真核表達(dá)系統(tǒng)-資料下載頁
2025-08-15 23:38本頁面
【正文】 組，迄今尚未證明與人類腫瘤有病因?qū)W上的聯(lián)系 腺病毒載體 ?容量較大：可插入 7kb ?易培養(yǎng)、純化 ?復(fù)制與轉(zhuǎn)錄依賴與宿主聚合酶 ?不整合 ?釋放殼體蛋白，引起免疫反應(yīng) 基因的導(dǎo)入方法 ?光穿孔法：激光；懸浮細(xì)胞 ?沖擊波：活體局部的基因轉(zhuǎn)移 ?基因槍法：即微粒轟擊；動(dòng)物細(xì)胞，更適用于植物細(xì)胞 ?穿孔法：脈沖電場(chǎng)； Cytomix緩沖液； 70%細(xì)胞死亡時(shí)效率最高 ?磷酸鈣共沉淀法 ?脂質(zhì)體法： Lipofectin；陽離子 ?抗體轉(zhuǎn)染法：抗 CD3， CD34或表面免疫求蛋白 ?其他：超聲波法；微注射法原生質(zhì)體融合法；反轉(zhuǎn)錄病毒感染法 表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)技術(shù) ?Western印跡法 —— 免疫學(xué)方法 —— 抗原 抗體反應(yīng) ?熒光顯微鏡法 —— 表位標(biāo)記的抗體與直接抗體進(jìn)行熒光標(biāo)記 —— 免疫學(xué)方法 Western印跡法 ?蛋白樣品制備 → SDSPAGE（ 按分子量大小） → 電轉(zhuǎn)移 → 一抗（特異性） → 二抗 →顯色 ?敏感度： 15ng 樣品的制備 ?裂解細(xì)胞 ?電泳加樣緩沖液裂解細(xì)胞（煮沸 510min） ?抽提細(xì)胞蛋白（超聲） SDSPAGE ?丙烯酰胺和 N， N`亞甲雙丙烯酰胺交聯(lián)，形成一定孔徑的分離介質(zhì)，孔徑大小由濃度決定，具有分子篩效應(yīng) ?在不連續(xù)的緩沖系統(tǒng)，具有濃縮效應(yīng) ?蛋白質(zhì)本身的電荷效應(yīng) ?SDS：陰離子去污劑，與蛋白質(zhì)結(jié)合 ?SDS濃度大于 %時(shí)，使樣品中的蛋白質(zhì)帶同樣密度的電荷 ?電泳時(shí)使蛋白遷移只與分子量有關(guān)，且呈線性（對(duì)數(shù)分子量與遷移率），可測(cè)定分子量 電轉(zhuǎn)移 ?支持介質(zhì)：重氮芐氧甲基紙（ DBP紙）、陰離子化尼龍膜、硝酸纖維素膜（ NC） ?蛋白質(zhì)帶負(fù)電，向正極遷移 ?凝膠考馬斯亮蘭染色，檢查轉(zhuǎn)移是否完全 ?膜麗春紅染色 ?標(biāo)記分子量位置 靶蛋白的免疫學(xué)檢測(cè) ?封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，脫脂奶粉或血清白蛋白 ?第一抗體：具有特異性，最好氏多抗或抗血清 ?標(biāo)記的第二抗體：同位素標(biāo)記；堿性磷酸酶（ AKP）標(biāo)記；辣根過氧化物酶（ HRP）標(biāo)記 ?注意封閉非特異性位點(diǎn) ?注意抗體濃度：尤其是一抗?jié)舛? 顯色反應(yīng) ?AKP催化 5溴 4氯 3吲哚磷酸與氮藍(lán)四唑發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生深藍(lán)色 ?HRP催化 3,3`二氨基聯(lián)苯胺與 H2O2反應(yīng)產(chǎn)生棕色條帶，易褪色，注意保存結(jié)果 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 ?概念：以動(dòng)物個(gè)體為基因受體的基因表達(dá)技術(shù)，并由于這種外源基因的導(dǎo)入而產(chǎn)生可以遺傳的變異 ?這些遺傳改變包括： ? 外源 DNA至少整合到一條染色體上 ? 由于外源 DNA的插入使任一基因發(fā)生改變 ? 由于外源 DNA的插入使染色體發(fā)生重排 ? 有意識(shí)的導(dǎo)入可以持久存在的遺傳實(shí)體 植物生物反應(yīng)器 ?生物反應(yīng)器：一種定向的生產(chǎn)系統(tǒng)，是為獲取某種產(chǎn)品而定向構(gòu)建和改造的裝置，這種裝置是最復(fù)雜最高等的生命系統(tǒng) ?特點(diǎn)：自組織，自復(fù)制，自調(diào)節(jié)，自適應(yīng) ?優(yōu)點(diǎn) ?無污染，可持續(xù)發(fā)展 ?操作簡(jiǎn)單靈活 ?成本低廉 ?可直接食用 ?穩(wěn)定，便于儲(chǔ)藏和運(yùn)輸
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