【正文】 。2）內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。3）測(cè)定方法：取地西泮對(duì)照品約25mg，精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。吸取5μl~10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取本品適量（約相當(dāng)于地西泮5mg），同法測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。（2）高效液相色譜法測(cè)定硫酸阿托品片的含量[ 7 ] 硫酸阿托品原料藥在國(guó)內(nèi)藥典中均采用非水滴定法，其片劑在中國(guó)藥典中采用酸性染料比色法測(cè)定其含量，操作十分繁瑣。多年來(lái)，含量測(cè)定結(jié)果偏低，其原因?yàn)槠瑒┧觅x形劑對(duì)硫酸阿托品的含量測(cè)定有不同程度的干擾、吸附、致使結(jié)果偏低。采用高效液相色譜法，可消除賦形劑的干擾，并獲得滿(mǎn)意的測(cè)定結(jié)果。1）色譜條件：色譜柱為SpherisorbC18 5μm；（）乙腈（80?20）；柱溫為30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm；在該條件下硫酸阿托品的理論塔板數(shù)為5880。2）線(xiàn)性關(guān)系：精密稱(chēng)取硫酸阿托品適量，、112μg/ml的溶液，進(jìn)樣3次，每次20μl，所得峰面積與濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)r = ，～112μg/ml。3）回收率試驗(yàn)：精密稱(chēng)取硫酸阿托品原料約40mg，置50ml容量瓶中，加上述流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。取按處方量除硫酸阿托品外的賦形劑空白顆粒粉5份，分別精密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，分別加入量瓶中，再用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液；，置50ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照液。分別取供試品溶液與對(duì)照液各20μl進(jìn)樣，求得峰面積，計(jì)算回收率。4）樣品測(cè)定：對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取硫酸阿托品40mg，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解，并稀釋至刻度，搖勻。，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備 取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取片粉適量（）置50ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，作為供試品溶液。測(cè)定方法 分別取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，照上述色譜條件測(cè)定，根據(jù)峰面積計(jì)算即得。（3）高效液相色譜法測(cè)定血漿中地西泮濃度 本法以艾司唑侖為內(nèi)標(biāo)，用氯仿異丙醇混合溶劑提取，氮?dú)饬鞔蹈桑眉状既芙夂筮M(jìn)樣，測(cè)定了剖腹產(chǎn)產(chǎn)婦及胎兒血漿中地西泮濃度。%~%之間；日內(nèi)與日間精密度（RSD）%~%%~%。該法具有回收率高，專(zhuān)一性強(qiáng)、靈敏度高和重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，并用此法對(duì)10名剖腹產(chǎn)產(chǎn)婦進(jìn)行了血藥濃度測(cè)定，為臨床安全用藥提供了科學(xué)依據(jù)。1）色譜條件：色譜柱為Zorbox ODS 250mm 5181。m，預(yù)柱Zorbox ODS 50mm ，柱溫40℃；流動(dòng)相為甲醇水（70?30），；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。2）樣品預(yù)處理：。取血漿1ml于10ml具塞離心管中，加入含碳酸鈉、旋渦混勻，加入提取液氯仿異戊醇（98?2）6ml，共3次，3000r/min離心15min，吸取下層有機(jī)層5ml于另一試管中，氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)?ml甲醇溶解，進(jìn)樣20μl?？瞻籽獫{提取液的色譜峰與地西泮、艾司唑侖血漿提取液的色譜峰分離較好。3）線(xiàn)性關(guān)系：、、()不經(jīng)提取直接進(jìn)樣20μl。以地西泮與艾司唑侖的峰面積比為Y，地西泮的濃度為X，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為：Y=－103，r = 。2．離子對(duì)高效液相色譜法離子對(duì)色譜法，是離子對(duì)提取與色譜技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物，可用于分析呈離解狀態(tài)的藥物，如有機(jī)酸類(lèi)或有機(jī)堿類(lèi)。離子對(duì)色譜法是將待測(cè)組分的反離子加入到流動(dòng)相中，與呈離解狀態(tài)的藥物作用，生成可逆的離子對(duì)化合物。分離測(cè)定雜環(huán)類(lèi)藥物中吡啶類(lèi)、喹啉類(lèi)等藥物時(shí)，主要采用烷基磺酸鹽或其它鹽類(lèi)，作為離子試劑。烷基磺酸鹽中常用的有戊烷磺酸鈉（C5H11SO3Na）及庚烷磺酸鈉（C7H15SO3Na）等，以庚烷磺酸鈉與有機(jī)堿類(lèi)藥物作用生成離子對(duì)化合物為例，其反應(yīng)式為： BH+ + C7H15SO2O [BH+ C7H15SO2O]與酸性染料比色法類(lèi)似，影響離子對(duì)形成的條件，如溶液的pH值，反離子的種類(lèi)，流動(dòng)相等因素均應(yīng)選擇恰當(dāng)，以利于離子對(duì)在色譜柱上的分離。流動(dòng)相一般呈酸性，以利于生物堿離解；離子對(duì)試劑的非極性部分越大，形成的離子對(duì)分配系數(shù)越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)?，F(xiàn)以血清中異煙肼、環(huán)丙沙星的測(cè)定為例，簡(jiǎn)介離子對(duì)色譜法的應(yīng)用。（1）反相離子對(duì)高效液相色譜法測(cè)定人血清中異煙肼濃度 由于異煙肼存在快乙酰化和慢乙?；瘍煞N代謝類(lèi)型，臨床上需要進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè)。血清中異煙肼濃度的測(cè)定，目前所用的HPLC法，前處理過(guò)程十分復(fù)雜，需要進(jìn)行多步提取，吹干、重組等，繁瑣費(fèi)時(shí)，對(duì)日常監(jiān)測(cè)工作的開(kāi)展很不方便。而引入離子對(duì)試劑庚烷磺酸鈉，以煙酰胺為內(nèi)標(biāo)物，建立反相離子對(duì)色譜法，取得較好的監(jiān)測(cè)效果。1）色譜條件：色譜柱為Spherisorb SiO2（250mm，5181。m）；柱效理論塔板數(shù)為5000；（15?85，）；；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)為254nm；柱溫為40℃；進(jìn)樣10181。l；最低檢測(cè)濃度為50ng/ml。2）血清樣品的預(yù)處理：取血清200181。l，加內(nèi)標(biāo)液（1181。g/ml）1ml，充分混勻，靜置5min離心，取10181。l進(jìn)樣。3）線(xiàn)性關(guān)系：、、應(yīng)用上述方法進(jìn)行預(yù)處理和測(cè)定，計(jì)算異煙肼與內(nèi)標(biāo)物色譜峰之比，以此比值（Y）與異煙肼濃度（X）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，其回歸方程為：Y= + ，r = 。4）回收率試驗(yàn)：、采用加樣回收法進(jìn)行回收率試驗(yàn)，測(cè)得低、中、%、%，%。5）精密度試驗(yàn)：、按要求進(jìn)行日內(nèi)精密度和日間精密度測(cè)定，%%。6）干擾試驗(yàn)：空白樣品處理結(jié)果表明，血清中的內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，血清中其它抗結(jié)核藥物如吡嗪酰胺、對(duì)氨基水楊酸等，對(duì)血清中異煙肼的測(cè)定均無(wú)影響，不產(chǎn)生干擾。7）結(jié)核病患者的血藥濃度監(jiān)測(cè)：運(yùn)用此法進(jìn)行異煙肼血藥濃度監(jiān)測(cè)共66人次，男41例，女25例，年齡2歲～74歲，～，服藥時(shí)間7天到半年。8）結(jié)果與討論：建立的本離子對(duì)HPLC法，樣品經(jīng)沉淀蛋白后可直接進(jìn)樣分析，不需要提取濃縮過(guò)程，大大減低了測(cè)定的工作量，對(duì)日常血藥濃度監(jiān)測(cè)和藥代動(dòng)力學(xué)研究工作的開(kāi)展，具有極大的優(yōu)越性。該法快速、簡(jiǎn)便、精確、穩(wěn)定、特異性好、靈敏度高。（2）高效液相色譜法測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星血藥濃度及其藥動(dòng)學(xué)研究[ 10 ] 本法以二氟哌酸為內(nèi)標(biāo)物，乙腈、溴化四丁基銨和磷酸二氫鉀為流動(dòng)相系統(tǒng)，采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定受試者口服鹽酸環(huán)丙沙星后血清中藥時(shí)曲線(xiàn)，并對(duì)鹽酸環(huán)丙沙星片進(jìn)行了藥動(dòng)學(xué)和生物利用度的研究。1）色譜條件：色譜柱為HPRPODS柱（220mm）；柱溫為25℃；流動(dòng)相為乙腈[溴化四丁基銨（）+ 磷酸二氫鉀水溶液（）] = 14?86；；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)為277nm；；。2）樣品預(yù)處理：，加入內(nèi)標(biāo)二氟哌酸20181。l（ 181。g），旋渦振蕩5min；，再旋渦振蕩5min；離心（4000 r/min）15min，取上清液，真空揮干溶劑，流動(dòng)相50181。l溶解。3）線(xiàn)性關(guān)系：精密稱(chēng)定鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)照品用流動(dòng)相溶解定容，，，。以樣品峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比對(duì)鹽酸環(huán)丙沙星的濃度進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程為Y= + 103，r = 。方法的回收率為96%以上；日內(nèi)、%%。4）試驗(yàn)方法：十名受試者實(shí)驗(yàn)前15天未服任何藥物，受試前12h內(nèi)禁食，當(dāng)日早晨空腹，隨機(jī)分成2組：5人分別口服供試品片劑各500mg，另5人分別口服對(duì)照品各500mg。給藥后3h按統(tǒng)一食譜進(jìn)餐，試驗(yàn)期間飲水自便。受試者接受交叉給藥供試品和對(duì)照品各一次，間隔7天。服藥后分別于0，，，，，，室溫（約15℃）放置1h，3000r/min離心15min，分出血清，20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：10例健康志愿者交叉口服鹽酸環(huán)丙沙星供試品或?qū)φ掌菲蟮乃帟r(shí)曲線(xiàn)符合二房室開(kāi)放式模型，實(shí)測(cè)血清藥時(shí)曲線(xiàn)與理論曲線(xiàn)重合；體內(nèi)吸收迅速，177。177。；177。177。；177。177。，177。177。 μg/ml；177。177。；177。177。；177。177。以上參數(shù)均經(jīng)t檢驗(yàn)，p＞，兩者之間差異均無(wú)顯著性，并與文獻(xiàn)報(bào)道一致。另外，177。%。練習(xí)題97：[116—120] A. 氯氮卓（利眠寧）B．地西泮（安定） C．兩者均能 D. 兩者均不能 97：116．分子母核屬于苯并二氮雜卓 97：117．用氧瓶燃燒法破壞后，顯氯化物反應(yīng) 97：118．水解后呈芳伯胺反應(yīng) 97：119．與三氯化銻反應(yīng)生成紫紅色 97：120．溶于硫酸后，在紫外光下顯黃綠色熒光99：85. 硫酸—熒光反應(yīng)為地西泮的特征鑒別反應(yīng)之一。地西泮加硫酸溶解后，在紫外光下顯CA. 紅色熒光 B. 橙色熒光C. 黃綠色熒光 D. 淡藍(lán)色熒光E. 紫色熒光 例1. 某藥物經(jīng)酸水解后呈茚三酮反應(yīng)，溶液顯紫色，該藥為BA. 氯氮卓B. 地西泮C. 鹽酸普魯卡因D. 阿司匹林E. 尼可剎米 例2. 某藥物經(jīng)酸水解后可用重氮化—偶合反應(yīng)鑒別，此藥物是BA. 鹽酸氯丙嗪B. 氯氮卓C. 地西泮D. 醋酸氫化可的松E. 維生素C [練習(xí)題及答案精講]一、練習(xí)題[A型題]1. 異煙肼《中國(guó)藥典》的鑒別方法是 B. 水解反應(yīng) E. 與硝酸銀試液反應(yīng)2. 異煙肼《中國(guó)藥典》規(guī)定的含量測(cè)定方法為 [B型題]A. 與硝酸銀試液反應(yīng) C. 戊烯二醛反應(yīng) D. 水解后重氮化偶合反應(yīng) E. 重氮化偶合反應(yīng) 1. 異煙肼 2. 苯巴比妥 3. 尼可剎米 4. 氯氮卓A. 溴酸鉀法 B. 紫外分光光度法 C. 非水滴定法 D. HPLC法 E. 雙相滴定法5. 異煙肼6. 尼可沙米注射劑 7. 苯甲酸鈉8. 地西泮注射劑[X型題]1. 《中國(guó)藥典》規(guī)定用紫外分光光度法測(cè)定的藥物有A. 苯巴比妥 B. 鹽酸氯丙嗪片 C. 地西泮片 D. 鹽酸氯丙嗪注射劑 E. 氯氮卓片 2. 可用非水溶液滴定法測(cè)定含量的藥物有A. 尼可剎米 B. 鹽酸氯丙嗪 C. 奮乃靜 D. 地西泮 E. 氯氮卓二、答案精講[A型題] 1．E 異煙肼的鑒別是利用酰肼基具有還原性, 可還原硝酸銀中的Ag+為單質(zhì)銀，因此可選E。2．B[B型題] [X型題]1. B C D E2．A B C D E 堿性原料藥物首選的含量測(cè)定方法為非水溶液滴定法，因此可選A，B，C，D，E。38 /