分光光度計(jì)基本原理與結(jié)構(gòu)-資料下載頁(yè)
2025-07-21 09:50本頁(yè)面
【正文】 器，使分辨率提高，雜散光減少．此種類型的儀器如 Perkin－ Elmer公司的Lambda－ 9型， Beckman公司的 DU60、 70型，PyE－ Unicam公司的 Pu－ 8800型，島津公司的UV－ 265型，日立公司的 U－ 3200／ U－ 3400型，Varian公司的 2200／ 2300系列等。 38 ? （三）雙波長(zhǎng)／雙光束分光光度計(jì)：由于單、雙光束分光光度計(jì)都不能克服因非特征吸收信號(hào)（如試液混濁引起的散射，比色皿 空氣界面與比色皿 溶液界面的折射差別等）的影響而帶來(lái)測(cè)量中的誤差。為此提出了雙波長(zhǎng)測(cè)定法，用雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)來(lái)測(cè)定高濃度試樣的混濁試樣以及多組分混合物的定量分析具有很大的優(yōu)越性，提高了靈敏度和準(zhǔn)確度。 Chance實(shí)驗(yàn)室在 1951年首先設(shè)計(jì)了世界上第一臺(tái)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)。以后 AmincoBowman公司、日立公司和島津公司等先后研制設(shè)計(jì)了各種類型的雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)，如 156型、 365型、 556型和 557型； UV300型、 UV3000型等。 39 40 ? 從圖 4－ 8可知雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的基本原理是：從同一個(gè)光源發(fā)出的光分成兩束，分別經(jīng)過(guò)兩個(gè)單色器，得到兩束具有不同波長(zhǎng)（ λ1和 λ2）的單色光，利用切光器使這兩束光以一定的時(shí)間間隔交替地照射到同一個(gè)試樣池。經(jīng)過(guò)光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，在記錄器上顯示出兩束光（ λ1和λ2）的吸光度差 ⊿ A，即 ⊿ A=Aλ1－ Aλ。只要 λ1和 λ2選擇得適當(dāng)（被測(cè)物在一個(gè)波長(zhǎng)上有最大吸收峰，在另一個(gè)波長(zhǎng)上則不吸收或很少吸收；而非檢測(cè)物對(duì)兩種波長(zhǎng)的吸收是相同的）， ⊿ A就為消除了非特征吸收影響（或稱扣除了“背景吸收”）的吸光度。 41 42 ? 如圖 4－ 9所示，設(shè)在雙波長(zhǎng)測(cè)定中，入射到試樣池的兩束光強(qiáng)度相同，對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)分別為 λ1和 λ2，其中 AS為背景吸收，則有 ? Aλ1＝ K1CL ＋ AS1 ? Aλ2＝ K2CL ＋ AS2 ? 若 λ1和 λ2選擇適當(dāng)，則可認(rèn)為 AS1= AS2= AS，即背景吸收相同，這樣透過(guò)試樣池的兩束光的吸光度差值為 ? ? ⊿ A= Aλ1－ Aλ2=（ K1－ K2） CL 43 ? ⊿ A= Aλ1－ Aλ2=（ K1－ K2） CL ? 從上式可看出： ⊿ A與被測(cè)組分的濃度 C成正比。這就是雙波長(zhǎng)分光光度法定量分析的依據(jù)。 ? 下面以吸收點(diǎn)法測(cè)定二組分混合物中單個(gè)組分的含量為例，說(shuō)明雙波長(zhǎng)分光測(cè)定的特點(diǎn)。如圖 49所示，圖中 A為干擾組分的吸收光譜； B為待測(cè)組分的吸收光譜； C為A和 B的混合物的吸收光譜。選擇 A組分顯示相等吸光度的兩個(gè)波長(zhǎng) λ1和 λ2，則不管 A組分濃度如何變化 44 ? ⊿ A= Aλ1－ Aλ2=0 ? 因此測(cè)定混合物 C在 λ1和 λ2的吸光度差值，實(shí)際上就是 B組分在 λ1和 λ2的吸光度差。由此可直接求得 B組分的含量。 ? 這里必須指出：根據(jù)吸收曲線選擇 λ1和λ2時(shí)，應(yīng)滿足以下兩個(gè)基本條件，即干擾組分在這兩個(gè)波長(zhǎng)應(yīng)具有相同的吸光度，使干擾組分濃度的變化不影響測(cè)量值。其次，被測(cè)組分在這兩個(gè)選定波長(zhǎng)的吸光度差值應(yīng)足夠大，以便有足夠的靈敏度。 45 ? 從上述分析可看出，雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)有很多優(yōu)點(diǎn)。首先它不用參比溶液，只用一個(gè)待測(cè)溶液，完全扣除了背景噪聲的干擾，也大大提高了測(cè)定的準(zhǔn)確度，可用于微量成分的測(cè)定；其次可用于相互有干擾的多組分混合物中，不經(jīng)分離可直接進(jìn)行各組分的分析。對(duì)于生物材料、醫(yī)藥、食品等試樣的分析具有特殊重要意義。
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