核酸的結構與功能(3)-資料下載頁
2025-08-16 02:51本頁面
【正文】 此方法簡便、快速、準確。 核酸的變性和復性 核酸的變性（ denaturation） ⑴概念 核酸的變性是指因某些理化因素的影響使維持核酸空間結構的氫鍵和疏水鍵斷裂，雙螺旋結構解體，但不涉及核 苷酸間共價鍵的斷裂。 核酸變性后，粘度降低， 紫外吸收值增高 (增色效應 )，生物功能消失。 ⑵ 影響變性的因素 破壞雙螺旋穩(wěn)定性的因素都可使 DNA變性。 DNA分子中的堿基處于配對和不配對的動態(tài)平衡狀態(tài)，很多因素會引起它向不配對方向轉變，即引起 DNA變性。如高溫、強酸、強堿、有機溶劑、尿素、酰胺等試劑、射線等。 高溫 ： DNA稀鹽溶液加熱到 80~100℃ ，幾分鐘內雙螺旋鍵即解開，形成無規(guī)則的線團。 離子強度 ：提高溶液的離子強度，可中和 DNA分子鏈上磷酸基團的負電荷，降低它們之間的排斥力，穩(wěn)定DNA的結構。 DNA通常保存在 1molNaCl中。 極端的 pH值 ： pH﹤ 1時， DNA的磷酸二酯鍵會被水解；pH﹥ ， DNA的所有氫鍵斷裂。 疏水作用 ：甲醇可增加堿基的溶解度，三氟醋酸鈉可降低 DNA分子的疏水作用，破壞雙螺旋結構引起變性。 尿素及甲酰胺： 它們可與堿基之間形成氫鍵。 堿基堆積： 氫鍵和堿基堆積是一致的，堿基堆積是一種協(xié)同作用，處于中間的堿基比兩邊的堿基穩(wěn)定，線狀雙鏈 DNA分子的兩端常有 7個未配對的堿基，因此少于 15bp的雙鏈 DNA片段極不穩(wěn)定。 ⑶ DNA的熔點（ Tm ） DNA的熱變性過程中一半分子發(fā)生變性時的溫度稱為 DNA的解鏈溫度 ( melting temperature，簡寫Tm)或熔點，用 Tm 表示。 DNA的 Tm值一般在70~85℃ 之間。 熱變性是在很狹的溫度范圍內突發(fā)的躍變過程 ， 很像結晶達到熔點時的熔化現(xiàn)象 ， 故名熔解溫度 。 The melting temperature, Tm, is defined as the temperature at which half of the maximum absorbance increase is attained. Denaturation over a narrow T range implies a cooperative process. ⑷ DNA本身性質決定了 Tm ① DNA的均一性 DNA分子中堿基組成的均一性：只含有一種堿基對的多核苷酸片段 ， 比天然 DNA的 Tm值范圍窄 。 因它在變性時的氫鏈斷裂幾乎可 ? 齊同 ? 進行 ， 故所要求的變性溫度更趨于一致 。 待測樣品 DNA的組成是否均一：如樣品中只含有一種 DNA，其 Tm值范圍較窄 ， 若混雜有其它來源的 DNA， 則 Tm值范圍較寬 。 原因也與 DNA的堿基組成有關 。 ② DNA的 (G+C)含量 Tm值的高低取決于 DNA分子中的 (G+C)的含量 。(G+C)含量越高 ， Tm值越高 。 GC堿基對有 3對氫鍵 ， AT堿基對有 2對氫鍵 ， DNA中 (G+C)含量高能增強結構的穩(wěn)定性 ， 破壞 GC間氫鍵需比 AT氫鍵付出更多的能量 ， 故 (G+C)含量高的DNA， 其變性 Tm也高 。 一定離子強度下 (DNA溶于 ): Tm與(G+C)含量 (X) 的關系可用經(jīng)驗公式表示： X%(G+C)=() RNA也有螺旋 線團之間的轉變，但由于 RNA只有局部螺旋區(qū)，所以熱變性沒有 DNA那樣明顯， Tm值較低。 tRNA結構中螺旋區(qū)較多， Tm值較高。 核酸的復性（ renaturation） ⑴概念 變性 DNA在適當?shù)臈l件下 (除去變性因素 )，可使兩條分開的鏈按照堿基配對規(guī)律重新締合成雙螺旋結構，這一過程稱為復性。復性后的 DNA其理化性質和生物功能都得到部分恢復。復性的 DNA溶液紫外吸收下降稱為減色效應。 ⑵ 影響復性的因素 熱變性 DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復性，此過程稱之為 退火。 退火 也用以描述雜交核酸分子的形成。 DNA的復性不僅受溫度影響，還受 DNA自身特性等其它因素的影響。 ATP 3’,5’cAMP 假尿苷 Am dGTP CTP m7G DNA雙螺旋的主要作用力。 、 B 、 ZDNA的差異。 mRNA結構的基本特點 、復性、分子雜交。 Tm 增色效應 減色效應
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1