細胞培養(yǎng)—無菌操作(專業(yè)版)
【正文】 無支原體細胞 支原體感染細胞 用熒光染料 Hoechst33258染色，此染料能與 DNA特異結(jié)合，可是支原體內(nèi) DNA著色，熒光顯微鏡下支原體呈綠色小點，散在細胞周圍或附于細胞表面合 生物污染 —交叉污染 ? 交叉污染雖不如微生物污染普遍，但許多細胞系與 HeLa細胞及其他生長迅速的細胞系間廣泛的交叉污染是一個明確的問題會造成嚴重后果。不能用手觸及已消毒器皿內(nèi)部，如已接觸，則取備品更換 ?不同種細胞實驗分次處理， 以免 交叉污染 無菌操作 —細胞處理 ?培養(yǎng)瓶打開后，應平放在臺面，瓶口保持斜向上 ?打開 的培養(yǎng)液瓶口也應保持適度傾斜放置，避免瓶口垂直放置 ?在具體操作過程中，也應注意所有的瓶口 保持 傾斜，手 或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時如吸管尖碰到瓶口，則應將吸管 丟掉 ?吸取營養(yǎng)液、 PBS、細胞懸液及其它各種用液時，均應分別使用吸管，不能混用，以防擴大污染或?qū)е录毎徊嫖廴? 無菌操作 —物品擺放 ?為 拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于 中央 ?培養(yǎng)的細胞較多時，打開的培養(yǎng)瓶蓋應按照一定的順序擺放，保證瓶子之間的蓋子不會亂蓋 無菌操作 —培養(yǎng)瓶的拿取 ?從培養(yǎng)箱內(nèi)取培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶之前，先用酒精消毒雙手，再取培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶 ?做鏡 下觀 擦時，保持蓋子是擰緊狀態(tài) ?操作結(jié)束后，培養(yǎng)瓶先擰緊瓶蓋，經(jīng) 75%酒精擦拭后放入培養(yǎng)箱 ?培養(yǎng)瓶蓋、胰酶瓶等的蓋子只有在要取液時方能打開，取完后立即燒灼旋緊。75%的酒精與細菌的滲透壓相近，可以在細菌表面蛋白未變性前逐漸不斷地向菌體內(nèi)部滲入，使細菌所有蛋白脫水、變性凝固，最終殺死細菌，酒精濃度低于 75%時，由于滲透性降低，也會影響殺菌能力。目前標準規(guī)定，滅菌過程必須使滅菌物品污染的微生物存活率減少到 106及 以下。在生物安全柜內(nèi)所形成的幾乎沒有微生物的環(huán)境中，盡量避免使用明火，酒精燈的火焰可能會影響室內(nèi)的氣流平衡。 生物污染 —支原體 ? 支原體是一種沒有細胞壁的簡單細菌，被認為是能夠
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