【正文】 影響細(xì)胞的生長。目前使用的消毒劑的種類較多，～2種。 常用消毒劑的使用濃度及消毒效果的比較滅菌劑使用濃度消毒時(shí)間/min去除的難易效果酒精70%～75%～2易好過氧化氫10%～12%5～10最易好漂白粉飽和溶液5～30易很好次氯酸鈣9%～10%5～30易很好次氯酸鈉%～2%5～30易很好氯化汞%～%3～10較難最好抗菌素4～50mg/L30～60中較好，由于氯化汞雖然消毒效果最好，但其有很強(qiáng)的毒性，且不易去除，所以根據(jù)實(shí)際考慮，在本次研究中采用次氯酸鈉作為滅菌劑。 1培養(yǎng)基的選擇植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基主要有MS培養(yǎng)基，B5培養(yǎng)基，N6培養(yǎng)基等。在本次實(shí)驗(yàn)中選用MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基。MS培養(yǎng)基是目前普遍使用的一種培養(yǎng)基。它有較高的無機(jī)鹽濃度，對(duì)保證組織生長所需的礦質(zhì)營養(yǎng)和加速愈傷組織的生長十分有利。由于配方中的離子濃度高，在配制、貯存、消毒等過程中，即使有些成分略有出入，也不致影響離子間的平衡。這種培養(yǎng)基中的無機(jī)養(yǎng)分的數(shù)量和比例比較合適，足以滿足植物細(xì)胞在營養(yǎng)上和生理上的需要。因此，一般情況下，無須再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有機(jī)附加成分。與其它培養(yǎng)基的基本成分相比，MS培養(yǎng)基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高，這是它的明顯特點(diǎn)。 培養(yǎng)基配制完畢后，應(yīng)立即滅菌。培養(yǎng)基通常應(yīng)在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，在汽相120℃條件下，滅菌20分鐘。如果沒有高壓蒸汽滅菌鍋，也可采用間歇滅菌法進(jìn)行滅菌，即將培養(yǎng)基煮沸10分鐘，24小時(shí)后再煮沸20分鐘，如此連續(xù)滅菌三次，即可達(dá)到完全滅菌的目的。根據(jù)實(shí)際條件，在本次研究中采用高壓蒸汽滅菌。滅菌效果很好，在預(yù)培養(yǎng)中沒有染菌情況出現(xiàn)。將消毒的葉組織轉(zhuǎn)入到鋪有無菌濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，并用無菌濾紙吸干水分，上表皮朝上平放或豎插在MS培養(yǎng)基上。在本次研究中，用平放的方式將外植體接種入培養(yǎng)基表面，外植體上表皮朝上。 實(shí)驗(yàn)褐變的影響因素主要有外植體、培養(yǎng)基、pH值、培養(yǎng)條件等。解決途徑有選取適宜的外植體；選取適宜的培養(yǎng)基。瓊脂量的減少、較低的pH值利于減少褐變。培養(yǎng)基中適宜的細(xì)胞分裂素濃度可以減輕或抑制褐變；選取適宜的培養(yǎng)條件。試驗(yàn)證明適度的低溫[21]、初培暗光或弱光培養(yǎng)[22]可抑制酚類的氧化。總結(jié)本次研究的過程，褐化原因可能為：（1） 實(shí)驗(yàn)材料為宜褐化外植體，這類外植體材料十分容易褐化。（2） 外植體制備時(shí)，由于葉塊機(jī)械損傷嚴(yán)重，與空氣的接觸面多。故，在葉片損傷時(shí)褐化物質(zhì)產(chǎn)生。（3） 實(shí)驗(yàn)接種時(shí)，有一段時(shí)間完全暴露在空氣中，更易酚類的氧化而產(chǎn)生褐變。（4） 攀枝花氣候適宜何首烏生長，光照條件好，何首烏生長旺盛。細(xì)胞間物質(zhì)交換頻繁，使引起褐變的醌類物質(zhì)擴(kuò)散迅速。（5） 2,4D在該實(shí)驗(yàn)中作為激素加入培養(yǎng)基中對(duì)外植體有一定的褐化作用 因此，在攀枝花特定環(huán)境下，使用多種抗褐化劑組合有較好的效果。%%AC作為褐變抑制劑取得較理想的結(jié)果。 染菌 這次實(shí)驗(yàn)由上文中分析得出污染問題較嚴(yán)重，結(jié)合實(shí)驗(yàn)的過程分析，污染可能的原因如下：（1） 接種操作時(shí)，外植體滅菌后在外面放置時(shí)間過長，導(dǎo)致某些外植體從新帶菌，相互污染。（2） 在實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程中，有原本產(chǎn)生愈傷組織，在一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)有菌落出現(xiàn)，可能為外植體內(nèi)殺菌不徹底。（3） 接種時(shí)可能出現(xiàn)每次接種滅菌時(shí)，偶爾滅菌不徹底。（4） 培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)用具、接種工具可能滅菌時(shí)不徹底，導(dǎo)致殘留一些雜菌，發(fā)生培養(yǎng)過程中染菌。（5） 可能外植體內(nèi)殘留有菌體，有個(gè)別外植體是生長愈傷組織一段時(shí)間后染菌。具體防治措施為選擇合理的外植體種類、取材的季節(jié)、時(shí)間、初代接種選取大小適宜的外植體。選取帶菌較少或不帶菌體的材料作為外植體。大的材料有較大的表面積，帶菌相對(duì)較多；小的材料，相應(yīng)地帶菌較少，因而污染率較少。紫外燈接種室消毒，清洗超凈工作臺(tái)。接種工具、材料不要與酒精燈、超凈工作臺(tái)鐵網(wǎng)面、臺(tái)面接觸。要保證所用的接種工具經(jīng)過徹底的消毒再去切割其他的健康材料。接種人員接種時(shí)用酒精棉擦手或用濃度為75％ 的酒精噴灑雙手，接種時(shí)避免說話，接種的材料、工具不能超出工作臺(tái)面，接種人員身體應(yīng)盡量遠(yuǎn)離臺(tái)面。培養(yǎng)過程中環(huán)境中的病菌多、濕度大、溫度高也會(huì)引起培養(yǎng)材料或培養(yǎng)基的污染。污染的材料及瓶子要用藥液消毒并處理干凈，必要時(shí)須經(jīng)過高溫高壓滅菌后方可使用。5 結(jié)論通過研究和對(duì)研究結(jié)果的分析討論，得出以下結(jié)論：整個(gè)研究中外殖體出愈總數(shù)為58個(gè)，%。本研究中出愈率最高的是第3組培養(yǎng)基，%。出愈率最好的是第3組培養(yǎng)基。第3組實(shí)驗(yàn)組生長勢最好。第3組培養(yǎng)基為實(shí)驗(yàn)最佳培養(yǎng)基，即Ms+2，4D（）+6BA（）+蔗糖30g/L+瓊脂10g/L。本研究培養(yǎng)基與外植體污染嚴(yán)重。本次研究對(duì)外植體褐化的防治效果不是很好。，最好清晨活動(dòng)較低的時(shí)候，采摘回來放入冰箱進(jìn)行冷藏預(yù)處理，以降低組培褐變率。，以太高外植體的出愈率。，所使用的激素成分及濃度不同。根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)，找出最佳的濃度搭配。、溫度等的不同，愈傷組織的發(fā)生時(shí)間和生長存在差異。參 考 文 獻(xiàn)[1] 李建北，林茂．何首烏化學(xué)成分的研究[J]．中草藥，1993[2] 于榮敏，張輝，陳家琪，董麗萍．何首烏愈傷組織培養(yǎng)和蒽醌類成分的產(chǎn)生[J]．中國藥物化學(xué)雜志，1995[3] 蘇瑋，郭群．何首烏的現(xiàn)代藥理研究概況[J]．中草藥，1997[4] 杜勤，符江，詹若挺．何首烏組織培養(yǎng)的研究[J]．中草藥，1998[5] 李玉芳，何玄華．何首烏藥理研究進(jìn)展[J]．江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998[6] 杜勤，王振華，張俊榮．正交設(shè)計(jì)在何首烏組織培養(yǎng)中的應(yīng)用[J]．中草藥，1999[7] 王秋靜，杜中惠，劉茜．中藥何首烏的應(yīng)用與研究[J]．中國藥業(yè)，1999[8] 邱奉同．何首烏愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生[J]．植物生理學(xué)通訊，2000[9] 王文連．淺述何首烏的現(xiàn)代藥理作用及臨床應(yīng)用[A]．第二次世界中西醫(yī)結(jié)合大會(huì)論文摘要集，2002[10] 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在我的論文的寫作及修改過程中，通過查閱資料，使我更多的了解何首烏的相關(guān)問題，受益匪淺。尤其對(duì)其愈傷組織相關(guān)問題，有了更加深刻的理解。在本篇論文的寫作過程中，首先要感謝張穎老師，從本文選題到大綱結(jié)構(gòu)一直到幾易文稿，張老師都傾注了大量心血。在這個(gè)論文的撰寫過程中我深刻體會(huì)到，她對(duì)學(xué)術(shù)研究的積極和認(rèn)真，成為我今后學(xué)習(xí)、工作、生活的楷模。作為一名生物工程的本科學(xué)生，由于對(duì)何首烏愈傷組織誘導(dǎo)的知識(shí)有很多的欠缺和不足，張老師在各個(gè)方面給予了支持，才使得這篇論文順利的完成。感謝我的家人，感謝他們對(duì)我學(xué)業(yè)上的鼓勵(lì)，有了他們的支持我才得以順利完成學(xué)業(yè)。另外，要感謝學(xué)院的各位領(lǐng)導(dǎo)與老師對(duì)我的教導(dǎo)與幫助。感謝謝海、蔣少娟、熊亞、曹慕蘭、龔志端等老師，在大學(xué)期間對(duì)專業(yè)與課外知識(shí)的言傳身教。感謝我的大學(xué)同學(xué)，四年來我們一起學(xué)習(xí)、探討、互相切磋、共同進(jìn)步，在論文寫作中互相幫助。最后，謹(jǐn)向文中所列參考文獻(xiàn)的作者表示感謝，他們的研究成果是本文研究的基礎(chǔ)。 四年的大學(xué)生活，讓我學(xué)到了很多，成熟了很多，為我以后的工作增加了動(dòng)力。感謝我的母校攀枝花學(xué)院，感謝四年來幫助過我的所有老師與朋