【正文】 率、代謝產(chǎn)物等都會(huì)發(fā)生變化，從而影響品質(zhì)。如有雜菌污染則直接影響產(chǎn)品的色、香、味。②溫度： 溫度影響菌絲的生長(zhǎng)和代謝，如溫度過(guò)低，則菌絲生長(zhǎng)緩慢，不能進(jìn)入豆腐塊的深層；溫度高，菌絲易老化和死亡，影響品質(zhì)。溫度還影響生化反應(yīng)速度。③ 發(fā)酵時(shí)間 發(fā)酵時(shí)間影響生化反應(yīng)度及生化產(chǎn)物的量。④調(diào)味品 加入的各種酒類、糖類等輔料的多少也對(duì)口感有重要影響。你能設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來(lái)探究各種條件對(duì)腐乳風(fēng)味和質(zhì)量的影響嗎？思考： ，解釋豆腐長(zhǎng)白毛是怎么一回事？ 答：豆腐上生長(zhǎng)的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說(shuō)是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。，將長(zhǎng)毛的豆腐腌起來(lái)？答：鹽能防止雜菌污染，避免豆腐腐敗。，哪種適合用來(lái)做腐乳？答：含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量過(guò)高的豆腐制腐乳，不易成形?！?8 ℃？ 此溫度不適于細(xì)菌、酵母菌和曲霉的生長(zhǎng)，而適于毛霉慢慢生長(zhǎng)。 ，你會(huì)發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢？它對(duì)人體有害嗎？它的作用是什么？答：“皮”是前期發(fā)酵時(shí)在豆腐表面上生長(zhǎng)的菌絲（匍匐菌絲），它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形?！捌ぁ睂?duì)人體無(wú)害。，豆腐較硬，你認(rèn)為是什么原因造成的？① 豆腐塊的含水量不當(dāng)，它影響毛霉菌絲的深入程度。②發(fā)酵時(shí)間短，蛋白質(zhì)未完全水解，在加鹽后豆腐脫水，蛋白質(zhì)變性，于是變硬。③菌種不純、菌種變異、菌種老化都會(huì)影響產(chǎn)品口感。④調(diào)味品加入量不足等。多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段教學(xué)目標(biāo)：（一）知識(shí)與技能了解PCR技術(shù)的基本操作理解PCR的原理討論P(yáng)CR的應(yīng)用（二）過(guò)程與方法在多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)避免外源DNA污染，嚴(yán)格控制溫度等反應(yīng)條件（三）情感、態(tài)度與價(jià)值觀通過(guò)對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)的操作及結(jié)果分析，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和實(shí)事求是的科研精神教學(xué)重點(diǎn)：PCR的原理和PCR的基本操作教學(xué)難點(diǎn)：PCR的原理教學(xué)過(guò)程：（一）引入新課在現(xiàn)代生物技術(shù)中，DNA技術(shù)可謂是尖端技術(shù)。人類基因組計(jì)劃、基因工程、基因診斷、基因檢測(cè)、古生物鑒定等都離不開對(duì)DNA分子堿基序列的分析。而分析DNA堿基序列，就需要一定量的DNA片段。怎樣迅速獲得足夠量的DNA片段呢？今天我們來(lái)研究學(xué)習(xí)DNA分子的擴(kuò)增技術(shù)――PCR技術(shù)。（二）進(jìn)行新課1．基礎(chǔ)知識(shí)PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA的過(guò)程，與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程類似：1．1細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制條件分析：條件組分作用模板DNA的兩條單鏈提供復(fù)制的模板原料四種脫氧核苷酸合成DNA子鏈的原料酶解旋酶DNA聚合酶打開DNA雙螺旋催化合成DNA子鏈能量ATP為解螺旋和合成子鏈供能引物RNA為DNA聚合酶提供合成的3’端起點(diǎn)1．2細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程（1）DNA的反向平行結(jié)構(gòu)：（結(jié)合投影圖）核苷酸分子的結(jié)構(gòu)與方向性：（分子結(jié)構(gòu)模式圖）由核苷酸通過(guò)3,5磷酸二酯鍵連接形成核苷酸長(zhǎng)鏈：（模式圖，體現(xiàn)方向性）。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的反向平行結(jié)構(gòu)：（2）DNA的復(fù)制過(guò)程:解 旋：解旋酶、ATP，DNA兩條鏈打開，形成兩條DNA單鏈。引物結(jié)合：在DNA單鏈3’端與DNA反向配對(duì)結(jié)合，確保引物3’端與DNA單鏈準(zhǔn)確配對(duì)。DNA聚合酶結(jié)合：子鏈合成：DNA聚合酶從引物3’端開始，將配對(duì)的脫氧核苷酸連接起來(lái)。后續(xù)加工：DNA聚合酶I將引物切去，并合成空缺處的DNA單鏈，再由DNA連接酶將不連續(xù)的DNA子鏈連接起來(lái)（半不連續(xù)合成。先導(dǎo)鏈，滯后鏈）子鏈合成特點(diǎn)：不能從頭合成；合成方向?yàn)椤?’→3’合成”。感悟生命的神秘：DNA聚合酶不但能夠催化磷酸二酯鍵的形成，還具有校對(duì)功能。它在每引入一個(gè)核苷酸后都要復(fù)查一次，只有堿基配對(duì)無(wú)誤后才能繼續(xù)往下聚合，它不能從頭合成。RNA聚合酶沒有校對(duì)功能，因此RNA的合成不需要引物，而是從頭合成的，它的錯(cuò)配可能性較大，在RNA引物完成功能后即被DNA聚合酶I刪去，代之以高保真的DNA鏈。［思考］DNA分子能準(zhǔn)確復(fù)制的原因有哪些？DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)提供模板；堿基互補(bǔ)配對(duì)；DNA聚合酶的復(fù)查功能。［思考］細(xì)胞內(nèi)哪些物質(zhì)是從頭合成的？RNA合成、蛋白質(zhì)合成。1．3DNA分子復(fù)制的人工控制解開螺旋：在80～100℃時(shí)，DNA雙螺旋打開，形成兩條DNA單鏈，稱為變性。恢復(fù)螺旋：在50℃左右時(shí)，兩條DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱為復(fù)性。復(fù)制條件：緩沖液,DNA模板,四種脫氧核苷酸,熱穩(wěn)定DNA聚合酶,兩種引物。反應(yīng)場(chǎng)所：PCR儀（自動(dòng)溫度周期性調(diào)節(jié)）。［思考］緩沖液相當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的什么成分？（核基質(zhì)）1．4PCR的反應(yīng)過(guò)程變性：在95℃時(shí)DNA解旋復(fù)性：在50℃時(shí)引物與DNA單鏈結(jié)合延伸：在72℃時(shí)合成DNA子鏈（兩個(gè)引物間的序列）2．實(shí)驗(yàn)操作2．1 PCR反應(yīng)體系：緩沖液、DNA模板，四種脫氧核苷酸原料、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、兩種RNA引物，水2．2 實(shí)驗(yàn)操作步驟2．3 按照PCR反應(yīng)體系配方配制反應(yīng)液；（2）將PCR反應(yīng)體系50μL用微量移液器轉(zhuǎn)移到微量離心管（）中；（3）將微量離心管放到PCR儀中；（4）設(shè)置PCR儀的工作參數(shù)。（5）DNA在PCR儀中大量擴(kuò)增。2．4 水浴法：將微型離心管依次在95℃、55℃、72℃的恒溫水浴鍋中循環(huán)處理相應(yīng)時(shí)間。3．實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)3．1避免外源DNA污染：所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前高壓滅菌。3．2緩沖液和酶分裝成小份，－20℃低溫保存。3．3每添加一種反應(yīng)成分，更換一個(gè)移液器的槍頭。3．4混勻后離心處理，使反應(yīng)液集中在離心管底部。4．結(jié)果分析與評(píng)價(jià)4．1反應(yīng)液稀釋：取2181。LPCR反應(yīng)液，添加98181。L蒸餾水；2．分光光度計(jì)調(diào)零：將100181。L蒸餾水添加到比色杯中，在260nm處將分光光度計(jì)調(diào)整讀數(shù)為零。4．2將100181。L反應(yīng)稀釋液倒入比色杯中，測(cè)定在260nm處的光吸收值。4．3計(jì)算：DNA含量＝50光吸收值稀釋倍數(shù)（三）課堂總結(jié)、點(diǎn)評(píng)（四）實(shí)例探究例1 在（ ）的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)解開A. 10－20℃ B. 80－100℃ C. 20－30℃ D. 40－60℃解析：蛋白質(zhì)大多不能忍受60－80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會(huì)變性。答案：B例2 關(guān)于DNA的復(fù)制，下列敘述正確的是（ ），只能從5’端延伸DNA鏈’端向5’端延伸解析：由于DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，只能從引物的3’端即復(fù)制方向由3’端向5’端延伸；由于DNA分子是反向平行的，子鏈?zhǔn)且罁?jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，在DNA聚合酶作用下合成的，其合成方向是從子鏈5’端向3’端延伸。答案：C綜合應(yīng)用例3 下列有關(guān)PCR描述，不正確的是（ ）＝（1＋X）n解析：PCR是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，它以極少量的DNA為模板，以四種脫氧核苷酸為原理，在引物的作用下使DNA聚合酶從引物的3’端連接脫氧核苷酸，短時(shí)間內(nèi)迅速?gòu)?fù)制上百萬(wàn)份的DNA拷貝，其擴(kuò)增產(chǎn)量為y＝（1＋X）n，y代表DNA片段擴(kuò)增后的拷貝數(shù)，x表示平均每次的擴(kuò)增效率，n代表循環(huán)次數(shù)，因此答案選D。答案：D課后探究PCR與生物體DNA復(fù)制有何區(qū)別？如果在案件偵破過(guò)程中，只收集到一根毛發(fā)，但它所含的遺傳信息太少，該怎么辦呢？★教后小記教師在教學(xué)過(guò)程中，可以先引導(dǎo)學(xué)生回憶必修2的有關(guān)DNA復(fù)制的知識(shí)，在此基礎(chǔ)上，學(xué)生可加深對(duì)于PCR原理的認(rèn)識(shí)。對(duì)于PCR反應(yīng)過(guò)程的教學(xué)，應(yīng)以讀圖識(shí)圖為主。教材中反應(yīng)過(guò)程圖解詳細(xì)的描繪了參與PCR的各種組成成分；每一輪反應(yīng)的三個(gè)基本步驟—變性、復(fù)性、延伸；每一步驟的作用。教師在教學(xué)中可以請(qǐng)學(xué)生在讀圖的同時(shí)，結(jié)合教科書中的文字說(shuō)明來(lái)加深理解。當(dāng)學(xué)生遇到難以理解的地方時(shí)，教師要及時(shí)給予解答。25 / 25