胰島素或胰島素原編碼序列與 b內(nèi)酰胺酶 基因拼接， b內(nèi)酰胺酶通常能被大腸桿菌分泌到胞外。由此獲得的工程菌同時具備了穩(wěn)定高效表達可分泌型融合蛋白的優(yōu)良特性，為胰島素的后續(xù)分離純化工序減輕了負擔。但此工藝路線仍處于探索完善階段。 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 , January 25, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 10:04:1710:04:1710:041/25/2023 10:04:17 AM 1以我獨沈久，愧君相見頻。 :04:1710:04Jan2325Jan23 1故人江海別，幾度隔山川。 10:04:1710:04:1710:04Wednesday, January 25, 2023 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 :04:1710:04:17January 25, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 2023年 1月 25日星期三 上午 10時 4分 17秒 10:04: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 。 2023年 1月 上午 10時 4分 :04January 25, 2023 1行動出成果，工作出財富。 2023年 1月 25日星期三 10時 4分 17秒 10:04:1725 January 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時，你只能或者最好沿著以腳為起點的射線向前。 上午 10時 4分 17秒 上午 10時 4分 10:04: 沒有失敗，只有暫時停止成功！。 , January 25, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 10:04:1710:04:1710:041/25/2023 10:04:17 AM 1成功就是日復一日那一點點小小努力的積累。 :04:1710:04Jan2325Jan23 1世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 10:04:1710:04:1710:04Wednesday, January 25, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 :04:1710:04:17January 25, 2023 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 25日星期三 上午 10時 4分 17秒 10:04: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 。 2023年 1月 上午 10時 4分 :04January 25, 2023 1少年十五二十時，步行奪得胡馬騎。 2023年 1月 25日星期三 10時 4分 17秒 10:04:1725 January 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 上午 10時 4分 17秒 上午 10時 4分 10:04: 楊柳散和風，青山澹吾慮。 , January 25, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 10:04:1710:04:1710:041/25/2023 10:04:17 AM 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 :04:1710:04Jan2325Jan23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。 10:04:1710:04:1710:04Wednesday, January 25, 2023 1知人者智，自知者明。勝人者有力，自勝者強。 :04:1710:04:17January 25, 2023 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 25日星期三 上午 10時 4分 17秒 10:04: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 1月 上午 10時 4分 :04January 25, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 2023年 1月 25日星期三 10時 4分 17秒 10:04:1725 January 2023 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。 上午 10時 4分 17秒 上午 10時 4分 10:04: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blandit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis ut cursus. 感謝您的下載觀看 專家告訴