基因工程載體bppt課件-資料下載頁
2025-09-11 18:25本頁面
【正文】 100～ 350kb (1)轉(zhuǎn)化率高(2)提取質(zhì)粒較方便 (3)嵌合及重組現(xiàn)象少 (4)篩選目的基因 ,方便快捷(5)T7 和 Sp6 聚合酶啟動子 ,可以用于轉(zhuǎn)錄獲得 RNA 探針或直接用于插入片段的末端測序 六倍體小麥小偃 54的 BAC文庫情況小偃 54的 BAC文庫剛建成時有 937,920個克隆，約覆蓋基因組 5倍。BAC文庫共有三級：一級庫： 488塊板每個板有 384個孔每個孔里有 5個克隆二級庫：243塊板每個板是 96孔每個孔里有 58=40個克隆三級庫：保存在 1,954個 ，每個離心管中有 5812=480個克?。蝗墡焱瑫r配備有質(zhì)粒 DNA，以便于篩庫。目前三級庫可用的大約有 20個 96孔板，即 2096=1920個克隆P1派生人工染色體（ PAC）? P1噬菌體載體是在 P1噬菌體的基礎(chǔ)上構(gòu)建的克隆載體，用于克隆真核基因組 DNA。? P1派生人工染色體（ PAC)是將 BAC和 P1噬菌體載體二者優(yōu)點結(jié)合起來的克隆體系，可以克隆 100300kb的外源 DNA片段。? 特點1）含有卡那霉素抗性基因，便于篩選。2）其在宿主細(xì)胞中以單拷貝的形式存在，避免了因多拷貝造成的不穩(wěn)定。PAC載體哺乳動物人工染色體（ MAC）? 從哺乳動物細(xì)胞中分離出復(fù)制起始區(qū)、端粒以及著絲粒構(gòu)建而成的克隆載體。它可以克隆大于 1000kb的外源 DNA片段。? 應(yīng)用領(lǐng)域1）有絲分裂和減數(shù)分裂對 DNA片段大小的定量分析。2）研究哺乳動物細(xì)胞中染色體功能。3）對復(fù)雜的基因做功能分析。4）用于體細(xì)胞基因治療。人類游離人工染色體（ HAEC）? 基于人類 EB病毒而構(gòu)建的環(huán)形 DNA，含有? EB病毒的復(fù)制原點 (oriP)和 潮霉素抗性基因 。能以環(huán)形小染色體形式復(fù)制，并在有絲分裂中保持穩(wěn)定。? HAEC可能會成為基因治療的重要載體 第 5節(jié) 特殊用途克隆載體2022年第一版 P149書 名 :基因工程 作 者 :樓士林 楊昌盛 龍敏南 章軍出 版 社 :科學(xué)出版社 ISBN:7030101839幾種特殊用途載體 :1)啟動子探針克隆載體2)誘導(dǎo)表達(dá)克隆載體3)反義表達(dá)克隆載體4)組織特異性表達(dá)克隆載體5)分泌型表達(dá)克隆載體 等質(zhì) 粒 * 受體 細(xì) 胞 結(jié) 構(gòu) 插入片斷 舉 例 環(huán) 狀 〈 8* pUC18/19 , T載 體pGEM 3z等 λ 噬菌體 線 狀 9 24kb EMBL系列，Λ gt系列絲 狀噬菌體及噬菌粒 環(huán) 狀 〈 10 kb M13mp系列粘粒 載 體 環(huán) 狀 35 45kb pJB8,c2RB, pcoslEMBL, pWE15/16, pCV BAC (Bacterial Artificial Chromosome) 環(huán) 狀≈300 kb Pel oBAC系列PAC (P1derived Artificial chromosome) 環(huán) 狀 100 2022 kb PCYPAC1YAC (Yeast Artificial chromosome ) 酵母 細(xì) 胞線 性染色體 100 2022 kbMAC (Mammalian Artificial Chromosome) 哺乳 類細(xì) 胞 線 性染色體 〉 1000 kb病毒 載 體 動 物 細(xì) 胞 環(huán) 狀 SV40 載 體，昆蟲桿狀病毒 載 體穿梭 載 體 動 物 細(xì) 胞和 細(xì) 菌 環(huán) 狀 pSVK3質(zhì) 粒， PBV,Ti質(zhì) 粒載體的種類和特征質(zhì) 粒 λ噬菌體 柯斯 質(zhì) 粒 單鏈 噬菌體克隆 DNA大片段 177。* + + 構(gòu)建基因 組 文 庫 + + 構(gòu)建 DNA文 庫 + 常 規(guī) 的 亞 克隆化 + 構(gòu)建新型的 DNA結(jié) 構(gòu) + 序列分析 + +單鏈 探 針 +** +外源基因在大 腸 桿菌中的表達(dá) + 四種常用載體的比較* 外源 DNA如超過 10kb， 則重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率和 DNA得率都非常低 ** 已有個別材料可用于此目的
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