基因工程概述ppt課件(2)-在線瀏覽
2024-10-22 18:25本頁面
【正文】 過優(yōu)化連接參數(shù)可以獲得高的連接效果。 3. 連接體系一般為 1020微升，體積過大過小會影響連接效率。 體外重組線路圖 導(dǎo)入重組體 主要方法 物理學(xué) 方法：微注射技術(shù) 、 基因槍技術(shù) 、 電轉(zhuǎn) 化法 （ 電穿孔術(shù) ） 、 超聲波 化學(xué) 方法： CaCl2低滲轉(zhuǎn)化大腸桿菌 、 脂質(zhì)體介導(dǎo)法 、 PEG介導(dǎo) 生物媒介 方法： 病毒介導(dǎo)法 、 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因方法 轉(zhuǎn)化原理 負(fù)對照 實驗組 正對照 藍(lán)白篩選結(jié)果 一. 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化植物的方法 1. 根癌農(nóng)桿菌（ Agrobacterium tumefaciens)的一般性質(zhì)： 冠癭病 Ti質(zhì)粒（ Tumor inducing plasmid) TDNA (Tramsferred DNA)區(qū) Vir區(qū) * 冠癭瘤的特點： 激素自主性 冠癭堿 幻燈片 5 無正常分化能力 * 農(nóng)桿菌與 Ti－質(zhì)粒的類型： 章魚堿型（ octopine type） 胭脂堿型（ nopaline type） 農(nóng)桿堿型（ agropine type） * 冠癭堿可以分為四類： 章魚堿族 胭脂堿族 甘露堿族 農(nóng)桿素 Octopine Vir 基因的基本結(jié)構(gòu)與功能 A: TDNA的同源序列，還有 pBR的序列， 進(jìn)入農(nóng)桿菌后高頻同源重組 ， 便于篩選共整合質(zhì)粒 的限制內(nèi)切酶切點，多克隆位點 Ti質(zhì)粒的邊界序 列 bom位點序列，可以在不同細(xì)菌細(xì)胞間轉(zhuǎn)移 ： LB和 RB cell EI復(fù)制點 TDNA的整個 轉(zhuǎn)化過程 缺失啟動子 GUS表達(dá)載體轉(zhuǎn)化煙草 對照 抗性芽（ Km:100ug/ml） 生根的轉(zhuǎn)基因煙草苗（ Km:100ug/ml）
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