【正文】 下提插注射器管芯10～20次（其間變換針頭方向3～4次），遂使腫物不同部位的多較內(nèi)容吸進入針頭和注射器內(nèi)。 （3）將注射器與針頭分離（管內(nèi)負(fù)壓因而解除）；隨后，再將該注射器與仍插于腫物內(nèi)的針頭相接，拔出針頭，穿刺結(jié)束。 （4）迅速推動注射器的管芯，盡快地將位于穿刺針頭內(nèi)的少量吸出物排射在2～3張清潔的載玻片上，進行涂片。 涂片方法：用針頭將載玻片上的吸出物輕輕均勻撥開，或用推片法朝一個方向展開（不可雙向往返推移）。 吸出物過少時，可用向離心管內(nèi)沖洗穿刺針頭；再將沖洗液離心，然后取其沉淀物涂片［參見上述一（五）項“液體涂片的制作”］。 吸出物較多時，可適量50％乙醇－生理鹽水液將涂片后注射器和針頭內(nèi)剩余的吸出物沖洗至離心管中，離心后，取其沉淀物制作常規(guī)石蠟包埋切片。 吸出物中含有細(xì)小組織塊時，應(yīng)將其制作常規(guī)石蠟包埋切片。 內(nèi)臟腫物穿刺時，必須在影象學(xué)檢查的引導(dǎo)下用較長細(xì)針進行穿刺。 穿刺操作完成后，即在細(xì)胞病理學(xué)檢查單上書寫穿刺記錄。 三、組織印片、壓片的制備 （一） 組織印片： 用鋒利刀片剖開剛切取的新鮮腫瘤組織或淋巴結(jié)等，然后用清潔載玻片輕壓于組織剖面處，將組織表面的細(xì)胞成分印在玻片上。用稍微加溫的載玻片制備印片時，可印得較多細(xì)胞。 制作淋巴結(jié)印片前，應(yīng)先用濾紙吸去淋巴結(jié)切面上的血液、組織液。 （二）壓片： 選取微小薄片組織平鋪于一張載玻片上，再用另一張載玻片疊加其上并予輕壓。 腦組織質(zhì)軟，易于制作壓片；稍硬的組織需切成細(xì)碎薄片制作壓片。 四、涂片的固定 （一）用于HE染色和巴氏染色的涂片必須濕固定，即涂片后立即進行固定。乳頭溢液涂片和液體標(biāo)本離心沉淀物涂片，應(yīng)待涂膜潮干（即周膜稍干而其中央?yún)^(qū)域未干）時進行固定。用于瑞氏染色、MayGr252。nwald姬姆薩染色和免疫細(xì)胞化學(xué)染色的涂片，必須干固定，即待涂片稍干后再進行固定。 （二）固定液 乙醇－冰醋酸液：95%乙醇∶冰醋酸＝99∶1。常用。 乙醇－乙醚液：95%, , 冰醋酸1ml。較常用。 甲醇：滴加在干燥涂片上，用于瑞氏染色、MayGr252。nwald姬姆薩染色和免疫細(xì)胞化學(xué)染色。 丙酮：適用于酶類染色。 Carnoy液：由無水乙醇、氯仿、冰醋酸按6:3:1比例混成，適用于顯示核酸、糖原、黏液染色。涂片在Carnoy液固定3～5min后，應(yīng)移入95%乙醇中繼續(xù)固定。 對于液體標(biāo)本的離心沉淀物、食管拉網(wǎng)獲取的小塊組織或吸出物中的細(xì)小組織塊等，固定于4%中性甲醛液中1h，然后制作常規(guī)石蠟包埋切片。 （三）固定方法 浸入法： （1）將稍為干燥（不能完全干燥）的涂片直接浸泡于固定液內(nèi)至少15 ～30min。 （2）因細(xì)胞容易脫落，宜以一個盛有固定液的容器只固定一例標(biāo)本的涂片；一個容器固定多例涂片時，有可能造成的腫瘤細(xì)胞交叉污染。 （3）必要時可將標(biāo)本涂在硅化載玻片上，以防脫落。 （4）固定液重復(fù)使用時，應(yīng)先用濾紙過濾。 （5）95%乙醇固定液多次重復(fù)使用時，需測定其濃度比重，乙醇濃度低于90%時應(yīng)予棄用。 滴加法：將固定液滴加于平放的干燥涂片上，應(yīng)避免因固定液揮發(fā)造成沉淀。 （四）固定后未染色涂片的保存或郵寄：涂片固定15min后取出，立即滴加數(shù)滴甘油于涂膜上。對該涂片進行染色前，應(yīng)先將其置于95%乙醇中溶去甘油。 五、涂片的染色 最常用于細(xì)胞病理學(xué)涂片檢查的是蘇木素－伊紅（HE）染色和巴氏染色。一些特殊染色、組織化學(xué)染色和免疫組織化學(xué)染色也用于細(xì)胞病理學(xué)的涂片檢查（參見第4章第一、二節(jié)）。 （一）蘇木素－伊紅（HE）染色（參見本章第一節(jié)的“六”項）。 （二）巴氏（Papanicolaou）染色 巴氏染色時，細(xì)胞透明度好，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，色彩豐富而鮮艷，主要用于婦科細(xì)胞學(xué)涂片、痰涂片和富含鱗狀上皮細(xì)胞的涂片檢查。 試劑配制 （1）Harri蘇木素液（參見本章第一節(jié)的“六”項） （2）鹽酸－乙醇液 濃鹽酸 1ml 70%乙醇 99ml （3）橙黃G6液 橙黃G6 蒸餾水 5ml 無水乙醇 95ml 磷鎢酸 先將橙黃G溶于蒸餾水中，再加入無水乙醇，然后加入磷鎢酸。（4）EA36染液 ①EA36儲備液 A液：，溶于5ml蒸餾水中，溶解后加入無水乙醇至100ml。 B液：，溶于5ml蒸餾水中，溶解后加入無水乙醇至100ml。 C液：，溶于5ml蒸餾水中，溶解后加入無水乙醇至100ml。 ②EA36工作液EA36儲備液的A液 45 mlEA36儲備液的B液 45 mlEA36儲備液的C 液 10 ml 磷鎢酸 g 碳酸鋰飽和水溶液 1 滴 染色程序 （1）將已經(jīng)固定的涂片置于80%乙醇中2 min。 （2）蒸餾水洗2 min。 （3）蘇木素液染核10～12 min，自來水洗。 （4）鹽酸乙醇液分化約20～30s，至涂片呈淡橙紅色。 （5）流水沖洗10～15min，蒸餾水洗。 （6）依次用80%、95%乙醇脫水，各2min。 （7）橙黃G6液染色3～5min。 （8）95%乙醇洗2～3次，洗去多余染液。 （9）EA36工作液染色3～5 min。 （10）95%乙醇洗2～3次，洗去多余染液。 （11）無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。 染色結(jié)果：細(xì)胞核呈深藍(lán)色，核仁呈紅色；不同分化類型的鱗狀上皮細(xì)胞，其胞漿顏色各異：角化細(xì)胞呈粉紅色，不全角化細(xì)胞呈橙黃色，角化前細(xì)胞呈淡藍(lán)或淡綠色；紅細(xì)胞呈橙紅或鮮紅色，白細(xì)胞的胞漿呈淡藍(lán)綠色；粘液呈淡藍(lán)或粉紅色。 （三）瑞氏（Wright）染色 瑞氏染色一般用于血液涂片，也可用于檢查腫瘤細(xì)胞。 試劑配制 （1）瑞氏染液 瑞氏染料 1g 甲醇 600ml 將瑞氏染料放入研缽內(nèi)，加入適量甲醇與之混合研磨，使染料逐漸溶解。將溶解的染液傾入另一玻璃瓶內(nèi)，然后再加入適量甲醇繼續(xù)研磨；未溶解的染料如此反復(fù)多次，直至染料完全溶解、甲醇用完為止。染液避光保存?zhèn)溆谩? （2）磷酸鹽緩沖液 無水磷酸氫二鈉 磷酸二氫鈉 4g 蒸餾水 1 000ml pH：～ 2.、染色程序 （1） 涂片自然干燥。 （2）滴加瑞氏液染色1min。 （3） 滴加等量的磷酸緩沖液，輕輕搖蕩玻片或用洗耳膠球在玻片上輕輕吹氣，使兩液體混合均勻，持續(xù)10～15min。 （4）流水洗去染液。 （5）涂片風(fēng)干后，二甲苯透明，中性樹膠封片。 染色結(jié)果：胞核呈紫紅色，胞漿呈紫藍(lán)色，粘液呈粉紅色或淡藍(lán)色。 （四）MayGr252。nwald姬姆薩（Giemsa）染色MayGr252。nwald姬姆薩染色適用于造血系統(tǒng)的細(xì)胞涂片和鑒別惡型淋巴瘤的類型。MayGr252。nwald原液和姬姆薩原液配制繁瑣，可直接購買。 試劑配制 （1） MayGr252。nwald工作液 MayGr252。nwald原液 1份 蒸餾水 6～10份 使用前配制。 （2）姬姆薩工作液 姬姆薩原液 1份 蒸餾水 6～10份 使用前配制。 染色程序 （1）涂片自然干燥，蒸餾水洗1～2min。 （2）MayGr252。nwald工作液染15～30min。 （3）自來水沖洗，洗去載玻片上的染液，蒸餾水稍洗。 （4）姬姆薩工作液染15～30min。 （5）自來水沖洗，洗去載玻片上的染液。 （6）涂片風(fēng)干后，二甲苯透明，中性樹膠封片。 染色結(jié)果：胞核呈紫紅色，胞漿和核仁呈藍(lán)紫色。 （五）Rakoff染色 Rakoff染色用于陰道細(xì)胞學(xué)涂片快速測定雌激素水平。 試劑配制 （1）5%淡綠水溶液 83ml （2）1%伊紅水溶液 17ml 將兩液混合后使用。 染色程序 （1）用細(xì)胞刷沿陰道側(cè)壁刷取黏膜鱗狀上皮細(xì)胞，放入裝有12ml生理鹽水的試管內(nèi)。 （2）在試管內(nèi)滴入3滴Rakoff染液，用細(xì)胞刷在染液中輕搖混合。 （3）將1~2滴混合液滴于載玻片上，制成涂片。 （4）待涂片干燥后，用中性樹膠封片。 染色結(jié)果：鱗狀上皮細(xì)胞的嗜酸性和嗜堿性胞漿區(qū)分明顯。角化前細(xì)胞的核呈網(wǎng)狀，角化細(xì)胞的固縮核呈基本不著色的空泡狀。 （六）猩紅－固綠染色猩紅－固綠染色用于顯示性染色體。 試劑配制 （1） 猩紅染液 水溶性比布里西猩紅 磷鎢酸 冰醋酸 50%酒精 100ml （2）固綠染液: 固綠 磷鉬酸 磷鎢酸 冰醋酸 50%乙醇 100ml 染色步驟 （1）涂片經(jīng)95%乙醇固定后，置于70%乙醇中2min。 （2）猩紅染液中5min。 （3）50%乙醇中漂清多余染液。 （4）固綠染液中分化2~5h。每小時在顯微鏡下觀察胞漿和網(wǎng)狀核膜是否呈現(xiàn)綠色；如果綠色滿意，立即取出涂片（一般約需4h）。固縮核呈鮮紅色。 （5）50%乙醇中5min。 （6）依次置于70%、95%和無水乙醇中各2min。 （7）置于二甲苯溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中透明，各2min。 （8）中性樹膠封片。 染色結(jié)果：胞核呈淡綠色；性染色質(zhì)呈粉紅色、V字形或貼著于細(xì)胞膜呈三角形。在性染色質(zhì)周圍可見空泡。 （七）Fouchet染色 Fouchet染色用于顯示膽色素。 染液配制 Fouchet染液 A液：25%三氯醋酸水溶液 B液：10%三氯化鐵水溶液 A、B液皆小量新鮮配制為宜。 使用時，取A、B液各