第二十章-蛋白質(zhì)的復(fù)性-資料下載頁(yè)
2025-08-05 10:44本頁(yè)面
【正文】 的疏水性相互結(jié)合 rhIFNγ， rhIFNβ， 重組人粒細(xì)胞集落刺激因子 rhGCCSF 離子交換色譜（ IEC） 蛋白質(zhì)與介質(zhì)間存在電荷作用力 Papiloma virus(HPV)， E7MS2 fusion protein， 重組白細(xì)胞分泌抑制因子 rSLPI，抗原疫苗蛋白 親和色譜（ AFC） 蛋白與配體的特異性親和吸附 重組人朊病毒 rhPrion，牛碳酸酐酶， IgG 蛋白質(zhì)復(fù)性 復(fù)性操作方法： 通過(guò)分子篩效應(yīng)將變性蛋白質(zhì)與變性劑加以分離 ,從而使變性蛋白質(zhì)進(jìn)入復(fù)性溶液進(jìn)行復(fù)性 . 舉例 : 核糖核酸酶 蛋白質(zhì)復(fù)性 包含體的復(fù)性 ， 對(duì)重組蛋白進(jìn)行復(fù)性 . 一般的做法是將 110mg的蛋白質(zhì)溶入 12mL的變性緩沖液中 ,使蛋白充分變性 (一般在室溫下數(shù)小時(shí)或過(guò)夜 ), 然后在 superdex75 HR10/30 或sephacryI S系列柱上進(jìn)行蛋白質(zhì)分子重折疊 ,從凝膠過(guò)濾柱上洗脫下來(lái)的樣品經(jīng)超濾濃縮回收 .利用此法成功地使分子內(nèi)有 9個(gè)半胱氨酸 ,分子量為50000Da的重組人 ETS1蛋白有效地復(fù)性 ,其構(gòu)象和天然構(gòu)象相同 . 蛋白質(zhì)復(fù)性 包含體的復(fù)性 ， 對(duì)重組蛋白進(jìn)行復(fù)性 . 此方法的另一特點(diǎn)是 ,由多亞基組成的蛋白 ,變性的亞基可以在凝膠柱上締合 ,正確重折疊 .對(duì)于在凝膠柱上進(jìn)行重折疊的機(jī)理尚不十分清楚 ,一種可能的解釋是在凝膠過(guò)濾柱上所進(jìn)行的重折疊或分子亞基之間的締合 ,是在不可逆條件下進(jìn)行的 ,因而克服了在溶液中常規(guī)重折疊過(guò)程中所遇到的主要問(wèn)題 分子折疊和分子間聚集的動(dòng)力學(xué)競(jìng)爭(zhēng) .由于在層洗柱上重折疊成天然構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子的不同流速特性 ,它們不斷地從平衡中被移走 ,因此有力于變性蛋白質(zhì)分子的重折疊 . 蛋白質(zhì)復(fù)性 復(fù)性操作方法： 利用抗原抗體 , 酶與底物相互作用幫助蛋白 質(zhì)復(fù)性也是很有效的一種手段。將抗原或抗 體，酶或底物之一固定化在凝膠上，使復(fù)性 在親和柱中進(jìn)行。 各種重組蛋白質(zhì)復(fù)性方法的比較 復(fù)性方法 復(fù)性率 蛋白濃度 過(guò)程集成性 成本 傳統(tǒng)方法 (稀釋、透析、超濾 ) 蛋白濃度低時(shí)高 蛋白濃度高時(shí)低 低 無(wú) 低 改進(jìn)后傳統(tǒng)方法（溫度跳躍、分批進(jìn)料、連續(xù)進(jìn)料） 較高 較高 無(wú) 較低 新方法 抗體法 高 高 無(wú) 高 分子伴侶法 高 高 無(wú) 高 人造 分子伴侶法 高 高 無(wú) 較低 反向微團(tuán)法 高 低 無(wú) 較低 雙水相法 不明 不明 將包涵體的溶解與蛋白的復(fù)性過(guò)程集成 較低 色譜法 高 高 將蛋白的復(fù)性與純化過(guò)程集成 較低 蛋白質(zhì)復(fù)性 復(fù)性效果的檢測(cè)與評(píng)價(jià)
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