【正文】 mLStability testing在Q1A和Q1B條件下穩(wěn)定、 擴(kuò)環(huán)8羥基腺嘌呤類在專利US2010143301A13US2013071354A133中，Gilead Sciences, ：此專利披露了約120個(gè)化合物結(jié)構(gòu)，（IFNα MEC=）化合物結(jié)構(gòu)如下:TLR7 活性報(bào)告IFN @PMBC Assay(IFNα MEC=引起IFNα的產(chǎn)生比空白試驗(yàn)高三倍的最低濃度)249212437404956598389939699104110113結(jié)構(gòu)多樣性舉例編號(hào)結(jié)構(gòu)編號(hào)結(jié)構(gòu)576466P67708081P其它的生物活性測試情況見下表：項(xiàng)目活性報(bào)告HCV suppression AssayCytokine expression induction assay@獼猴Cytokine expression induction assay @miceCytokine expression induction assay @ healthy woodchucks抗WHV血清轉(zhuǎn)化@慢性感染woodchucks而在專利US2011124627A134中，Gilead Sciences, ：此類化合物是TLR7或其它TLR亞型激動(dòng)劑，部分化合物活性見下表（IFNα@ PBMCs）：編號(hào)結(jié)構(gòu)編號(hào)結(jié)構(gòu)AMEC=dBMEC=cCMEC=aDMEC=eEMEC=bFMEC=cGMEC=c注：a=1nM，b=19nM，c=1099nM，d=1001000nM，e=1000nM，、 艾沙托立賓（Isatoribine）衍生物類鳥嘌呤核糖核苷類似物艾沙托立賓（ANA245）及其前藥（ANA975）是目前臨床研究最多的口服TLR7激動(dòng)劑。其中，艾沙托立賓進(jìn)入到治療HCV感染的Ⅱ期臨床實(shí)驗(yàn)。在原理驗(yàn)證階段艾沙托立賓表現(xiàn)出良好的耐受性，以800mg最大劑量給藥，8/12個(gè)病人顯示出統(tǒng)計(jì)性的病毒載量降低，幅度，并且在此過程中伴隨著劑量依賴的IFN刺激的2,5OAS和ISG15產(chǎn)生的系統(tǒng)性增加。艾沙托立賓使病毒載量降低的幅度中等，考慮到相對較高的給藥劑量，反映出其在TLR7受體上較弱的藥理作用（primary pharmacology），還需要改進(jìn)出更強(qiáng)效的類似物。Anadys聯(lián)合Novartis開發(fā)了ANA975作為口服制劑。發(fā)現(xiàn)也具有良好的耐受性，并且能夠有效的產(chǎn)生艾沙托立賓。但隨后，由于在動(dòng)物毒性研究中發(fā)現(xiàn)其會(huì)劑量依賴導(dǎo)致強(qiáng)烈的免疫刺激，Anadys終止了針對HCV病人的一個(gè)28天的Ⅰb期臨床項(xiàng)目。隨后，對ANA975配方的進(jìn)一步研究也被終止，由此分析，每日給藥的劑量無法達(dá)到足夠的治療指數(shù)。但是艾沙托立賓的另一個(gè)前藥（ANA773）也在被研發(fā)作為HCV治療藥物，并且看上去其效果好于ANA975。然而由于最近Roche宣布收購了Anadys，此項(xiàng)目前途未卜。在專利US2005054590A135中，Anadys公司披露了以下骨架：編號(hào)結(jié)構(gòu)編號(hào)結(jié)構(gòu)12345678活性結(jié)果未見。部分化合物結(jié)構(gòu)見下表：編號(hào)結(jié)構(gòu)編號(hào)結(jié)構(gòu)1234567而在專利US2012258928A136，US2012316327A137中，Gilead Science, ：此類化合物是HCV治療藥物的前藥，但在專利中并沒有提及機(jī)理是否是通過TLR途徑實(shí)現(xiàn)，然而鑒于其與上述Anadys化合物結(jié)構(gòu)的相似性，也將其進(jìn)展列出。部分化合物活性見下表：No.R7R8EC90（μM）No.R4R8EC90（μM）15Me11iPrOMe16MeOEt12Me17iPrOEt14cPnOH23cBuOMe24cPnOMe、 Bitriazolyl Acyclonucleoside類另一類鳥嘌呤核糖核苷類似物是Peng38等報(bào)道的如下所示雙三氮雜環(huán)類化合物。據(jù)此合成了以下幾個(gè)化合物（顯示部分）：編號(hào)結(jié)構(gòu)編號(hào)結(jié)構(gòu)3i73g89選擇化合物3i測試器TLR7活性，結(jié)果如下：項(xiàng)目活性報(bào)告TLR 三氮唑類（Triazole）在專利WO2009030996 A139中，Coley Pharmaceutical Group, ，它們是TLR7和TLR8的強(qiáng)效激動(dòng)劑。 其活性結(jié)果如下表所示：項(xiàng)目活性報(bào)告人TLR7@ HEK293EC50= 52377EC50= 52378人TLR8@ HEK293EC50=？ 52377EC50= 52378IFNα等@ PBMCs對兩個(gè)化合物都有反應(yīng)、 嘧啶類（Pyrimidine）在專利WO2009030998 Al40中，Coley Pharmaceutical Group, ，它們是TLRTLR8和TLR9的激動(dòng)劑。其活性結(jié)果如下表所示：項(xiàng)目活性報(bào)告（EC50/μM）人TLR7@ HEK293@52437 @52429人TLR8@ HEK293@52437 人TLR9@ HEK293@52437 @52429@52406 @52409IFNα等@ PBMCs對四個(gè)化合物都有反應(yīng)值得注意的是下述結(jié)構(gòu)為TLR7等的抑制劑（見專利WO2008152471A141）：而在專利US2009209524A142中，AstraZeneca公司披露了以下骨架：此類化合物是TLR7的激動(dòng)劑，給出結(jié)構(gòu)的100多個(gè)化合物在TLR7@ HEK293細(xì)胞上的的活性（pEC50）?，F(xiàn)將部分代表性結(jié)構(gòu)列出：編號(hào)結(jié)構(gòu)編號(hào)結(jié)構(gòu)21pEC50=31pEC50=48pEC50=71pEC50=72pEC50=73pEC50=75pEC50=83pEC50=92pEC50=93pEC50=、 8Substitued Benzoazepines類 在專利US2012165317A143中，Array Biopharma ：化合物活性結(jié)果如下表所示：項(xiàng)目活性報(bào)告人TLR7/8@ HEK293 （MC50= 50% of maximum induction concentration）MC50≤100μMTNFα等@ PBMCsMC50≤100μM部分化合物結(jié)構(gòu)見下表：編號(hào)結(jié)構(gòu)編號(hào)結(jié)構(gòu)1234567 Aminodiazepine類在專利US2012208801A144中，ARRAY BIOPHARMA ：此類化合物是TLR8的選擇性激動(dòng)劑，活性結(jié)果如下表所示：項(xiàng)目活性報(bào)告人TLR8@ HEK293 （MC50= 50% of maximum induction concentration）MC50≤100μMTNFα等@ PBMCsMC50≤100μM部分化合物結(jié)構(gòu)見下表：編號(hào)結(jié)構(gòu)編號(hào)結(jié)構(gòu)12345678二、 未來可能的變動(dòng)空間以雙環(huán)為核心，對已有結(jié)構(gòu)進(jìn)行歸納總結(jié)：再次我們以三環(huán)為核心，對已有結(jié)構(gòu)進(jìn)行歸納總結(jié)；然后，我們再對邊鏈部分進(jìn)行歸納總結(jié)；最后，將不同的核心結(jié)構(gòu)和邊鏈結(jié)構(gòu)進(jìn)行排列組合（以上三階段工作在稍后進(jìn)行）。三、 創(chuàng)新藥物設(shè)計(jì)以嘧啶并六元環(huán)為核心。我們將活性較理想的化合物邊鏈提取出來，組合到嘧啶并六元環(huán)中。為此，我們對此處專利保護(hù)情況進(jìn)行了調(diào)研。在右側(cè)邊鏈的改造工作主要是Gilead Sciences, ，它們?yōu)榇松暾埩艘韵聦＠篣S2011236348A12US2011150836A12US2011098248A11US2010143301A12US2013071354A122。在專利中，此處D被定義為苯基、二苯基、吡啶基，并且此處的苯基、二苯基、吡啶基為L2NR6R7取代（L為烷基鏈或共價(jià)鏈）?；蛘叽颂幍腄為吡啶基、哌啶基、哌嗪基或1,2,3,4四氫異喹啉基。之后被更廣泛的定義包含，此定義為雜環(huán)、取代雜環(huán)、雜芳環(huán)、取代雜芳環(huán)。為此，我們設(shè)計(jì)了第一階段目標(biāo)化合物，避免聯(lián)苯結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。如下圖所示：以上設(shè)計(jì)經(jīng)過Scifinder查重驗(yàn)證。第二階段目標(biāo)是固定第一階段所得優(yōu)選基團(tuán)，對右側(cè)環(huán)上的取代情況進(jìn)行考察：在這之前，先要合成幾個(gè)高活性的陽性對照物。我們根據(jù)專利報(bào)道以及文獻(xiàn)綜述，選擇下面兩個(gè)化合物：GS9620已經(jīng)進(jìn)入臨床Ⅰ期。體外活性結(jié)果如下表：項(xiàng)目活性報(bào)告IFNα等@ PBMCsMEC≤Suppression of HCV replicons在動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)和藥效學(xué)結(jié)果如下：A、健康大猩猩上口服給藥：B、健康大猩猩上ISG和血清細(xì)胞因子誘導(dǎo)結(jié)果：陽性化合物反應(yīng)路線設(shè)計(jì)（US2010143301A132）： GS9620：另外一個(gè)合成路線：Example 96主要路線與GS9620相同，中間體的合成如下：參考文獻(xiàn)：1. 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