原核表達(dá)實(shí)驗(yàn)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-06 18:02本頁(yè)面
【正文】 步驟 6 DAB（ 3, 3’－二氨基聯(lián)苯二胺）顯色檢測(cè) 用 DBA顯色 KIT（ 20X）顯色操作步驟： ?將 50ul濃縮液 A（一滴）稀釋于 1ml 搖勻。 ?再向其中加入 B液 （ DAB溶液）和 C液（濃縮過(guò)氧化氫溶液）各一滴，再次混勻， （此液需現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后避光保存， 30min內(nèi)使用。） ?將洗脫好的硝酸纖維素膜轉(zhuǎn)移到一塊剪好的保鮮膜上，然后將配好的顯色液用移液器淋到硝酸纖維素膜上 （正面） ，室溫 1min內(nèi)將在目的條帶處看到棕紅色條帶。 Towbin Buffer： 25mM Tris 192mM glycine 20% methanol 10 TBS緩沖溶液（ 1L） TrisBase ， NaCl 80g ， 緩沖液配方： 第一組，第二組，第三組 配 YPD液體培養(yǎng)基 葡萄糖 20g，酵母提取物 10 g，蛋白胨 (Peptone)20g， 1L。 分裝 20ml/250ml三角瓶， 70瓶 第四組，第五組，第六組，第七組 配 BMMY液體培養(yǎng)基 3L 酵母提取物 10 g， 蛋白胨 (Peptone)20g ，酵母氮堿 ， 硫酸銨 10g，用 1L。 （ ： 1mol/L K2HPO4 ， 1mol/L KH2PO4 ，定容至 1L，調(diào)節(jié) pH，定容至 1L） 分裝 50ml/250ml 三角瓶， 60瓶 第八組， 第九組，第十組 配 LB液體培養(yǎng)基 L 胰蛋白胨 10g(TRPTONE)，酵母提取物 5g， NaCl 10g， 1L 分裝 50ml/250ml 三角瓶， 30瓶 200ml/500ml 三角瓶， 10瓶 第十一組， 第十二組，第十三組，第十四組 PA瓶 150個(gè)， 50ml離心管 100個(gè)，各式槍頭 30盒，洗好包好，滅菌 250ml三角瓶 200個(gè)洗好 500ml三角瓶 50個(gè)，試劑瓶 20個(gè)洗好 第十五組 配置 10% SDS（ w/v） 500 ml Tris甘氨酸電泳緩沖液 : 配成 5 貯存液備用，在 900ml去離子水中溶解 94g甘氨酸， 然后加入 50ml 10%（ w/v）的電泳級(jí) SDS貯存液， 用去離子水補(bǔ)至 1000ml。 脫色液 Gel Destaining Buffer 4L 甲醇 100 ml，乙酸 100 ml，加水至 1000 ml 培養(yǎng)基 ? LB培養(yǎng)基 胰蛋白胨（ TRYPTONE） 10g，酵母浸出物 5g，氯化鈉10g，調(diào) pH至 ，用蒸餾水定容至 1L。 ? YPD培養(yǎng)基 蛋白胨（ Peptone） 20g，酵母浸出物 10g，葡萄糖 20g，調(diào)節(jié) pH至 ，用蒸餾水定容至 1L。 ? BMMY 蛋白胨（ Peptone ） 20g，酵母浸出物 10g，酵母氮堿，硫酸銨 10g，用 容至 1L。
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