【正文】 和性，這兩種特性是由抗原與抗體分子的一級結(jié)構(gòu)決定的?？乖贵w反應分為兩個階段：第一階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合階段，此階段反應快，僅需幾秒鐘至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見反應。第二階段為可見反應階段，抗原抗體復合物在環(huán)境因素(如電解質(zhì)、pH、溫度、補體)的影響下，進一步交聯(lián)和聚集，表現(xiàn)為凝集、沉淀、溶解、補體結(jié)合介導的生物現(xiàn)象等肉眼可見的反應。此階段反應慢，往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時。8．簡述HVGR和GVHR的主要區(qū)別。HVGR是由宿主體內(nèi)致敏的免疫效應細胞和抗體對移植物進行攻擊，導致移植物排斥；而GVHR是由移植物中的抗原特異性淋巴細胞，即“過路”淋巴細胞識別宿主抗原而發(fā)生的一種排斥反應。這種反應不僅導致移植失敗，而且還能給受者造成嚴重后果。9．T細胞亞群檢測有何臨床意義?T細胞亞群檢測已作為臨床輔助診斷與研究的一種重要手段，對各種疾病如自身免疫病、免疫缺陷病、病毒感染、惡性腫瘤等的發(fā)生、發(fā)展、臨床療效考核和預后估計都具有極其重要的意義；對了解機體的免疫狀態(tài)也有十分重要的意義。10．簡述ELISA的基本原理。①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或酶標抗體，這種酶標抗原或酶標抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，令受檢標本(測定其中的抗原或抗體)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化形成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)顏色反應的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。11．試述直接Coomb’s試驗與間接Coomb’s試驗的共同點與不同點。直接Coomb’s試驗主要用于檢查已吸附在紅細胞上的不完全抗體。此試驗常用于新生兒溶血癥、自身免疫性溶血癥及特發(fā)性自身免疫性貧血等檢查。間接Coomb’s試驗主要用于檢查血清中游離的不完全抗體。此試驗多用于檢測母體Rh(D)抗體，可及早發(fā)現(xiàn)和避免新生兒溶血癥的發(fā)生。亦可對紅細胞抗原不相容性輸血所產(chǎn)生的血型抗體進行檢測。12．簡述ELISA雙抗體夾心法的操作步驟。(1)特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。(2)加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。(3)加酶抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈正相關。(4)加底物：夾心復合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。13．ELISA操作的注意事項有哪些?(1)加樣：在ELISA中除了包被外，一般需進行4～5次加樣。在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準確性，例如規(guī)定為加樣1滴。此時應該使用相同口徑的滴管，保持準確的加樣姿勢，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應力求準確。標本和結(jié)合物的稀釋液應按規(guī)定配制。加樣時應將液體加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出現(xiàn)氣泡。(2)孵育：在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加結(jié)合物后，此時反應的溫度和時間應按規(guī)定的要求，保溫容器最好是水浴箱，可使溫度迅速平衡。各ELISA板不應疊在一起。為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或?qū)⑵桨宸旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。濕盒應該是金屬的，傳熱容易。如用保溫箱，空濕盒應預先放在其中，以平衡溫度，這一步驟在室溫較低時更為重要。加入底物后，反應時間和溫度通常不做嚴格要求。(3)洗滌：洗滌在ELISA過程中雖不是反應步驟，但卻是決定成敗的關鍵。洗滌的目的是洗去反應中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。(4)顯色及終止反應：顯色是酶促反應，應按規(guī)定的溫度和時間操作，用酸終止。(5)結(jié)果判斷：用比色計測定結(jié)果，準確性決定于ELISA板底的平整與透明度和比色計的質(zhì)量。14．試述流式細胞術(FCM)的工作原理及其特點。經(jīng)過熒光抗體染色的單細胞懸液和鞘液在氮氣壓力下同時進入流室，形成鞘液包裹細胞懸液的穩(wěn)定層流，由噴嘴高速射下(1000～5000個細胞／s)，與垂直而來的激光束交會。在混合細胞中，由于細胞大小、胞內(nèi)顆粒多少以及DNA含量等不同，使激光產(chǎn)生不同的散射，分別由散射光檢測接受；細胞上著染的熒光染料在激光激發(fā)下，輻射出熒光，由熒光檢測器接受。所有信號自動傳入電子計算機分析處理，以獲得檢測結(jié)果。1．簡述核酸探針及其應用。核酸探針的應用主要是：①一小段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素、和熒光染料標記它的末端或者全鏈，我們就把這一段多聚核苷酸序列稱為探針。②可以用于檢測特異DNA或RNA序列片段，可以用于遺傳病的基因診斷，用于限制性片段長度多態(tài)性作疾病的相關分析，法醫(yī)學上的性別分析和性別鑒定。2．簡述PCR技術的基本原理及基本反應步驟。(1)PCR的基本原理是以需要擴增的DNA為模板，以一對分別與模板的5’和3’末端相互補的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復制的機制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，重復這一過程，即可使目的DNA片段得到擴增。(2)PCR的基本步驟包括：①變性：將反應系統(tǒng)加熱至95℃，使模板DNA全部變性變成單鏈DNA。②退火：將溫度下降至適當溫度，使引物與模板DNA退火結(jié)合。③延伸：將溫度升至72℃，DNA聚合酶以DNTP底物催化DNA的合成反應。上述三個步驟稱為一個循環(huán)，這樣的循環(huán)重復25～30次，就可以得到大量的目標DNA。3．什么叫人類基因組計劃，它對醫(yī)學上的研究具有哪些意義?人類基因組計劃是指：①1991年，由美國眾議院批準的一個15年的人類基因組研究計劃，花費金額約為30億美元，該項目很快得到各國科學家和各國政府的所重視。1994年，我國也加入到其中的相關研究項目，人類基因組分析的主要內(nèi)容包括：遺傳圖分析、物理圖分析、轉(zhuǎn)錄圖分析、基因組序列測定等。②人類基因組計劃的實施大大促進了醫(yī)學的發(fā)展，DNA的遺傳作圖和物理作圖對于認識疾病相關基因具有巨大的推動作用。遺傳性疾病的基因定位，尤其是對多基因位點將可以進行全基因組的定位掃描，使得確定致病基因的工作更為容易。4．簡述核酸分子雜交的基本原理、類別和應用。①單鏈的核酸分子在合適的溫度和離子強度下，通過堿基互補形成雙鏈雜交體的一類技術。②核酸分子雜交分為液相雜交、固相雜交、原位雜交、基因芯片技術。③主要應用SouthernBlotting用于未知DNA的檢測，NorthernBlotting用于檢測未知RNA，原位雜交用于組織和細胞中的基因定位。5．簡述基因診斷檢測的臨床應用。主要應用于感染病原的檢測、遺傳病的診斷、組織配型及腫瘤的早期診斷等。6．核酸產(chǎn)物主要用哪些方法檢測，它們分別用在哪些情況下?①凝膠電泳分析法：主要用于PCR產(chǎn)物的檢測。②微孔板夾心雜交法(PCRELISA)本法可避免電泳和雜交的繁雜步驟，適于常規(guī)的ELISA計數(shù)儀檢測PCR反應的產(chǎn)物。③熒光探針標記法：這種方法在PCR的反應過程中對PCR產(chǎn)物中熒光強度的檢測，從而對PCR產(chǎn)物進行定量。④分支DNA(DDNA)：可以用于一些計算機程序中自動計算標本病毒RNA的含量。7．簡述DNA芯片技術的應用。①基因診斷；②DNA序列測定；③臨床藥物篩選；④其他領域：法醫(yī)學鑒定、食品工業(yè)、環(huán)境監(jiān)測。