elisa-雙抗夾心法檢測抗原-資料下載頁
2025-08-05 01:19本頁面
【正文】 1）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線： 1 Assay diluent 倍比稀釋 standard，每個梯度各取 100μl加入酶標(biāo)板，做復(fù)孔； 2）待測樣品： 取 100μl待測樣品加入酶標(biāo)板，做復(fù)孔； 3）空白對照 ：取 100μl 1 Assay diluent加入酶標(biāo)板，做復(fù)孔； 37℃ 避光孵育 1h 50ul Standard 原液 189。 188。 1/8 1/16 1/32 待測抗原 100μl 空白對照 陽性對照 每組 4位同學(xué)的加樣順序： 待測抗原 100μl 待測抗原 100μl 1. 樣本有 4種，每人選一種做復(fù)孔 2. 每組做陽參 2個孔 3. 每組做空白對照 2個孔（加樣 1 Assay buffer） 每孔加樣 100μl 待測抗原 100μl 6. 洗板： 棄去孔內(nèi)液體， PBST洗滌， 4 3min，控干； Ab: 用 1 Assay diluent 1:1000稀釋 detection Ab ，100μl /孔， 37℃ 避光孵育 1h； 8. 洗板： 棄去孔內(nèi)液體， PBST洗滌， 4 3min，控干； 9. AvidinHRP(HRP見光分解，之后所有步驟避光操作） 用 1 Assay diluent 1:250稀釋 AVHRP ， 100μl /孔， 37℃ 避光孵育 45min； 10. 洗板： 棄去孔內(nèi)液體， PBST洗滌， 5 3min，控干 ； 11. 顯色： 1 TMB solution， 100μl/ 孔， 37℃ 孵育 130min； 12. 終止反應(yīng)： 顯色完全后加 2M H2SO4 50μl/ 孔，終止顯色反應(yīng) 。450nm處讀取光密度 0D值（或者吸光度 A值） 13. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分析數(shù)據(jù) 結(jié)果判斷 ?定性實驗 顯色反應(yīng)后，如液體顏色變成藍(lán)色則為陽性；仍為無色液體，則待測樣品為陰性 ? 定量實驗 1. 標(biāo)準(zhǔn)品和 待測樣品 的 OD450值減去空白孔的 OD450值 2. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出待測樣品濃度 根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線以及待測樣品的 OD450值可計算出待測樣品中 IFNγ含量； 結(jié)果判斷 實驗報告結(jié)果分析要求： 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出待測樣品濃度？？ 標(biāo)準(zhǔn)品（原液）濃度為 2022pg/ml 讀板結(jié)果我通過 EXCELL上傳到公用郵箱，請大家記住自己的樣本所在的編號，以方便查詢 注意事項 ?加樣 ：懸空加樣， Tips不可以接觸酶標(biāo)板，及時更換Tips。將所加物加在 ELISA板孔的底部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。 ?洗板 ：每次洗液加入后，應(yīng)靜置 3分 min使清洗更加徹底。末次洗板盡量將水甩干。 ?液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒， 混勻 液體。 ?底物有 毒性 ，終止液對皮膚有腐蝕性，盡量避免接觸。 Thanks for your attention!
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