【正文】 性與復雜性變異剪接是從相對簡單的基因組提高蛋白質組多樣性的重要機制，蛋白質組的多樣性與多細胞高等生物的復雜性相適應。從變異剪接涉及的基因分布格局分析，變異剪接多發(fā)生在參與信號傳導和表達調節(jié)等復雜過程的基因上，如受體，信號傳導通路（凋亡），轉錄因子等。對個體分化發(fā)育和一些關鍵的細胞生理過程如凋亡、細胞興奮等的精確調控有重要意義。從變異剪接涉及的基因系統(tǒng)分類分析，變異剪接多發(fā)生在免疫和神經等復雜系統(tǒng)。 ERCC1表達與卵巢上皮癌患者化療反應及生存期的關系鉑類藥物通過與DNA形成加合物(PtDNA adduct)而殺傷腫瘤細胞，NER系統(tǒng)中的關鍵酶ERCC1負責識別此加合物并將其切除，導致腫瘤對鉑類藥物耐藥[5, 6]。ERCC1的mRNA表達水平能夠預測腫瘤患者的化療反應與生存期。本次研究檢測了63例卵巢上皮癌組織中ERCC1基因的mRNA表達水平，顯示對化療耐藥組的ERCC1 mRNA表達水平明顯高于敏感組，表明ERCC1與卵巢癌耐藥有關，其高表達是卵巢癌的耐藥機制之一。隨訪資料的生存分析表明，ERCC1的表達水平與患者的術后生存期相關，表達水平高者生存時間明顯短于表達水平低者（對數秩檢驗，P=），表明ERCC1的表達是影響患者術后生存時間的因素。 ERCC1變異剪接在卵巢上皮癌患者中的臨床意義變異剪接（alternative splicing）是真核生物中廣泛存在的一個現(xiàn)象，對腫瘤的生物學行為有一定的影響，在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中也伴隨著一些基因的變異剪接[7]?；A研究顯示，ERCC1基因共計含有10個外顯子，轉錄為premRNA后，剪接為成熟mRNA時存在兩種剪接形式，一種為含有全部10個外顯子的全長剪接體，另一種為缺失第VIII外顯子，僅含9個外顯子的變異剪接體。不同的細胞中均含有比例不同的兩種剪接體。本次研究檢測了63例卵巢上皮癌組織中缺失第VIII外顯子的變異剪接體的表達情況，顯示此變異剪接體的表達水平波動范圍甚大，最高值是最低值的70倍，所占ERCC1 %%。統(tǒng)計分析表明變異剪接體的表達水平在化療耐藥組和敏感組間無統(tǒng)計學差異，對隨訪資料的生存分析顯示變異剪接體的表達水平與患者的術后生存時間不相關，提示缺失第VIII外顯子的ERCC1變異剪接體無臨床意義，可能是無DNA修復功能的轉錄產物?；A研究也表明，此變異剪接不能增強細胞對順鉑的抵抗性；含10個外顯子全長轉錄子則可顯著增強細胞的DNA修復功能。同時，本次研究結果也顯示，若在ERCC1總量中剔除缺失第VIII外顯子變異剪接體的表達量，僅分析含10個外顯子全長ERCC1的表達水平與化療反應及術后生存期的關系，則可以獲得更小的P值。本章小結卵巢癌、宮頸癌和子宮內膜癌是婦產科最常見的三大惡性腫瘤，隨著宮頸癌和子宮內膜癌的早期診斷和治療已經取得了巨大的進步，卵巢癌已經成為嚴重威脅女性生命的惡性腫瘤，發(fā)現(xiàn)之時多已處于晚期，五年生存率一直在25%～30%徘徊。本次研究所納入的63例患者，%（53例），%，%。大多患者在診斷之時已處于晚期,一半的病人處于低分化階段。顯示卵巢癌患者在確診時，已經處于晚期，預后不良。卵巢癌的早期發(fā)現(xiàn)和診治尤其顯得重要。除手術外，化學治療是卵巢癌的主要輔助治療方法，多使用以順鉑為基礎的聯(lián)合化療，常用一線方案為順鉑聯(lián)合環(huán)磷酰胺或順鉑聯(lián)合紫杉醇，多采用靜脈化療或腹腔化療或者兩途徑聯(lián)合用藥。術后及時化療，既可預防術后的復發(fā)，也可用于手術未能全部切除者，反應良好的部分患者可獲暫時緩解，甚至長期存活。然而有20%到30% 的患者對一線化療藥物始終無反應，初治有反應的患者仍有部分會發(fā)生繼發(fā)耐藥，大大降低了化療的效果，患者生存質量差，預后不佳。本次研究納入的63例患者均接受了一次腹腔途徑用藥，均接受了至少4個療程的順鉑與環(huán)磷酰胺或者順鉑與紫杉醇的聯(lián)合化療。%（29例）的患者對化療無反應（耐藥），顯示患者對化療的耐藥是一個嚴重的問題?？傊敬窝芯拷Y果顯示ERCC1 mRNA表達水平能夠預測卵巢上皮癌患者的化療反應性及術后生存期，ERCC1表達水平高意味著患者更有可能對化療耐藥，能從化療中獲得的益處少，術后生存時間更短；表達水平低則相反，意味著患者更有可能對化療敏感，能從化療中獲得的益處多，術后生存時間更長。早期的基礎研究顯示，ERCC1基因共計含有10個外顯子，轉錄為premRNA后，當剪接為成熟mRNA時存在兩種剪接形式，一種為含有全部10個外顯子的全長剪接體，另一種為缺失第VIII外顯子，僅含9個外顯子的變異剪接體。不同的細胞中均含有比例不同的兩種剪接體。本次研究使用TaqMan實時熒光定量RTPCR技術，設計一條長27bp的TaqMan探針，前17bp（AGGACTTCGTCTCCCGG）位于第VII外顯子的339。末端，后10bp（TCTCTGGAAC）位于第IX外顯子的5’始端，從而可檢測出細胞內缺失第VIII外顯子變異剪接體的表達水平。本研究顯示，缺失第VIII外顯子，僅含9個外顯子的ERCC1變異剪接轉錄產物不是影響患者預后的因素，無臨床意義，是無DNA修復功能的轉錄產物?；A研究也表明，將此變異剪接的表達載體轉入ERCC1功能缺陷的CHO433B細胞系并不能增強CHO433B細胞對順鉑的抵抗性；而轉入含10個外顯子全長轉錄子的表達載體則可顯著增強CHO433B細胞的DNA修復功能。本次研究結果亦顯示，若在ERCC1總量中剔除缺失第VIII外顯子變異剪接體的表達量，僅分析含10個外顯子全長ERCC1的表達水平與化療反應及術后生存期的關系，則可以獲得更小的P值，更有統(tǒng)計學差異。第三章參考文獻[1] Wooster R, Weber BL. Breast and ovarian cancer. N Engl J Med, 2003, 348(23): 23392347[2] Armstrong DK, Bundy B, Wenzel L, Huang HQ, Baergen R, Lele S, Copeland LJ, Walker JL, Burger RA. Intraperitoneal cisplatin and paclitaxel in ovarian cancer. N Engl J Med, 2006, 354(1): 3443[3] Ozols RF, Bookman MA, Young RC. Intraperitoneal chemotherapy for ovarian cancer. N Engl J Med, 2006, 354(15): 16411643。 author reply 16411643[4] van Duin M, de Wit J, Odijk H, Westerveld A, Yasui A, Koken HM, Hoeijmakers JH, Bootsma D. Molecular characterization of the human excision repair gene ERCC1: cDNA cloning and amino acid homology with the yeast DNA repair gene RAD10. Cell, 1986, 44(6): 913923[5] van Duin M, Koken MH, van den Tol J, ten Dijke P, Odijk H, Westerveld A, Bootsma D, Hoeijmakers JH. Genomic characterization of the human DNA excision repair gene ERCC1. Nucleic Acids Res, 1987, 15(22): 91959213[6] Li Q, Gardner K, Zhang L, Tsang B, BostickBruton F, Reed E. Cisplatin Induction of ERCC1 mRNA Expression in A2780/CP70 Human Ovarian Cancer Cells. J. Biol. Chem., 1998, 273(36): 2341923425[7] Li Q, Tsang B, BostickBruton F, Reed E. Modulation of excision repair cross plementation group 1 (ERCC1) mRNA expression by pharmacological agents in human ovarian carcinoma cells. Biochem Pharmacol, 1999, 57(4): 347353[8] Wilson MD, Ruttan CC, Koop BF, Glickman BW. ERCC1: a parative genomic perspective. Environ Mol Mutagen, 2001, 38(23): 209215[9] Martin LP, Hamilton TC, Schilder RJ. Platinum resistance: the role of DNA repair pathways. Clin Cancer Res, 2008, 14(5): 12911295[10] Klinck R, Bramard A, Inkel L, DufresneMartin G, GervaisBird J, Madden R, Paquet ER, Koh C, Venables JP, Prinos P, JilaveanuPelmus M, Wellinger R, Rancourt C, Chabot B, Abou Elela S. Multiple alternative splicing markers for ovarian cancer. Cancer Res, 2008, 68(3): 65766334 / 34