基因工程概述ppt課件(2)-資料下載頁(yè)
2025-09-11 18:25本頁(yè)面
【正文】 雜交或免疫學(xué)篩選基因 )。 ? （蛋白質(zhì) N端序列測(cè)序，隨后設(shè)計(jì)兼并引物聯(lián)合 RTPCR）。 ? （基于數(shù)據(jù)庫(kù)，步步為營(yíng)） ? （結(jié)合表達(dá)譜芯片可以高通量獲得表達(dá)發(fā)生變化的目的基因種類(lèi)及其相對(duì)變化水平）。 元件 基因 元件 — 組裝成基因 載體 元件 — 多克隆位點(diǎn) 克隆 元件 — 銜接 物或人工接頭 引物 測(cè)序或 PCR 探針 核酸分子雜交 用 化 學(xué) 合 成 基因序列已知 同源蛋白基因 ? 文庫(kù) 是將某一物種基因組 DNA或 cDNA以克隆的方式（質(zhì)?；蚴删w）保存在大腸桿菌中的方式。 構(gòu)建cDNA文庫(kù) 文庫(kù)篩選 免疫學(xué)篩選 目的基因表達(dá) ? 目的基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)需具備如下幾個(gè)特點(diǎn)： （ 啟動(dòng)子 核糖體結(jié)合位點(diǎn) 目的基因 標(biāo)簽 轉(zhuǎn)錄終止子 ）。其中選擇組成型、組織器官特異性、發(fā)育特異性和環(huán)境誘導(dǎo)型啟動(dòng)子可以控制目的基因的特殊表達(dá)模式的需求。原核表達(dá)需要用 SD序列作為核糖體結(jié)合位點(diǎn)，而真核表達(dá)需要有帽子位點(diǎn)即可。 2. 控制表達(dá)水平，盡量減少蛋白產(chǎn)物對(duì)宿主細(xì)胞的正常生活的干擾，產(chǎn)生分泌蛋白是一個(gè)不錯(cuò)的選擇， ，可以表達(dá)一個(gè)融合標(biāo)簽（HA、 HISx CMyc、 Flag、 GST等）。 原核表達(dá)體系 真核表達(dá)體系 體外轉(zhuǎn)錄翻譯體系 表達(dá)載體 SDSPAGE of the lysate of uninduced and induced host bacteria E. coli BL21(DE3) containing the control expression vector or the rebinant expression vector and the purified rebinant protein. M protein marker, 1 lysate of E. coli BL21(DE3) containing pET30a(+) without IPTG induction, 2 pET30a(+) with IPTG induction, 3 pET30a(+)CsTRIP1 without IPTG induction, 4 pET30a(+)CsTRIP1 with IPTG induction, 5the purified rebinant CsTRIP1 protein
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