【正文】 :00 出 95%乙醇5 9:00 出 95%乙醇6 10:00 出 100%乙醇7 11:00出 100%乙醇 8 11:30 出 二甲苯9 12:00 出 二甲苯10 13:00 出 石蠟（70℃） 11 14:00 出 石蠟（70℃）12 15:00出石蠟（70℃） 　 程序二： 時(shí)間 試劑10:00 運(yùn)行12小時(shí)1 22:00 出 10％中性福爾馬林溶液（10%固定液）2 23:00 出 80%乙醇3 00:00 出 95%乙醇4 1:00 出 95%乙醇5 2:00 出 95%乙醇6 3:00 出 100%乙醇7 4:00出 100%乙醇 8 4:30 出 二甲苯9 5:00 出 二甲苯10 6:00 出 石蠟（70℃）11 7:00 出 石蠟（70℃）12 8:00 出 石蠟（70℃）上述脫水、浸蠟及時(shí)間控制程序是經(jīng)過長(zhǎng)期的實(shí)際工作總結(jié)，并適合免疫組化的質(zhì)量要求，一年四季的溫度、濕度變化等編制而成的。其中考慮到每種化學(xué)試劑的具體作用，特性和取材類型，在實(shí)際的工作應(yīng)用中其效果，原則上滿意，可以保證常規(guī)切片的質(zhì)量。如今后有工作人員需要對(duì)上述脫水、浸蠟時(shí)間程序改動(dòng)，除了要考慮到上述因素之外，先提交申請(qǐng)，申明改動(dòng)的理由及改進(jìn)原理，經(jīng)科主任批準(zhǔn)后，可以開始批量試驗(yàn)。在新程序不成熟以前，不準(zhǔn)日常工作應(yīng)用！待批量結(jié)果實(shí)驗(yàn)以后，經(jīng)全科工作人員對(duì)此進(jìn)行評(píng)估，決定應(yīng)用與否。如違背此規(guī)定，擅自改動(dòng)者，為第一責(zé)任人，出現(xiàn)差錯(cuò)者應(yīng)受相應(yīng)的處分。工作中自動(dòng)脫水機(jī)使用時(shí)的注意事項(xiàng)：1. 按脫水、透明、浸蠟順序設(shè)置試劑缸，缸的位置要準(zhǔn)確，使標(biāo)本掛籃升降轉(zhuǎn)換時(shí)準(zhǔn)確落入下一級(jí)缸內(nèi) 。2. 保持各試劑缸內(nèi)的試劑液面有足夠的高度，以使組織全部侵入液體內(nèi)。3. 按設(shè)計(jì)好的組織處理時(shí)間表，調(diào)定時(shí)間控制裝置。4. 調(diào)定浸蠟缸溫度，一般要高出所用石蠟熔點(diǎn)溫度2℃左右。5. 將盛有組織塊的掛籃掛于升降架的掛鉤上，使之落入第一個(gè)脫水缸內(nèi)，啟動(dòng)機(jī)器后開始計(jì)時(shí)運(yùn)轉(zhuǎn)。6. 當(dāng)完成最后一道程序后，應(yīng)及時(shí)取出標(biāo)本進(jìn)行包埋（必要時(shí)隨手關(guān)機(jī)）。組織包埋程序1. 包埋劑及其使用范圍：用于組織包埋的材料有石蠟、碳蠟、火棉膠和各種塑料（甲基丙烯酸甲酯，環(huán)氧樹脂，Epon等）。石蠟是最常用的組織包埋劑。甲基丙烯酸甲酯的硬度很強(qiáng)，多用于未脫鈣骨組織的包埋。環(huán)氧樹脂和甲基丙烯酸甲酯同樣需要更復(fù)雜的包埋處理過程。Epon主要用于電鏡組織的包埋。碳蠟包埋的主要優(yōu)點(diǎn)是不經(jīng)過脫水與透明處理，故組織塊收縮較少，所以特別適用于脂肪及類脂的制片?；鹈弈z主要用于大塊組織和眼球的包埋，對(duì)研究神經(jīng)組織和眼球等有一定的幫助。塑料包埋需要特殊試劑脫水和透明，全過程必須手工操作。塑料包埋多用于骨髓穿刺，腎穿刺和肝穿刺等小塊組織的包埋。石蠟包埋是一種常規(guī)包埋法，組織從脫水機(jī)中取出后仍在脫水盒內(nèi)，必須人工將組織從脫水盒中取出來，然后放進(jìn)包埋框里排列整齊，調(diào)整好方位，再灌滿（62℃）熔化的石蠟。2. 包埋步驟：（1）包埋時(shí)的用蠟需預(yù)先熔化，充分沉淀后使用。（2）將熔蠟注入蠟?zāi)?nèi)，將鑷子在酒精燈上加溫，夾持浸好蠟的組織塊，選擇好包埋面，將其朝下埋入熔蠟內(nèi)，用鑷子輕輕按壓，使組織在蠟中并緊貼蠟?zāi)５撞俊ｋS即將組織塊號(hào)碼簽嵌入熔蠟的一側(cè)。（3）待熔蠟表面凝固后，可投入流水中、放進(jìn)冰箱冷凍室或包埋機(jī)冷臺(tái)上促凝。（4）待蠟完全凝固后脫模，并把蠟塊四周適當(dāng)修切。組織周圍應(yīng)留有1~2mm的蠟邊。提倡使用石蠟包埋機(jī)，質(zhì)量更好！3. 包埋面的選擇：（1）一般情況下以組織最大面為包埋面。（2）管狀結(jié)構(gòu)的組織以橫切面為包埋面。（3）皮膚組織或有表層上皮的組織，包埋面應(yīng)垂直于上皮表面。（4）帶有病變特點(diǎn)的組織，或者對(duì)包埋面有特別要求的組織應(yīng)按預(yù)先標(biāo)記的包埋。組織處理、包埋程序的質(zhì)量控制：1. 取材后對(duì)固定不充分的組織，應(yīng)補(bǔ)充固定（固定時(shí)間：大標(biāo)本固定時(shí)間不得少于18小時(shí)；小標(biāo)本不得少于6小時(shí)。固定液必須定時(shí)更換（標(biāo)本固定時(shí)間過長(zhǎng)者，應(yīng)流水沖洗）；有條件的單位應(yīng)將大、小標(biāo)本分開固定、脫水。2. 固定、脫水溫度不得高于37℃。3. 試劑必須定時(shí)更換。（詳見試劑的配制及更換）。4. 包埋用石蠟必須定期過濾，蠟溫應(yīng)控制在62℃左右。5. 包埋時(shí)應(yīng)嚴(yán)格分塊包埋，并同時(shí)包入相應(yīng)的小號(hào)，切勿包錯(cuò)。不得將來歷不明的碎組織塊任意包入，以防污染。6. 組織包埋完成后必須進(jìn)行清點(diǎn)蠟塊數(shù)量，以防組織塊在脫水、包埋過程中遺失。五、 組織切片程序及質(zhì)量控制石蠟切片程序：組織包埋后必須切成薄片，再貼到載玻片上。需使用的設(shè)備：切片機(jī)、切片刀、水浴鍋或撈烤片機(jī)等。切片機(jī)多為輪轉(zhuǎn)式，也有滑動(dòng)式石蠟切片機(jī)。切片機(jī)的壽命一般都比較長(zhǎng)。切片刀有隨機(jī)配備的厚金屬刀和一次性的刀架、刀片。前者允許用戶多次的磨用，但價(jià)格比較貴。提倡使用高檔切片機(jī)和一次性刀架、刀片，工作質(zhì)量更好?。ㄋ芰习駢K用玻璃刀和鉆石刀切片，玻璃刀可以切大約1μm厚度的切片）。組織切片是一門精細(xì)的技術(shù)，需要花費(fèi)一定的時(shí)間練習(xí)，才能熟練掌握這門技術(shù)。磨刀是組織切片技術(shù)中的一部分，刀磨的快才能切得好，才能出效率。刀不快時(shí)切片會(huì)發(fā)生卷起，皺縮，或切片不能形成蠟帶。磨刀機(jī)每5秒鐘翻刀一次，磨40分鐘為好（因每個(gè)單位用刀情況不一樣，可以摸索一個(gè)磨刀時(shí)間）。磨刀時(shí)要蓋好磨刀機(jī)的上蓋，不讓灰塵落到磨盤上。研磨膏不要經(jīng)常更換，研磨膏不足時(shí)可以加一些與原來粒度一樣的研磨膏。如果發(fā)現(xiàn)磨刀時(shí)切片刀出現(xiàn)一些新豁口，或用手指在磨盤上蘸一點(diǎn)研磨膏兩個(gè)手指研磨感到研磨膏內(nèi)有沙粒時(shí)，磨盤應(yīng)清洗，研磨膏須更換。磨盤與切片刀的角度不能經(jīng)常改變！最好不變動(dòng)！石蠟切片質(zhì)量控制：1. 切片前首先裝好切片刀，把刀牢牢固定，否則，切片中就會(huì)發(fā)生許多人為現(xiàn)象。（最常見的人為現(xiàn)象是波紋，厚薄不均等）。2. 蠟塊裝到切片機(jī)的蠟塊夾上，夾持要平穩(wěn)牢固。調(diào)整好蠟塊的方位，不能偏斜，刀刃與蠟塊的上、下緣平行。切片刀與蠟塊的平面之間應(yīng)保持一定的角度（清除角），一般為3～8度，以免刀刃面將組織刮壞。3. 修蠟塊時(shí)要循序漸進(jìn)，力爭(zhēng)修出最大面，又要防止小組織被修壞、修光。4. 切片時(shí)連續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)手輪，用力要平穩(wěn)、均勻。常規(guī)切片厚3～5μm。5. 切下的蠟片相連成帶狀。待蠟帶切至一定長(zhǎng)度時(shí)，右手用鑷子夾住蠟片末端，左手持毛筆輕輕將蠟帶的另一端與切片刀撥離。6. 將蠟片較光滑的一面朝下置于溫水中（通常撈片水溫在42℃左右），并用鑷子幫助展開，去除皺紋后，選擇完整、無劃痕、厚薄均勻的蠟片，附貼到載玻片上。7. 附貼時(shí)，務(wù)使蠟片與玻片之間無氣泡。玻片一端應(yīng)留有1/3的位置貼號(hào)碼標(biāo)簽用。將蠟片附貼在另外2/3的中心位置。8. 切片放入62℃烤箱中約30～60分鐘烤片，以免發(fā)生脫片。為了防止脫片可以選用涂甘油蛋清片和掛膠片。比較常用的掛膠片有明膠片，APES膠片和多聚賴氨酸膠片等，免疫組化染色尤需要使用膠片。冷凍切片程序:在手術(shù)過程中，外科大夫?yàn)榱嗣鞔_手術(shù)切除標(biāo)本的性質(zhì)及病變。通常送新鮮組織做冷凍切片病理檢查，由病理醫(yī)師在短時(shí)間內(nèi)（一般30分鐘左右）做出病理診斷。外科醫(yī)生根據(jù)病理診斷，決定手術(shù)切除范圍。冷凍切片需要一臺(tái)具有冷凍功能的切片機(jī)。常用冷凍切片機(jī)有以下幾種類型：①恒冷式冷凍切片機(jī)，切片機(jī)裝在恒冷柜內(nèi)，恒冷柜內(nèi)的溫度大約20～30℃。冷凍切片質(zhì)量控制：1. 選取適當(dāng)?shù)男迈r組織塊，放在冷凍托上，放入冷凍切片機(jī)中凍透。2. 修塊、切片。冷凍切片通常厚6～8μm并把切片貼于載玻片上。3. 在酒精燈上輕烤片刻，放入固定液中2分鐘。4. 然后快速HE染色（可在酒精燈上加熱進(jìn)行，以縮短時(shí)間）。5. 封片、貼標(biāo)簽后，送診斷室（20分鐘之內(nèi)完成）。HE染色程序及注意事項(xiàng)：1. 組織經(jīng)過石蠟包埋切片后，因含蠟的切片無法進(jìn)行染色，必須反向脫去切片上組織中的蠟，讓水溶性染料滲入切片中。所以在染色前必須用二甲苯或替換劑進(jìn)行徹底脫蠟，然后用乙醇洗，最后再用水洗。即組織切片→二甲苯→乙醇（無水乙醇，95%......50% ）→水。人們通常把這個(gè)過程叫做切片脫蠟至水。2. 含有升汞的固定液固定的組織切片，%碘酒精處理5~15分鐘，去除切片內(nèi)的汞鹽沉淀。水洗后用5%硫代硫酸鈉水溶液處理2~5分鐘脫去碘色，再經(jīng)流水充分水洗。3. 固定在福爾馬林液中時(shí)間較久的組織，易產(chǎn)生黑褐色結(jié)晶狀色素，影響切片染色結(jié)果。故含此色素的切片，在脫蠟水化后，可用下列方法去除該色素。a) 氨水－雙氧水浸泡法：將切片浸入氨水－雙氧水溶液（3%雙氧水25ml，加濃氨水1~2滴），1~2小時(shí)后充分水洗。b) 氨水酒精浸泡法：將切片浸入氨水酒精溶液（75%）中，半小時(shí)后充分水洗。c) 堿酒精浸泡法：將切片浸入堿酒精液（75%酒精100ml加1%氫氧化鈉1ml）中，10分鐘后充分水洗。4. 染色注意事項(xiàng)：a) 配制染液和其他溶液時(shí)，要根據(jù)需要和染液的保存期限決定配制數(shù)量。b) 需要保存再用的染液和試劑，必須貼上標(biāo)簽，注明名稱、濃度、配制日期和用處等，妥善存放。經(jīng)常使用的染液和試劑要經(jīng)常過濾或更換新液。c) 染色器皿須洗滌干凈。必要時(shí)用酸洗液處理。將玻璃器皿浸泡于酸洗液中半天至1天，自來水沖洗數(shù)小時(shí)，再用洗滌劑刷洗，自來水沖洗數(shù)小時(shí)，蒸餾水沖洗后備用。（酸洗液配制：重鉻酸鉀300g，硫酸300ml，蒸餾水（可用自來水）3000ml。先將重鉻酸鉀溶解在蒸餾水中，徐徐加入硫酸。注意：加酸時(shí)必須緩慢！并用玻璃棒不停地?cái)嚢瑁。ヾ) 蓋玻片使用前清潔處理，方法為：(a).自來水沖洗一遍。(b).逐片放入酸洗液內(nèi)浸泡數(shù)小時(shí)。(c).自來水流水沖洗數(shù)小時(shí)。(d).95%酒精浸泡1小時(shí)以上，擦凈備用。染色是利用染料的不同作用，使組織與染料以不同方式進(jìn)行結(jié)合。常規(guī)染色是蘇木精和伊紅染色（簡(jiǎn)稱HE染色）。特殊染色是根據(jù)診斷的需要對(duì)組織中的某些成分進(jìn)行非常規(guī)的染色。冷凍切片也用HE染色。少量或單個(gè)冷凍切片時(shí)手工操作比較方便。冷凍切片染染色要求在短時(shí)間（10～15分鐘）內(nèi)完成，在保證質(zhì)量的前提下!! 越快越好。切片質(zhì)量控制：1. 診斷人員在接到當(dāng)日切片并驗(yàn)收后，檢查、核實(shí)所制作的組織學(xué)切片的數(shù)量及質(zhì)量，在技術(shù)室送片記錄本或工作流程單上簽字。如發(fā)現(xiàn)切片數(shù)與取材數(shù)不符，應(yīng)及時(shí)與技術(shù)人員聯(lián)系，進(jìn)行核查。對(duì)當(dāng)天質(zhì)量不好的切片做記錄，指明技術(shù)上存在的缺陷，并于當(dāng)天交技術(shù)室。2. 技術(shù)室收到切片質(zhì)量記錄，要求在24小時(shí)內(nèi)答復(fù)，并立即糾正原不足之處。另外，科內(nèi)質(zhì)量管理小組按分工，每月按時(shí)間順序復(fù)查切片一次，查出問題要采取適當(dāng)措施于以糾正，并注意落實(shí)情況。3. 切片是技術(shù)含量很高的步驟，同一蠟塊，用同一臺(tái)切片機(jī)，同一把刀，不同的操作者會(huì)切出不同質(zhì)量的片子。所以要求：切片刀必須鋒利；切片厚度3～5μm，切片完整，無污染，無皺褶，無刀痕。組織片應(yīng)貼附在標(biāo)簽外，剩余玻片的中間。4. 胃鏡、纖維支氣管鏡、穿刺等小活檢組織切片須作連續(xù)性切片，數(shù)量不得少于6張（6～20張）。5. 切片、撈片時(shí)應(yīng)嚴(yán)格分塊完成，切忌在水面上殘留上一塊的碎片，以杜絕污染。6. 貼（裱）片時(shí)，必須注意蠟塊編號(hào)與載玻片上的編號(hào)完全一致，杜絕錯(cuò)誤。7. 切好的白片要進(jìn)行烤片化蠟?？酒瑴囟葢?yīng)在60～62℃左右，時(shí)間不能少于20分鐘。8. 染色必須按程序操作，染色試劑必須及時(shí)過慮或更換。HE染色適中，核、漿分化對(duì)比清晰，避免過紅或過藍(lán)（注意防止蘇木素渣子和伊紅碎片出現(xiàn)）。9. 切片封固前必須經(jīng)酒精充分脫水，二甲苯透明，濕封。不得用溫箱烤干或電吹風(fēng)吹得過分干燥，再封片。 10. 蓋玻片使用前必須清洗。（真空包裝除外）。封片時(shí)不得有氣泡，不得有樹膠外溢。11. 標(biāo)簽貼于玻片一側(cè)，編號(hào)字跡必須清楚、整齊，且不易褪色，有條件者盡量采用打?。床桓赡z標(biāo)簽）。12. 染好切片后貼標(biāo)簽時(shí)，編號(hào)要與玻片編號(hào)一致，杜絕錯(cuò)誤。13. 制片工作一般應(yīng)在12～24小時(shí)內(nèi)完成。切片完成后交付醫(yī)師時(shí)，必須按照記錄當(dāng)面清點(diǎn)（可實(shí)行交接班簽字手續(xù) ）。鏡下觀察切片質(zhì)量控制：1. 切片內(nèi)有明顯污染組織，應(yīng)與技術(shù)人員聯(lián)系，并共同檢查、處理。2. 切片內(nèi)容與送檢組織不符，應(yīng)分別與技術(shù)人員和取材者聯(lián)系，必要時(shí)要與送檢科室聯(lián)系。3. 切片或染色質(zhì)量差，應(yīng)與技術(shù)人員聯(lián)系，提醒改進(jìn)工作，必要時(shí)重新制片。4. 為充分觀察病變需做深切、連續(xù)切、特染、免疫組化等，應(yīng)在申請(qǐng)單備注欄或工作流程單上寫出意見、項(xiàng)目并簽名，交付技術(shù)室有關(guān)人員。5. 實(shí)行初、中、高三級(jí)醫(yī)師閱片把關(guān)責(zé)任制，逐級(jí)復(fù)查，避免差錯(cuò)及誤、漏診。六、 病理細(xì)胞學(xué)檢查質(zhì)量控制1. 細(xì)胞學(xué)檢查是病理診斷最簡(jiǎn)便的方法。采取人體體表、體腔及深部臟器組織的脫落物、分泌物、表面附著物或穿刺物進(jìn)行涂片、染色，觀察其中的細(xì)胞形態(tài)，查找癌細(xì)胞并做出病理診斷，統(tǒng)稱細(xì)胞學(xué)檢查。2. 痰查癌細(xì)胞：須采用深部新鮮痰。病人晨起，棄去第一口痰，漱口后留取深部咳出的痰，放在不易干燥、表淺容器中送檢。一般要連續(xù)送3天，確定陽(yáng)性或陰性。胸腹水、尿等，取材后應(yīng)立即送檢，量不得少于10ml。子宮頸刮片、穿刺涂片和支氣管刷片等，要