細(xì)胞培養(yǎng)—無菌操作-資料下載頁
2025-08-15 20:37本頁面
【正文】 的顆粒。 生物污染 —霉菌 ? 霉菌是真菌界的一種真核微生物，已被稱為菌絲的多細(xì)胞絲狀體形式生長。一般情況下，霉菌污染是較易發(fā)現(xiàn)辨別的。 生物污染 —病毒 ? 病毒是一種微觀感染性物質(zhì)，利用宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行復(fù)制。病毒體積極小，因此要檢測培養(yǎng)物中有無病毒以及將其從細(xì)胞培養(yǎng)實驗室所用試劑中去除都十分困難。通過電子顯微鏡檢查、一組抗體的免疫染色、 ELISA實驗或者采用適當(dāng)病毒引物的 PCR技術(shù)可以檢測出細(xì)胞培養(yǎng)物的病毒污染 。 生物污染 —支原體 ? 支原體是一種沒有細(xì)胞壁的簡單細(xì)菌，被認(rèn)為是能夠進(jìn)行自我復(fù)制的最小微生物。由于體積極小，支原體的檢測十分困難。唯一切實有效的檢測支原體污染的方法就是采用熒光染色、 ELISA、PCR、免疫染色、放射自顯影或者微生物學(xué)測定技術(shù)定期檢測培養(yǎng)物。 無支原體細(xì)胞 支原體感染細(xì)胞 用熒光染料 Hoechst33258染色，此染料能與 DNA特異結(jié)合，可是支原體內(nèi) DNA著色，熒光顯微鏡下支原體呈綠色小點，散在細(xì)胞周圍或附于細(xì)胞表面合 生物污染 —交叉污染 ? 交叉污染雖不如微生物污染普遍，但許多細(xì)胞系與 HeLa細(xì)胞及其他生長迅速的細(xì)胞系間廣泛的交叉污染是一個明確的問題會造成嚴(yán)重后果。細(xì)胞的生長特性、形態(tài)會發(fā)生變化。無法進(jìn)行實驗研究。 ? 在進(jìn)行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細(xì)菌帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞 ? 細(xì)胞一旦 購置或從別處引入，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇培養(yǎng) 污染防治 ? 在 生產(chǎn)過程中，從器皿的洗滌、生產(chǎn)所需物品的準(zhǔn)備到細(xì)胞的生產(chǎn)所有的工作人員必須 按照 GMP和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程完成各項工作。 ? 無菌環(huán)境，確保細(xì)胞生產(chǎn)過程中的無菌，禁止在無菌間內(nèi)堆放雜物；每天生產(chǎn)結(jié)束時必須對無菌間進(jìn)行清場，并用消毒劑擦拭操作臺、地面、墻面 ? 當(dāng)發(fā)現(xiàn)有污染細(xì)胞時，及時排查原因，例如：檢查器皿和膠塞滅菌是否完全，所有的培養(yǎng)液是否合格等。查找到原因及時糾正。 ? 出現(xiàn)大規(guī)模的污染時，必須果斷的將現(xiàn)有的細(xì)胞全部淘汰， ? 重新培養(yǎng)新的細(xì)胞；在處理污染細(xì)胞的同時對無菌間進(jìn)行臭氧消毒；所用的物品全部再次進(jìn)行高壓滅菌。
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