第一章核酸化學(xué)-資料下載頁
2025-08-01 15:27本頁面
【正文】 核酸制品。 注意事項 ： （ 1） 避免高溫、強酸和強堿等變性因素，在低溫（ 0－ 4度）和 PH5－ 9的條件操作。 （ 2）在制備 DNA時要避免機械力的剪切作用，操作時動作輕緩，攪拌要溫和，避免用細口滴管吸放 DNA。 （ 3）防止核酸酶的作用，特別在制備 RNA時要防止 RNA酶的降解作用。 DNA的分離純化： （ 1）在破碎細胞的同時，用濃鹽或 SDS等使蛋白質(zhì)與 DNA解聯(lián)。 （ 2）蛋白酶 K消化以使蛋白質(zhì)部分裂解。 （ 3）通過緩沖液飽和的苯酚抽提以除去蛋白。 （ 4）通過 RNAase消化使 RNA降解。 （ 5）通過透析除去小分子物質(zhì)如核苷酸、氨基酸、小分子糖。 （ 6）利用氯仿 異戊醇處理進一步除去蛋白。 （ 7） 70％乙醇沉淀 DNA. （ 8） Sepharose或 Sephadex凝膠柱純化。 （ 9）瓊脂糖凝膠電泳進一步分離和鑒定。 （ 10）線粒體、葉綠體 DNA的提取應(yīng)先分離線粒體、葉綠體。 將 DNA溶解于 PH8的 10mmol/L Tris1 mmol/L EDTA的 TE緩沖液中，在 4度以下可保存半年。 將 DNA以沉淀的形式保存在 75％乙醇中，在 20度中可以長期保存。 RNA可以凍干成干粉的形式或在含 2％的醋酸鈉的乙醇中低溫保存。 六 . 核酸、核苷酸的顏色反應(yīng)及其在分析測定上的應(yīng)用 核糖與苔黑酚反應(yīng) (670nm): RNA+濃鹽酸＋苔黑酚 藍綠色物質(zhì) （ 3,5二羥甲苯） 100度 脫氧核糖與二苯胺反應(yīng) (595nm)： DNA+冰醋酸和少量濃硫酸＋二苯胺 藍色物質(zhì) 100度 DNA含 P: ％ RNA含 P： ％ 核酸的量為磷的量的 11倍左右 先用濃硫酸將核酸、核苷酸消化，使有機磷轉(zhuǎn)化為無機磷，然后用鉬酸銨定磷試劑測定（ 660nm）。 本章重點掌握的內(nèi)容 ?基本知識：基礎(chǔ)性的框架知識 ?核酸的結(jié)構(gòu)： DNA、 tRNA和 mRNA ?核酸的性質(zhì)
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1