【正文】 物質(zhì)三聚氰胺。這種物質(zhì)對人體和動物的危害尚未被完全認(rèn)知，但已知的是，“如長期和反復(fù)接觸作用，該物質(zhì)可能對腎發(fā)生作用”。由國際化學(xué)品安全規(guī)劃署和歐洲聯(lián)盟委員會合編的《國際化學(xué)品安全手冊》（第三卷），對三聚氰胺則有如下描述：“長期或反復(fù)接觸作用：該物質(zhì)可能對腎發(fā)生作用”。在高溫下，三聚氰胺可能分解產(chǎn)生氰化物（有較大毒性），在進行膨化飼料加工時，是否會分解產(chǎn)生氰化物倒是值得研究的問題。 養(yǎng)殖魚體可能出現(xiàn)的問題養(yǎng)殖魚體可能出現(xiàn)的問題包括以下幾個方面：①對魚體主要內(nèi)臟器官造成傷害，出現(xiàn)器質(zhì)性病態(tài)反應(yīng)，如肝胰臟、腎臟、脾臟等發(fā)生腫大、出血等現(xiàn)象。由于內(nèi)臟主要器官組織的傷害，可能導(dǎo)致魚體整體生理機能的傷害，使魚體整體免疫、防御能力出現(xiàn)嚴(yán)重的病理反應(yīng)，生長速度下降，死亡率增高等綜合性反應(yīng)。②體色發(fā)生變化，目前在多數(shù)無鱗魚如斑點叉尾回、黃桑魚、胡子鯰，有鱗魚如武昌魚、青魚等，體色出現(xiàn)顯著的“白化”現(xiàn)象，嚴(yán)重的肌肉色澤也要發(fā)生變化。③消化道、鰓、鰭條基部、表皮等發(fā)生嚴(yán)重的出血現(xiàn)象，可能是氨氮過量造成。④養(yǎng)殖魚類生產(chǎn)性能嚴(yán)重受到影響，如部分企業(yè)出現(xiàn)使用了魚粉的飼料的養(yǎng)殖效果還不如不用魚粉的飼料的養(yǎng)殖效果，高蛋白、高價格的飼料還不如低蛋白、低價格飼料的養(yǎng)殖效果等難以理解的奇怪現(xiàn)象，極有可能是魚粉等高蛋白原料有摻假所造成。三、蛋白質(zhì)飼料摻假物的質(zhì)量鑒定在蛋白質(zhì)原料中除了摻入NPN類化工產(chǎn)品外，還有摻入部分水解羽毛粉、膨化羽毛粉、膨化皮革粉、豬踢角粉、蛋白胨等物質(zhì)。因此，蛋白質(zhì)飼料原料摻假物的質(zhì)量鑒定應(yīng)該要全面進行。氨基酸分析方法分析氨基酸應(yīng)該是最佳分析方法，但是，目前有些摻假蛋白質(zhì)飼料、尤其是魚粉的氨基酸指標(biāo)與真魚粉的氨基酸組成幾乎沒有什么差異。出現(xiàn)這種情況的原因有幾種可能性：①氨基酸分析報告有人為干擾，這類案例較多，建議將樣品分別送高等院校、研究所分析，或有條件的企業(yè)自己分析，對不同分析單位的分析結(jié)果進行比較，就可以知道那些單位的氨基酸分析報告可能存在人為干擾，以后就不再送這些單位進行檢驗和分析。②魚粉等蛋白質(zhì)原料已經(jīng)是經(jīng)過專家配方的產(chǎn)品，這些配方魚粉的氨基酸組成的確與真魚粉相差不大。對于魚粉等蛋白質(zhì)原料氨基酸分析結(jié)果的分析和判定，可以從氨基酸總量、氨基酸平衡性進行分析。對于純化的蛋白質(zhì)，其水解為氨基酸后，氨基酸總量應(yīng)該大于蛋白質(zhì)的總量，因為在水解過程中氨基酸殘基結(jié)合了水分子成為游離的氨基酸。但是，在進行氨基酸分析時，一般是采用酸水解的方法對蛋白質(zhì)水解后再進行分析的，而在水解過程中部分氨基酸如色氨酸、部分苯丙氨酸等被破壞，使氨基酸總量下降。因此，對于一般的魚粉和其他蛋白質(zhì)原料的氨基酸分析結(jié)果，在進行氨基酸總量判定時，至少要求氨基酸總量為蛋白質(zhì)量的90%以上，能夠達到95%以上為最好。但是，對于摻入不同處理羽毛粉、豬踢角粉、血粉等蛋白質(zhì)飼料，單從氨基酸總量和氨基酸平衡性是難以進行分析和判定的，對于摻入NPN類高氮化工原料的可以采用此方法進行分析和判定。改進離體消化率測定方法常規(guī)離體率、國標(biāo)中消化率測定方法是以經(jīng)過酶水解后進行過濾、或離心，測定殘渣中的蛋白質(zhì)含量，再通過消化前、后樣品中蛋白質(zhì)量的差異計算消化率，這類方法是將消化后溶解于消化液中的所有含氮物質(zhì)計算為了已經(jīng)被效化的物質(zhì)的量，如果在蛋白質(zhì)飼料中摻假的NPN能夠溶解或部分溶解于水中時，測定的消化率結(jié)果就會很高，高于真實結(jié)果。這對摻入不同處理羽毛粉、豬踢角粉、血粉等蛋白質(zhì)飼料可以采用這種方法進行分析和判定，但是，對于摻入水溶性NPN的蛋白質(zhì)原料就難以判定了，其離體消化率會很高。對此，建議在進行常規(guī)離體消化率測定時，對消化液進行氨基酸分析，計算消化液中氨基酸種類、氨基酸總量，以消化液氨基酸總量計算樣品經(jīng)過消化后氨基酸生產(chǎn)率。可以將標(biāo)準(zhǔn)魚粉與待檢測、魚粉同時進行離體消化，并進行相對比較，如果與標(biāo)準(zhǔn)樣品差異太大，就可以基本判定摻入了水溶性NPN。水溶總氮測定將蛋白質(zhì)原料樣品直接用水溶解，觀察水溶液色澤、氣味的同時，測定水溶液中含氮成分量進行分析和判定。取樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品各1克左右，加入10毫升蒸餾水，攪拌5分鐘，3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘，或定量濾紙過濾，去上清液或濾液5毫升進行凱氏定氮分析，測定總氮量，并與標(biāo)準(zhǔn)樣品進行比較分析，或參照測定樣品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中水溶總氮含量進行比較分析，如果過高就有可能摻入水溶性NPN。顯微鏡分析顯微鏡分析對于摻入不同處理過的羽毛粉的蛋白質(zhì)原料可以進行很有效的鑒定和分析。對于原料中摻假脲醛聚合物也可以進行顯微鏡分析，而其他NPN不宜采用此方法。鏡檢下，脲醛聚合物為乳黃色不規(guī)則球狀物，用探針輕壓后會散開并呈晶體狀，且不溶于水。例如，在20倍顯微鏡下鏡檢時，玉米蛋白粉中的脲醛顏色較黃。魚粉中的脲醛顏色為淡黃色，為了便于撿出，可用乙醚或四氯化碳先脫脂，脫脂后的魚粉中的脲醛顏色變淡。（原文發(fā)表在《飼料廣角》2007年第17期）飼料中補充晶體或微囊氨基酸對鯉魚魚種生長性能的影響羅運仙1，冷向軍1，宋宏斌2，趙永志21上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院；2 廣東海納川集團協(xié)力同創(chuàng)飼料有限公司隨著魚粉、豆粕等優(yōu)質(zhì)動植物蛋白源的供應(yīng)緊張和價格上揚，有關(guān)廉價植物蛋白源的研究和應(yīng)用也逐漸增加，與優(yōu)質(zhì)動植物蛋白源相比，廉價植物蛋白源通常表現(xiàn)為某些必需氨基酸缺乏或不足，如賴氨酸、蛋氨酸等，因而向飼料中添加晶體氨基酸成為解決這一問題的有效途徑。但是在水產(chǎn)飼料中添加晶體氨基酸的作用效果，目前尚無定論，研究和生產(chǎn)中對氨基酸的使用也存在許多模糊認(rèn)識?？傮w來看，氨基酸在水產(chǎn)飼料中的作用效果，與水產(chǎn)動物的種類、飼料的組成、投飼頻率等許多因素有關(guān)，特別是與游離氨基酸與蛋白氨基酸的吸收不同步，及氨基酸的水中溶失有關(guān)。對晶體氨基酸進行緩釋處理，是改善和提高其利用率的有效途徑。本次試驗以鯉魚為研究對象，考察在降低魚粉、豆粕用量條件下，補充限制性氨基酸(微囊或晶體賴氨酸、蛋氨酸)對魚體生長性能和血清游離氨基酸、總蛋白的影響，為氨基酸在水產(chǎn)飼料中的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。1 材料與方法1試驗動物試驗鯉魚魚種購于山東省某種苗場，空運回滬后，用基礎(chǔ)組飼料暫養(yǎng)一周，177。，體質(zhì)健壯魚種840尾，隨機分到21口水泥試驗池中（7組，每組3個重復(fù)，規(guī)格為3），每池放魚40尾。1．2試驗設(shè)計與試驗飼料以正常魚粉含量（前期15%，后期10%魚粉）飼料為正常魚粉對照組（C0），在此基礎(chǔ)上將魚粉含量降為10%（前期）或5%（后期），得低魚粉對照組（C1），在此基礎(chǔ)上，分別補充晶體（C2）或微囊（C3）Lys、Met，使其Lys、Met水平達到與C0一致；在低魚粉對照組（C1）基礎(chǔ)上，將豆粕用量由22%（前期）或21%（后期）%（前期）或14%（后期）（相應(yīng)增加菜粕、棉粕，菜粕：棉粕=1：1），得低魚粉低豆粕對照組（C4），在此基礎(chǔ)上，分別補充晶體（C2）或微囊（C3）Lys、Met，使其Lys、Met水平達到與C0一致；各組蛋白水平保持基本一致。共7個處理組。飼料配方組成見表1與表2。飼料以擠壓機制成直徑2mm顆粒飼料，晾干備用。氨基酸產(chǎn)品由佛山市海納川藥業(yè)有限公司提供。晶體賴氨酸有效含量為78%，蛋氨酸的有效含量為98%；微囊氨基酸的有效含量為晶體氨基酸含量的50%。3飼養(yǎng)管理試驗在上海海洋大學(xué)特種水產(chǎn)養(yǎng)殖場內(nèi)進行，自2008年7月25日開始，至2008年10月20日結(jié)束，養(yǎng)殖時間為56天。采用水泥池養(yǎng)殖，池水深為80cm；每日凌晨、中午進行充氣；每周換水一次，換水量為1/3，每周吸污一次；按“定時，定點，定量”的原則進行投喂，前半期每天投喂四次（8：00、11：00、14：00、17：00），后半期每天投喂三次（9：00、13：00、17：00），投喂量為體重510%，各組保持基本一致的投喂量。養(yǎng)殖期間水溫為22～29℃，pH為 177。，～。表1 飼料配方及其營養(yǎng)組成（前期，%）正常魚粉低魚粉低魚粉+晶體AA低魚粉+微囊AA低魚粉低豆粕低魚粉低豆粕+晶體AA低魚粉低豆粕+微囊AA成分/含量C0C1C2C3C4C5C6魚粉15101010101010豆粕22222222棉粕12菜粕24次粉麩皮油脂2222222預(yù)混料晶體Lys晶體Met 微囊Lys微囊Met合計100100100100100100100注：預(yù)混料含磷酸二氫鈣，氯化膽堿，多維，多礦；油脂=魚油。豆油（1：1)表2 飼料配方及其營養(yǎng)組成（后期，%）正常魚粉低魚粉低魚粉+晶體AA低魚粉+微囊AA低魚粉低豆粕低魚粉低豆粕+晶體AA低魚粉低豆粕+微囊AA成分/含量C0C1C2C3C4C5C6魚粉10555555豆粕21212121141414棉粕10191919菜粕22313131次粉2217麩皮10999999油脂2222222預(yù)混料晶體Lys晶體Met 微囊Lys微囊Met合計100100100100100100100注：預(yù)混料含磷酸二氫鈣，氯化膽堿，多維，多礦；油脂=魚油。豆油（1：1)1．4測定數(shù)據(jù)及方法 生長性能：試驗結(jié)束時稱重，計算增重率；記錄每天投喂量，試驗結(jié)束時計算飼料系數(shù)。增重率 % WG＝（W1－W0）/W0100%飼料系數(shù) F＝IF/（Wt－W0）式中，Wt、W0為終末和初始魚體重，t為試驗周天數(shù)，IF為試驗期內(nèi)飼料攝取量。血清游離氨基酸： 試驗結(jié)束時，分別在最后一次投喂后0h、1h、2h、3h、4h、5h尾靜脈取血，1%肝素鈉溶液作抗凝劑，每池每時間段取5尾魚采血，取血清20℃保存待測。采用總氨基酸（TAA）測試盒（購于南京建成生物工程研究所）測定血清游離總氨基酸變化。血清總蛋白：采樣及測定時間段同上，采用考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒（購于南京建成生物工程研究所）測定不同時間段血清中總蛋白含量。氨基酸水中溶失率：取蒸餾水100ml，搖勻后在25℃水浴中靜置5min，過濾取上清液，采用茚三酮法測定水中氨基酸。，加15%TCA ，搖勻，1500r/min離心15分鐘，、茚三酮試劑2ml，于沸水中煮沸30min，冷至室溫加50%乙醇6ml，以不加待測樣品（以蒸餾水代替）的顯色液為對照，用721型分光光度計于570nm測OD值。數(shù)據(jù)處理及分析：數(shù)據(jù)采用SPSS ，進行單因素方差分析及Duncan’s法多重比較。2 結(jié)果與分析2．1 補充晶體或微囊氨基酸對鯉魚生長性能的影響?zhàn)B殖56天后，各組鯉魚生長性能見表3。各組鯉魚均表現(xiàn)出了較好的生長性能，增重率為825%930%。攝食正常魚粉含量飼料的鯉魚（CO）具有最高的增重率（930%）和最低的FCR（）；攝食低魚粉低豆粕飼料的鯉魚（C4）具有最低的增重率（825%）和最高FCR（）。表3 飼料中添加晶體與微囊氨基酸對鯉魚生長的影響（全期）組別初體重/g末體重/g增重率%飼料系數(shù)成活率%C0177。177。177。100C1177。177。177。100C2177。177。177。100C3177。177。177。100C4177。177。177。100C5177。177。177。100C6177。177。177。100注：表中同列數(shù)據(jù)標(biāo)注字母有相同者表示差異不顯著，字母不同者表示差異顯著（p）與低魚粉組（C1）相比，添加晶體Lys與Met（C2）對幼鯉的生長性能并無改善；添加微囊Lys與Met（C3）則顯著促進了幼鯉的生長，%,（p）；并達到與正常魚粉組基本一致的增重率、飼料系數(shù)水平（p）。在低魚粉低豆粕飼料（C4）中添加晶體Lys與Met（C5）對幼鯉的生長性能并無改善；添加微囊Lys與Met（C6）則顯著促進了幼鯉的生長，%（p），（p）；C6與C0相比，%，但統(tǒng)計上并無顯著差異（p）。2．2 鯉魚攝食含晶體或微囊氨基酸飼料后血清游離總氨基酸含量的變化鯉魚攝食含晶體或微囊氨基酸飼料后血清游離總氨基酸含量的變化見圖1~圖3。從圖1可見，鯉魚攝食高魚粉飼料、低魚粉飼料，低魚粉低豆粕（均未添加AA）飼料后，血清游離氨基酸水平的變化趨勢較為一致，即攝食后血清游離氨基酸水平隨時間而增加，在3h達到吸收高峰，其后則下降；總體來看，血清游離氨基酸的水平表現(xiàn)為：正常魚粉組低魚粉組低魚粉低豆粕組。圖2：在低魚粉飼料（C1）中添加晶體氨基酸后（C2），血清游離氨基酸水平的高峰值提前到2h，其后下降；而攝食添加微囊氨基酸的飼料后（C3），血清游離氨基酸水平的變化曲線與低魚粉飼料（C1）基本一致，且游離氨基酸含量高于對照組C1。圖3：在低魚粉低豆粕飼料（C4）中添加晶體（C5），或微囊（C6）氨基酸后，血清游離氨基酸水平變化與圖2基本一致，即攝食添加晶體氨基酸的飼料后（C5），血清游離氨基酸的吸收峰值提前到2h。圖1 未添加AA的3組血清游離AA變化時間圖2在低魚粉飼料（C1）中添加晶體（C2）、微囊AA（C3）后血清游離AA變化圖3在低魚粉低豆粕飼料（C4）中添加晶體（C5）、微囊AA（C