核酸的結(jié)構(gòu)與功能(11)-資料下載頁(yè)
2025-08-16 02:09本頁(yè)面
【正文】 A， 統(tǒng)稱(chēng)為 非 mRNA小 RNA(small nonmessenger RNAs, snmRNAs)。 ? snmRNAs ? 核內(nèi)小 RNA ? 核仁小 RNA ? 胞質(zhì)小 RNA ? 催化性小 RNA ? 小片段干涉 RNA 參與 hnRNA的加工剪接 ? snmRNAs的 種類(lèi) ? snmRNAs的 功能 目錄 ? 核酶 某些小 RNA分子具有催化特定 RNA降解的活性 ， 這種具有催化作用的小 RNA亦被稱(chēng)為 核酶 (ribozyme) 或催化性 RNA(catalytic RNA)。 目錄 ?siRNA是生物宿主對(duì)外源侵入的基因表達(dá)的雙鏈 RNA進(jìn)行切割所產(chǎn)生的特定長(zhǎng)度和特定核酸序列的小片段 RNA。 ?siRNA可以與外源基因表達(dá)的 mRNA相結(jié)合 ，并誘發(fā)這些 mRNA的降解 。 ?基于此機(jī)理 ， 人們發(fā)明了 RNA 干擾 (RNA interference， RNAi)技術(shù) 。 ? 小片段干擾 RNA 目錄 5 ’m R N AD N A新 生 的 肽 鏈轉(zhuǎn) 錄 空 泡核 糖 體細(xì) 胞 膜? 原核生物基因表達(dá)的特異性 五、核酸在真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中表現(xiàn)了不同的時(shí)空特性 目錄 細(xì) 胞 核h n R N A5 39。轉(zhuǎn) 錄 空 泡成 熟 的 m R N A核 膜D N A轉(zhuǎn) 錄 后 修 飾R N A 轉(zhuǎn) 運(yùn)細(xì) 胞 膜細(xì) 胞 質(zhì)新 生 的 肽 鏈m7G p p pA A A . . . A A A內(nèi) 質(zhì) 網(wǎng)核 蛋 白 體? 真核生物基因表達(dá)的特異性 核酸的理化性質(zhì) The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 第四節(jié) ?核酸的酸堿及溶解度性質(zhì) ? 核酸為多元酸 ， 具有較強(qiáng)的酸性 。 ?核酸的高分子性質(zhì) ? 粘度： DNARNA dsDNA ssDNA ? 沉降行為 :不同構(gòu)象的核酸分子的沉降的速率有很大差異 ， 這是超速離心法提取和純化核酸的理論基礎(chǔ) 。 核酸在波長(zhǎng) 260nm 處有強(qiáng)烈的吸收，是由 堿基的共軛雙鍵 所決定的。這一特性常用作核酸的定性和定量分析。 一、核酸分子具有強(qiáng)烈的紫外吸收 ? 堿基的紫外吸收光譜 ?DNA或 RNA的定量 A260 = 相當(dāng)于 50μg/ml 雙鏈 DNA(dsDNA) 40μg/ml 單鏈 DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 ?確定樣品中核酸的純度 純 DNA: A260/A280 = 純 RNA: A260/A280 = ? 紫外吸收的應(yīng)用 二、 DNA變性是雙鏈解離為單鏈的過(guò)程 在某些理化因素作用下， DNA雙鏈解開(kāi)成兩條單鏈 的過(guò)程。 ? 定義 DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂。 協(xié)同性的 DNA解鏈 高溫或極端的 pH ? DNA的變性 ? 部分變性 DNA的電鏡圖像 ?增色效應(yīng) (hyperchromic effect)： DNA變性時(shí)其溶液 OD260增高 的現(xiàn)象 。 ? DNA解鏈時(shí)的 紫 外吸收變化 ? DNA的解 鏈 曲線(xiàn) 連續(xù)加熱 DNA的過(guò)程中以溫度相對(duì)于A260值作圖 ， 所得的曲線(xiàn)稱(chēng)為 解鏈曲線(xiàn) 。 解鏈過(guò)程中 ， 紫外吸光度的變化達(dá)到最大變化值的一半時(shí)所對(duì)應(yīng)的溫度 。 解鏈溫度 (melting temperature， Tm) ? G+C 含量越高 ， 解鏈溫度就越高 。 ? 解鏈 曲線(xiàn) 的變化 三、變性的核酸可以復(fù)性或形成雜交雙鏈 ?當(dāng)變性條件緩慢地除去后 ， 兩條解離的互補(bǔ)鏈可重新配對(duì) ， 恢復(fù)原來(lái)的雙螺旋結(jié)構(gòu) ， 這一現(xiàn)象稱(chēng)為 DNA復(fù)性 (renaturation) 。 ?減色效應(yīng)： DNA復(fù)性時(shí) ， 其溶液 OD260降低 。 ?熱變性的 DNA經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性 ， 這一過(guò)程稱(chēng)為 退火 (annealing) 。 ?不同種類(lèi)的 DNA單鏈分子或 RNA分子放在同一溶液中 ， 只要兩種單鏈分子之間存在著一定程度的堿基配對(duì)關(guān)系 ， 在適宜的條件可以在不同的分子間形成 雜化雙鏈 (heteroduplex)。 ?這種雜化雙鏈可以在不同的 DNA與 DNA之間形成 ， 也可以在 DNA和 RNA分子間或者 RNA與RNA分子間形成 。 這種現(xiàn)象稱(chēng)為核酸分子雜交 。 ? 核酸分子雜交 (hybridization) ? 核酸分子雜交 ?研究 DNA分子中某一種基因的位置 。 ?監(jiān)定兩種核酸分子間的序列相似性 。 ?檢測(cè)某些專(zhuān)一序列在待檢樣品中存在與否 。 ? 核酸分子雜交的應(yīng)用 第五節(jié) 核酸酶 Nuclease ?依據(jù)底物不同分類(lèi) DNA酶 (deoxyribonuclease, DNase)： 專(zhuān)一降解 DNA。 RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 專(zhuān)一降解 RNA。 ?依據(jù)切割部位不同 核酸內(nèi)切酶：分為限制性核酸內(nèi)切酶和非特異性限制性核酸內(nèi)切酶。 核酸外切酶： 5180?！? 180?；?3180?！? 180。核酸外切酶。 核酸酶 是指所有可以水解核酸的酶。 5’ 5’ 3’ 3’ 外切位點(diǎn) 外切位點(diǎn) 內(nèi)切位點(diǎn) 內(nèi)切位點(diǎn) ?參與 DNA的合成 、 修復(fù)以及 RNA的剪接 。 ?清除多余的 、 結(jié)構(gòu)和功能異常的核酸 ， 以及侵入細(xì)胞的外源性核酸 。 ?降解食物中的核酸 。 ?體外重組 DNA技術(shù)中的重要工具酶 。 ? 核酸酶的功能
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