大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)詳細(xì)表格-資料下載頁
2024-10-03 23:49本頁面
【正文】 源蛋白 ? 細(xì)胞周質(zhì)內(nèi)含有種類繁多的內(nèi)毒素 28 第二十八頁，共三十六頁。 1. 5’ UTR對克隆基因表達(dá)效率的影響 2. a. 啟動子結(jié)構(gòu)對表達(dá)效率的影響 3. 大腸桿菌啟動子的保守序－ 35區(qū)〔 5’TTGACA 〕和－ 10(5’TATAAT) 區(qū) 。它們之間的距離 (17bp)。 4. b. 啟動子與克隆基因的間隔距離對表達(dá)效率的影響 5. 當(dāng) mRNA分子 5’ －末端與 SD序列之間的長度小于 15bp時，轉(zhuǎn)譯效率下降。 影響克隆基因在大腸桿菌中的表達(dá)效率因素 29 第二十九頁，共三十六頁。 、 2. 質(zhì)粒載體的生物學(xué)特性對基因表達(dá)效率的影響 a. 質(zhì)粒載體點的拷貝數(shù)對表達(dá)效率的影響 b. 質(zhì)粒載體的不穩(wěn)定性對表達(dá)效率的影響 30 第三十頁，共三十六頁。 a. 轉(zhuǎn)譯起始序列對表達(dá)效率的影響 SD序列后面的 4個堿基， T或 A時轉(zhuǎn)譯作用較高， C或 G時，下降 50%或 25%； 位于起始密碼子 AUG上游的密碼三聯(lián)體的堿基， CUU或 UAU時轉(zhuǎn)譯效率最有效， UUC、 UCA或AGG時下降 20倍； 位于起始密碼子 AUG下游的密碼子堿基組成，也影響轉(zhuǎn)譯的速率。 b. mRNA的穩(wěn)定性對表達(dá)效率的影響 31 第三十一頁，共三十六頁。 a. 密碼子使用的偏愛性現(xiàn)象的規(guī)律性 幾乎在所有的簡并密碼子家族中，都有一個或兩個是優(yōu)先使用的偏愛性密碼子； 一些密碼子在各種不同基因中都是最常用的〔在編碼脯氨酸 4種同義密碼子， CCC是優(yōu)先使用的〕 高表達(dá)活性的基因比低表達(dá)活性的基因，呈現(xiàn)出較高程度的密碼子偏愛性 簡并密碼子的使用頻率，反響它們相應(yīng)的 tRNA豐度。 32 第三十二頁，共三十六頁。 富含大腸桿菌罕用密碼子的外源真核基因，很難在大腸桿菌轉(zhuǎn)化子細(xì)胞中得到有效的表達(dá)。 不同生物密碼子的偏愛性，是阻礙外源基因在大腸桿菌中高效表達(dá)的一種重要因素。 33 第三十三頁，共三十六頁。 5. 寄主細(xì)胞的生理狀態(tài)對基因表達(dá)效率的影響 培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的選擇、細(xì)胞培養(yǎng)方式、培養(yǎng)溫度等環(huán)境因素能影響大腸桿菌生理狀態(tài)。 34 第三十四頁，共三十六頁。 35 第三十五頁，共三十六頁。 內(nèi)容總結(jié) 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)。表達(dá)過程：包含啟動子、目的基因編碼序列和轉(zhuǎn)錄終止序列的載體進入受體細(xì)胞后，可以利用受體細(xì)胞的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯體系表達(dá)產(chǎn)生目的蛋白。 T7噬箘體基因1編碼的 T7 RNA聚合酶選擇性的激活 T7噬箘體啟動子的轉(zhuǎn)錄。在細(xì)胞中存在 T7 RNA聚合酶和 T7噬箘體啟動子的情況下，大腸桿菌宿主本身基因的轉(zhuǎn)錄競爭不過 T7噬箘體轉(zhuǎn)錄體系 第三十六頁，共三十六頁。
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