發(fā)育生物學(xué)——發(fā)育生物學(xué)研究技術(shù)-資料下載頁(yè)
2025-08-15 21:29本頁(yè)面
【正文】 3. 轉(zhuǎn)基因 。 Constructing knockout mice 獲得攜帶有特定基因突變個(gè)體的技術(shù)，研究基因在發(fā)育中功能的重要方法。 1) 構(gòu)建用于基因重組的突變基因結(jié)構(gòu) 2) 重組基因?qū)肱咛ジ杉?xì)胞 (ES) 3) 注射 ES入胚胎中以獲得雜合性小鼠 4) 小鼠雜交獲得純合體小鼠并進(jìn)行表型分析。 Conditional knockout 僅使靶基因在特定的組織或發(fā)育時(shí)期失活。 Crelox 系統(tǒng) 1) Cre編碼一種重組酶，可識(shí)別并結(jié)合位點(diǎn)并切除位于兩個(gè) LoxP 位點(diǎn)之間的序列。 2) 兩個(gè)品系：靶基因兩側(cè)都加入 LoxP 位點(diǎn) 。 轉(zhuǎn)入由組織特異性啟動(dòng)子控制的 cre基因 3) 小鼠雜交， cre基因會(huì)在特異性組織中表達(dá)，切除靶基因，使之失活。 Transgenic technique 1) 將外源基因注射到受精卵的細(xì)胞核中， 缺點(diǎn)是無(wú)法控制外源基因的插入情況， 只能通過(guò)后代檢查 DNA。 2) 將外源基因轉(zhuǎn)化到 ES中，同 gene knockout 3) 小鼠雜交。 發(fā)育遺傳學(xué)技術(shù) ? 反向遺傳學(xué)技術(shù)： 通過(guò)抑制性因子抑制目的基因的功能 1. RNA干擾 。 2. 嗎啉代寡聚核苷酸 (MO): 利用反義寡聚核苷酸抑制特定 mRNA (5’UTR) 的翻譯而阻斷目的基因功能的方法。主要應(yīng)用在斑馬魚(yú)和爪蟾研究中，但現(xiàn)在也用于 miRNA研究中。 RNAi 技術(shù) 1) 雙鏈 RNA抑制含其同源序列基因的表達(dá)，抑制基因表達(dá)的新方法 2) 線蟲(chóng)中：直接導(dǎo)入dsRNA。 脊椎動(dòng)物中siRNA (2123 nt) 發(fā)育遺傳學(xué)技術(shù) ? 反向遺傳學(xué)技術(shù)： 其它手段： 1. 顯性抑制 (dominant negative): 通過(guò)過(guò)量表達(dá)顯性抑制型蛋白 (是通過(guò)某種修飾或加工，可以抑制野生型蛋白功能的缺陷型蛋白 ) 以阻斷內(nèi)源蛋白的活性，研究其功能的方法。如將某些信號(hào)傳導(dǎo)受體的膜內(nèi)區(qū)域缺失等。 2. 基因捕獲 (gene trap) 與增強(qiáng)子捕獲 (enhancer trap): 是一種報(bào)道基因轉(zhuǎn)基因技術(shù)，用于獲得在某些組織中特異性表達(dá)的基因。如報(bào)道基因轉(zhuǎn)入體內(nèi)，如附近有內(nèi)源性增強(qiáng)子，就可啟動(dòng)報(bào)道基因的啟動(dòng)子激活。
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