【正文】 勻，不透光為宜；消煮器：由冷凝球的高型燒杯（50ml）或有冷凝管的錐形瓶；鍋濾裝置：抽真空裝置，吸濾瓶及漏斗；濾器：200目不銹鋼網(wǎng)和尼龍網(wǎng)，或G2號玻璃濾器；干燥器：用氯化鈣(干燥試劑)或變色硅膠作干燥劑。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（1）稱樣：稱取1～2g試樣，如果脂肪1%可不脫脂，1~10%可不必脫脂，但建議脫脂，脂肪10%必須脫脂，或用測脂肪后殘?jiān)＃?）酸煮：177。，使其在2min沸騰，且連續(xù)微沸30177。1min。注意保持硫酸濃度不變，樣品不可損失。（3）過濾：用沸蒸餾水洗至不含酸。（4）堿煮：將酸洗不溶物放入原容器中，177。，同樣微沸30min。（5）過濾：，再用沸蒸餾水洗至中性，用乙醇15ml洗殘?jiān)＃?）烘干灰化：取下坩堝，130℃烘干至恒重。550177。25℃灼燒30min，冷卻稱重至恒重。1976年Van Soet提出了中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、酸性洗滌木質(zhì)素作為評價飼草纖維類物質(zhì)的指標(biāo)。NDF：木質(zhì)素、纖維素、二氧化硅、半纖維素、細(xì)胞壁的成分如鑲嵌微量的蛋白質(zhì)ADF：木質(zhì)素、纖維素、二氧化硅ADFNDF=半纖維素ADFADL=纖維素該法可以分別測出纖維素，半纖維素、木質(zhì)素和硅酸鹽，這量一大進(jìn)步，但該法提取出的纖維物質(zhì)中殘留含氮尚有20~50%（有可能不消化），在NDF還有淀粉殘留，使準(zhǔn)確性下降，該法不適于纖維量低的精料（蛋白質(zhì)或淀粉多的試樣），因此也叫飼草分析方案。Fonnesback（馮列士貝克）于1970～1974年提出馮氏法。（1）先用蛋白酶將飼料進(jìn)行消化（pH=），然后用酸性洗滌劑煮沸1h，使原飼料中95%以上的蛋白質(zhì)被消化。（2）將上步分離出的細(xì)胞壁用40%硫酸煮1h，使半纖維素水解，過濾殘?jiān)鼮槔w維素和木質(zhì)素，酸不溶灰分，1步2步=半纖維素含量。（3）將上步所得的殘?jiān)?2%硫酸處理3h，過濾洗滌殘?jiān)?05177。2℃烘干，稱重，然后灼燒稱重，木質(zhì)素逸失，剩余為二氧化硅。實(shí)驗(yàn)九 能量的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖箤W(xué)生了解了解氧彈式熱量計(jì)測熱的基本原理及方法。二、實(shí)驗(yàn)原理有機(jī)物的燃燒熱系單位質(zhì)量有機(jī)化合物完全氧化時，所能釋放出的熱量，稱為該物質(zhì)的燃燒熱，也稱總能。根據(jù)熱力學(xué)第一定律，一個熱化學(xué)反應(yīng)，只要其開始與終末狀態(tài)一定，則反應(yīng)的熱效應(yīng)就一定。這一原理使我們測定各種物質(zhì)的燃燒熱變?yōu)橛幸饬x。有機(jī)物差不多均能氧化完全，并且反應(yīng)進(jìn)行很快，因此，準(zhǔn)確地測定燃燒熱就有了可能。由所測得的燃燒熱還可以計(jì)算反應(yīng)的熱效應(yīng)和化合物的生成熱。 將由消化代謝試驗(yàn)所用的飼料或日糧以及所收集的糞、尿樣品，制備成一定質(zhì)量的測定試樣，裝于充有（25177。5）kgcm2純氧氧彈中進(jìn)行燃燒。燃燒所產(chǎn)生之熱量為氧彈周圍已知質(zhì)量的蒸餾水及熱量計(jì)整個體系所吸收，并由貝克曼溫度計(jì)讀出水溫上升的度數(shù)。該上升的溫度乘以熱量計(jì)體系和水的熱容量之和，即可得出試樣的燃燒熱。在測定過程中一些因素會影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，須加以校正才可得出真實(shí)的熱價。例如，由于輻射的影響，水溫上升的度數(shù)與由燃燒產(chǎn)熱所致的實(shí)際升溫之間有偏差；引火絲本身燃燒的發(fā)熱量；以及含有氮、硫等元素的樣品，在氧化后生成硝酸、硫酸，其發(fā)熱量應(yīng)予以扣除等。三、實(shí)驗(yàn)設(shè)備氧彈式熱量計(jì)；氧氣鋼瓶（附氧氣表）及支架；容量瓶：2000，1000，200mL；量筒200，500mL；滴定管50mL；吸管10mL；燒杯250，500mL。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容準(zhǔn)備工作測定前應(yīng)擦凈氧彈各部污物及油漬，以防試驗(yàn)時發(fā)生危險，氧氣鋼瓶應(yīng)置于陰涼安全處，并應(yīng)注意避免滑倒。（1）稱量樣品及引火絲的準(zhǔn)備。取1～（經(jīng)粉碎過40目篩），用壓樣機(jī)壓成餅狀，然后置于干燥潔凈的坩堝中稱重（）。樣品的多少依測定時溫度上升不高于3～4℃為準(zhǔn)，最好以1℃左右為宜。如溫差大時，熱量計(jì)因輻射而損失的熱也多，引起的誤差也較大。此外，在稱量樣品的同時，應(yīng)測定樣品的含水量，以便換算成絕干基礎(chǔ)的熱價。量取及稱重10cm的引火絲，將盛有樣品的坩堝置于彈頭的坩堝支架上，將引火絲固定在兩個電極之上，其中一端應(yīng)距樣品表面1～2mm。引火絲切勿接觸坩堝。 （2）加水及充氧。在彈頭與彈體裝配前，取5～10mL水注入氧彈底部，以吸收燃燒過程中產(chǎn)生的五氧化二氮與三氧化硫氣體。加入的水量不要求很精確，但應(yīng)與測定熱量計(jì)水當(dāng)量相一致。然后用螺帽將彈頭與彈體扭緊，取下進(jìn)氣閥的螺母，擰上連接氧氣瓶的氣管接頭，充氧之前應(yīng)先打開針形閥。先充氧約5kgcm2，使氧彈中空氣排盡。然后，充氧壓力應(yīng)逐漸增至25～30kgcm2。但充氧不可過快，否則會使坩堝中的試樣為氣流所沖散而損失。這一點(diǎn)必須注意。（3）內(nèi)外水筒的準(zhǔn)備及熱量計(jì)的安裝。，為防止水中雜質(zhì)的沉淀，應(yīng)用蒸餾水。外筒灌水后可用攪拌器攪拌（外筒水不須經(jīng)常更換），待水溫與室溫一致時，才能使用。如熱量計(jì)長期不用，應(yīng)將水套中的水全部放出干燥保存。熱量計(jì)內(nèi)筒的蒸餾水應(yīng)蓋過氧彈進(jìn)氣閥螺母2/3高度。各套儀器的水量不同，2000～3000g。國產(chǎn)GR3500型熱量計(jì)的加水量為3000g，每次稱量應(yīng)相等，～ g（如不具備稱量條件，可用容量瓶量取2000～3000mL蒸餾水）。為減少輻射，測定前應(yīng)調(diào)節(jié)內(nèi)筒水溫使低于外筒水溫，～℃為宜，其他型號在1～℃之間（試樣發(fā)熱量少時， ℃）。內(nèi)筒灌水應(yīng)在內(nèi)筒放入外筒，并將氧彈放入內(nèi)筒后才可進(jìn)行。灌注時注意勿使水濺出，以免影響數(shù)值的準(zhǔn)確性。氧彈在內(nèi)筒中應(yīng)放置適當(dāng)?shù)奈恢茫鹗箶嚢杵鞯娜~片與內(nèi)筒或氧彈接觸，然后將貝克曼溫度計(jì)固定于支架上，使其水銀球中心位于氧彈一半高度的位置，最后蓋上蓋子。整個熱量計(jì)準(zhǔn)備就緒后，才可開動攪拌器，為保證測定時攪拌所生的熱大導(dǎo)相等。攪拌器的速度變化，不得超過10％。攪拌速度可由控制箱上的旋鈕加以調(diào)節(jié)。測定工作全部測定工作分為3期：燃燒前期（即初期）、燃燒期（即主期）及燃燒后期（即末期）。（1）燃燒前期（初期）是燃燒之前的階段，用以了解熱由外筒傳入內(nèi)筒的速度。攪拌器開動3～5min后，開始記錄溫度，每分鐘1次。當(dāng)每分鐘溫度上升幾乎恒定時，可定為初期的起點(diǎn)，也即試驗(yàn)的開始點(diǎn)（定為d點(diǎn)）。然后，每隔1min讀記1次溫度，如此連續(xù)5～10min?！?。（2）燃燒前期之末按電鈕點(diǎn)火（此時定為0點(diǎn)），燃燒前期最后1次讀溫，也就是燃燒期（主期）的第一次讀溫。燃燒期（主期），直至溫度不再上升為止（此時為c點(diǎn)），燃燒即行結(jié)束。使用的點(diǎn)火電壓約為24V，由于點(diǎn)火而進(jìn)入熱量計(jì)體系的電熱通常可忽略。但通電流的時間每次都應(yīng)相同，不應(yīng)超過2s。如通電時間過久，則因點(diǎn)火而產(chǎn)生的熱會影響測定結(jié)果的精確度。（3）燃燒后期（末期）。燃燒期結(jié)束即為燃燒后期（末期）的開始。其目的在測定熱由內(nèi)筒傳向外筒的速度，亦須每分鐘讀記溫度1次，至每分鐘溫度變化不大時為止，需5～10min。燃燒后期的終點(diǎn)，即為全部試驗(yàn)期的結(jié)束（定為d點(diǎn)）。3 結(jié)束工作測定溫度后，停止攪拌器。首先取下溫度計(jì)，然后從內(nèi)筒取出攪拌器及氧彈氧彈應(yīng)靜置30min，使能溶解的氣體完全溶解。然后將排氣口打開，使氧彈中剩的氧氣和二氧化碳在5～10min徐徐排出。擰開螺帽，取出彈頭，如氧彈內(nèi)有黑煙或未燃盡的試樣，則這個試驗(yàn)應(yīng)作廢。如燃燒成功，則小心取出燒剩余的引火絲，精確測量其長度或質(zhì)量。用熱蒸餾水仔細(xì)沖洗氧彈內(nèi)壁、坩堝及進(jìn)氣閥、導(dǎo)氣管等各部分，洗液及燃燒后的灰分移入潔凈的燒杯中，供測定酸與硫的含量，以校正酸的生成熱。在一般情況下，由于酸的生成熱很小，約為4J，因此常忽略不計(jì)。氧彈、內(nèi)筒、攪拌器在使用后應(yīng)用紗布擦干凈。各塞門應(yīng)保持不關(guān)閉狀態(tài)，并用熱風(fēng)將其接觸部分吹干，防止塞門生銹而不能密閉而漏氣。每次燃燒結(jié)束后，應(yīng)清除坩堝中的殘余物。普通坩堝可置于高溫電爐中，加熱至600℃維持3～4min，燃去可能存在的污物及水分。白金坩堝可在稀鹽酸中煮沸，也可用氟氫酸稍加熱以去污，石英坩堝只能擦拭，因加熱與用氟氫酸處理，都對石英有損。飼料燃燒熱（總能）的計(jì)算 式中Q為飼料或糞、尿樣品的燃燒熱，kJg1；K為熱量計(jì)的水當(dāng)量；T為主期階段最終溫度，℃；T0為主期階段最初溫度，℃；R為在T溫度計(jì)刻度的校正值，℃；R0為在T0時溫度計(jì)刻度的校正值，℃；H為用貝克曼溫度計(jì)時，溫度計(jì)上海一刻度相當(dāng)于實(shí)際溫度值，℃；m為試樣的質(zhì)量，g；△T為熱量計(jì)與周圍空氣的熱交換校正值；b為點(diǎn)火絲的質(zhì)量，g；q為點(diǎn)火絲的熱值，kJg1。 g1。 點(diǎn)火絲熱值：鐵絲，g1；鎳絲，g1；銅絲， kJg1；鉛絲， kJg1。實(shí)驗(yàn)十 豆粕中尿素酶活性的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諟y定尿素酶活性的各種方法的基本原理及方法步驟。二、實(shí)驗(yàn)原理將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解產(chǎn)生氨的反應(yīng)。用過量的鹽酸溶液中和所產(chǎn)生的氨，再用氫氧化標(biāo)準(zhǔn)溶液回滴。三、實(shí)驗(yàn)設(shè)備樣品篩：孔徑200μm；酸度計(jì)：，附有磁力攪拌器和滴定裝置；恒溫水?。嚎煽販?0177?！妫辉嚬埽褐睆?8mm，長1 50mm，有磨口塞子；精密計(jì)時器；粉碎機(jī)：粉碎時應(yīng)不生強(qiáng)熱（如球磨機(jī)分析天平．；移液管；10mL。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，轉(zhuǎn)入試管中，（如活性很高的樣品，），移入10ml尿素緩沖溶液，立即蓋好試管并劇烈搖動，馬上置于30177?！婧銣厮≈?，準(zhǔn)確計(jì)時保持30min。即刻移人10m1鹽酸溶液，迅速冷卻到20℃。將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入燒杯，用5ml水沖洗試管兩次， 。另取試管作空白試驗(yàn)，移人10ml尿素緩沖液，10ml鹽酸溶液。稱取與上述試樣量相當(dāng)?shù)脑嚇?，迅速加入此試管中。立即蓋好試管并劇烈搖動，將試管置于30177。℃的恒溫水浴，同樣準(zhǔn)確保持20min，冷卻至20℃，將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入燒杯，用5mL水沖洗試管兩次，并用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH 。以每分鐘每克大豆制品釋放氨的mg量來表示尿素酶的活性（UA），可按下式計(jì)算： 式中：C—?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mo1/L）； V0一空白試驗(yàn)消耗氫氧化鈉溶液體積（m1）； V—測定試樣消耗氫氧化鈉溶液體積（m1）； m—試樣質(zhì)量（g）。 若試樣經(jīng)粉碎前的預(yù)干燥處理時，則其計(jì)算如下： 式中：S一預(yù)干燥時試樣失重的百分率。 由一個分析人員用相同方法，同時或連續(xù)兩次測定結(jié)果之間的相差，應(yīng)不超過平均值的10％，以其算術(shù)平均值報告結(jié)