【正文】 ，觀察機(jī)體 免疫系統(tǒng)反應(yīng)在皮膚上的表現(xiàn)。 [試驗(yàn)動(dòng)物 ] 豚鼠 250~300g。 [備 皮 ] 于給藥前 24 小時(shí)將豚鼠 背部兩 側(cè)毛脫掉 ， 去 毛范圍每側(cè)約 3cm 3cm。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 2022/8/23 任立群 79 [試驗(yàn)藥物 ] 若藥物是液體 、 膏劑一般不稀釋 ， 可直接實(shí) 驗(yàn)。若藥物為固體粉末 ， 則需用適量水或適宜的 賦形劑混勻以保證藥物與皮膚的良好接觸。 陽性致敏物： — 二硝基氯代苯制成 1% 的致敏濃度和 % 的激發(fā)濃度 （用 70%乙醇配制） 。 （ 對苯二胺、二鉻化鉀、磺胺新霉素、磺化鎳等） 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 2022/8/23 任立群 80 [試驗(yàn)分組 ] 將豚鼠按體重性別隨機(jī)分成三組 ， 每組 10 只 ( 雌雄各半 ) 。第一組給藥 ， 第二組空白對照 ( 涂 賦形劑 )， 第三組陽性對照 ( 涂 陽性致敏物 )。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 2022/8/23 任立群 81 [試驗(yàn)方法 ] ? 致敏接觸 : 取藥物 ~( 或 g) 涂在動(dòng)物左側(cè)脫毛區(qū) ， 用適宜方法固定 ， 持續(xù) 6 小時(shí)。 動(dòng)物分籠飼養(yǎng)。 第 7天和第 14 天 ， 以同樣方法重復(fù)一次?？瞻讓φ战M與陽性對照組方法同上。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 局部封閉涂皮法致敏 2022/8/23 任立群 82 [試驗(yàn)方法 ] ? 激發(fā)接觸 : 于末 次給藥致敏后 14 天 ， 將藥物 ~ ( 或 g) 涂于 同一 豚鼠右側(cè)脫毛區(qū) ， 6 小時(shí)后去掉藥物 ， 即刻觀察 ， 然后于 24 、 48 、 72 小時(shí)再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況 ， 按表評分 （ 空 白 對照與陽性對照方法均同藥物 ）判斷藥物對皮膚過敏反應(yīng)性質(zhì) 。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 2022/8/23 任立群 83 皮膚致敏反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn) 皮膚反應(yīng) 分值 皮膚反應(yīng) 分值 紅斑形成： 水腫形成： 無紅斑 0 無水腫 0 輕度紅斑 1 輕度水腫 1 中度紅斑 2 中度水腫 2 重度紅斑 3 重度水腫 3 水腫性紅斑 4 最高積分 7 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 2022/8/23 任立群 84 [結(jié)果判斷與評價(jià) ] 除 按 上表評分外，還 可按 上 表 的分類判斷其致敏率。致敏率的計(jì)算是 : 將出現(xiàn)皮膚紅斑或水腫 ( 不論程度輕重 ) 的動(dòng)物例數(shù)除以受試動(dòng)物總數(shù) 。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 2022/8/23 任立群 85 致敏率分類 致敏率（ %） 反應(yīng)強(qiáng)度 1 10 弱致敏性 20 30 輕度致敏性 40 60 中度致敏性 70 80 重度致敏性 90 100 極度致敏性 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 2022/8/23 任立群 86 [試驗(yàn)方法 ] ? 致敏接觸 :第一天在豚鼠背部一側(cè)去毛區(qū)內(nèi)注射 受 試藥物溶液或乳劑 （ %）， 第二天觀察反應(yīng) ， 第三天開始繼續(xù)在同側(cè) 3cm 4cm 去毛區(qū)內(nèi)按同法給藥 ，劑量增至每次 ， 給藥 每 隔一日進(jìn)行 ， 給藥部位依次更換 ， 如此給藥 9 次。對照組不給藥。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 皮內(nèi)法致敏 2022/8/23 任立群 87 [試驗(yàn)方法 ] ? 激發(fā)接觸 :末次致敏后 14 天在豚鼠背部另一側(cè) 去毛區(qū)皮內(nèi)注射 （ %） 藥物 ， 24 小時(shí)后 觀察反應(yīng) ， 必要時(shí)在致敏后 28 天再重復(fù)進(jìn)行第二 次激發(fā) ； 對照組作同樣處理 。 [評 價(jià) ] 該法的致敏劑量準(zhǔn) 確， 對中等致敏強(qiáng)度的藥 物比較合適。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 皮內(nèi)法致敏 2022/8/23 任立群 88 [試驗(yàn)方法 ] ① 福氏完全佐劑 ( 由輕質(zhì)石蠟油或月桂基 硫酸 鈉 分 枝 桿菌 50~100μl/m1 組 成 , 臨用時(shí) 加 4:1 羊毛脂或吐溫 80 等乳化劑 , 經(jīng)高壓消 毒后 , 再與等量鹽水研磨成乳濁液 ） 。 ② 藥物。 ③ 藥物與福氏完全佐劑的等量混合物。 [受試藥的準(zhǔn)備 ] 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 皮內(nèi)和致敏相結(jié)合 2022/8/23 任立群 89 [試驗(yàn)方法 ] ?致敏接觸 : 第 1 天在豚鼠頸部 4cm 6cm 去毛區(qū)的脊 柱兩側(cè)從頭向尾成對稱 性的 皮內(nèi)注射 — ① 福氏完全佐劑 ②受試藥 ③受試藥 與福氏完全佐劑 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 皮內(nèi)和致敏相結(jié)合 2022/8/23 任立群 90 [試驗(yàn)方法 ] ?致敏接觸 : 第 8 天用 2cm 4cm 濾紙涂以適當(dāng)賦形劑配成的藥物斑 ， 貼于豚鼠頸部的注射部位 ， 持續(xù)封閉固定 48 小 時(shí)作為第二次致敏 ，以 加強(qiáng)致敏作用 。 對無皮膚刺激作用的藥物 ， 可在第 2 次致敏前 24 小時(shí)用 10% 月桂基硫酸 鈉 涂于斑貼處。對照組只用溶劑和賦形劑致敏、激發(fā) 。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 皮內(nèi)和致敏相結(jié)合 2022/8/23 任立群 91 ?激發(fā)接觸 : 末次致敏后 14~28 天分別用 2cm 2cm濾紙涂以藥物及賦形劑 ， 貼于豚鼠 肩胛 區(qū)左右兩側(cè)去毛區(qū) ， 持續(xù)封閉固定 24 小時(shí) ， 激發(fā)后 24 小時(shí)和 48 小時(shí)觀察反應(yīng) ， 對照組作同樣處理。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 皮內(nèi)和致敏相結(jié)合 [試驗(yàn)方法 ] 2022/8/23 任立群 92 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 皮內(nèi)和致敏相結(jié)合 [評 價(jià) ] 對致敏物檢測率最高 ， 尤其適用于弱致敏物 的篩選 。 此方法已被 Magnusmn（ 1980）推薦為 篩選化學(xué)物接觸 致敏 作用的標(biāo)準(zhǔn)方法。 2022/8/23 任立群 93 [結(jié)果判斷與評價(jià) ] 動(dòng)物皮膚反應(yīng)強(qiáng)度和致 敏陽性率表示 。 皮膚反應(yīng)強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)見 下表。 皮膚反應(yīng)強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn) 皮膚反應(yīng) 分值 未見改變 0 輕度散在紅斑 1 中度或融合紅斑 2 重度紅斑和水腫 3 并依此比較實(shí)驗(yàn)組和對照組所應(yīng)差異的顯著性 ， 確定被試藥物有否致敏作用。致敏 陽 性率是陽性動(dòng)物數(shù)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)比值的 百分率， 據(jù)此百分率可對藥物致敏強(qiáng)度進(jìn)行分 級。 第三節(jié) 皮膚致敏試驗(yàn) 2022/8/23 任立群 95 — 局部毒性實(shí)驗(yàn)及研究內(nèi)容 致敏作用 皮膚毒性試驗(yàn) 的內(nèi)容 皮膚急性毒性試驗(yàn)的概念 眼刺激試驗(yàn)有幾種方式 皮膚致敏試驗(yàn)有幾種方法 皮膚急性毒性試驗(yàn)的目的 選用白色家兔作眼刺激試驗(yàn)的優(yōu)越性 皮膚急性毒性試驗(yàn)、滴鼻劑和吸入劑、應(yīng)用于直腸、陰道制劑的急性毒性試驗(yàn)的劑量組如何設(shè)置？ 本章復(fù)習(xí)