【正文】 pes () in the seleniumenriched plate medium培養(yǎng)液硒濃度(μg/L)菌絲體吸光值菌絲體含硒量(μg/g)硒含量提高倍數(shù)CK510152025303540圖10白色金針菇誘變5min菌絲體含硒量和有機(jī)物消耗量與硒濃度梯度的曲線(xiàn)圖 Curves of the selenium and Consumption of organic matter of mycelium of white Flammulina velutipes ()in different selenium concentration gradient 由表17和圖11可知，白誘10在富硒CM固體平板上具有較強(qiáng)的富硒能力。在所測(cè)的硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力，出現(xiàn)了兩個(gè)峰值，分別為含硒量20和35μg/L的固體平板，但后者富硒能力顯著高于前者。因此適宜濃度的固體平板硒含量有助于該菌種的富硒能力的提高，硒濃度過(guò)高以及過(guò)低均會(huì)降低其富硒能力。在有機(jī)物消耗方面，其中在含硒量20μg/L的固體平板上培養(yǎng)的菌絲體的有機(jī)物消耗量值明顯高于其他的固體平板。因此，白誘10在富硒CM固體平板含硒量為35μg/L的時(shí)候，富硒能力最強(qiáng)，；在固體平板含硒量為20μg/L的時(shí)候，其生長(zhǎng)速度最快。綜合考慮菌種生長(zhǎng)速率、菌絲體富硒能力，因而較好的培養(yǎng)方案為配置含硒量為20μg/L的培養(yǎng)基培養(yǎng)白誘10菌絲體。表17 白色金針菇誘變10min()在平板富硒培養(yǎng)基中對(duì)硒的富集特性Table 17. Seaccumulated characteristics of white Flammulina velutipes () in the seleniumenriched plate medium培養(yǎng)液硒濃度(μg/L)菌絲體吸光值菌絲體含硒量(μg/g)硒含量提高倍數(shù)CK510152025303540圖11 Curves of the selenium and Consumption of organic matter of mycelium of white Flammulina velutipes ()in different selenium concentration gradient 表18金針菇201原種()在平板富硒培養(yǎng)基中對(duì)硒的富集特性Table 18. Seaccumulated characteristics of Flammulina velutipes 201 in the seleniumenriched plate medium培養(yǎng)液硒濃度(μg/L)菌絲體吸光值菌絲體含硒量(μg/g)硒含量提高倍數(shù)CK510152025303540圖12金針菇201原種菌絲體含硒量和有機(jī)物消耗量與硒濃度梯度的曲線(xiàn)圖 Curves of the selenium and Consumption of organic matter of mycelium of Flammulina velutipes 201 in different selenium concentration gradient由表18和圖12可知：在所測(cè)的硒濃度范圍內(nèi)，該菌種出現(xiàn)了三個(gè)富硒能力的峰值，但以30μg/L含硒量的平板所培養(yǎng)的菌絲體的富硒能力最強(qiáng)。其生長(zhǎng)速率是在含硒量為35μg/L的平板上達(dá)到峰值。表19金針菇201誘變5min ()在平板富硒培養(yǎng)基中對(duì)硒的富集特性Table 19. Seaccumulated characteristics of Flammulina velutipes () in the seleniumenriched plate medium培養(yǎng)液硒濃度(μg/L)菌絲體吸光值菌絲體含硒量(μg/g)硒含量提高倍數(shù)CK 5 10 15 20 25 30 35 40 圖13 Curves of the selenium and Consumption of organic matter of mycelium of Flammulina velutipes () in different selenium concentration gradient由表19和圖13可知：在所測(cè)的硒濃度范圍內(nèi)，該菌種出現(xiàn)了三個(gè)富硒能力的峰值，但以35μg/L含硒量的平板所培養(yǎng)的菌絲體的富硒能力最強(qiáng)。其生長(zhǎng)速率是在含硒量為15μg/L的平板上達(dá)到峰值。表20金針菇201誘變10min ()在平板富硒培養(yǎng)基中對(duì)硒的富集特性Table 20. Seaccumulated characteristics of Flammulina velutipes () in the seleniumenriched plate medium培養(yǎng)液硒濃度(μg/L)菌絲體吸光值菌絲體含硒量(μg/g)硒含量提高倍數(shù)CK5101520253035———40圖14 Curves of the selenium and Consumption of organic matter of mycelium of Flammulina velutipes () in different selenium concentration gradient由表20和圖14可知：在所測(cè)的硒濃度范圍內(nèi)，該菌種出現(xiàn)了三個(gè)富硒能力的峰值，但以5μg/L含硒量的平板所培養(yǎng)的菌絲體的富硒能力最強(qiáng)。其生長(zhǎng)速率是在含硒量為40μg/L的平板上達(dá)到峰值。 對(duì)白色金針菇和金針菇201及其誘變菌種的相關(guān)參數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析 紫外誘變對(duì)白色金針菇和金針菇201的生長(zhǎng)速率以及富硒能力的影響表21 紫外誘變前后菌絲體生長(zhǎng)速度的配對(duì)樣本t檢驗(yàn)Table 21. Paired samples t test for UVirradiation on the mycelium growth speed 組別均值自由度P值對(duì)1對(duì)照組 誘變529對(duì)2對(duì)照組 誘變1029對(duì)3誘變5 誘變1027由表21可知，，因此紫外誘變沒(méi)有顯著性的改變菌絲體的生長(zhǎng)速度。表22 紫外誘變前后菌絲體富硒能力的配對(duì)樣本t檢驗(yàn)Table 22. Paired samples t test for UVirradiation on the capability of the seaccumulating of the mycelium組別均值自由度P值對(duì)1對(duì)照組 誘變531對(duì)2對(duì)照組 誘變1031對(duì)3誘變5 誘變1031由表22可知，紫外誘變后，富硒能力下降，誘變時(shí)間越長(zhǎng)其富硒能力越差。其中，對(duì)照組與誘變10min之間的p=，即與原種富硒能力相比較，紫外誘變10min后菌種的富硒能力極顯著的降低了。誘變5min與誘變10min之間的p=，即與誘變5min菌種的富硒能力相比較，紫外誘變10min后菌種的富硒能力顯著的降低了。 白色金針菇和金針菇201的生長(zhǎng)速率以及富硒能力的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)表23 獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)Table 23. Independent samples t test項(xiàng)目菌種樣本數(shù)均值P值生長(zhǎng)速度白色金針菇47金針菇20147富硒能力白色金針菇48金針菇20148由表23可知，白色金針菇與金針菇201之間的生長(zhǎng)速度以及富硒能力沒(méi)有顯著性的差異。 固體、液體培養(yǎng)對(duì)金針菇生長(zhǎng)速率和富硒能力的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)表24 獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)Table 24. Independent samples t test項(xiàng)目類(lèi)型樣本數(shù)均值P值富硒能力固體平板47液體發(fā)酵47由表24結(jié)合我在實(shí)驗(yàn)室記錄的金針菇固液培養(yǎng)的生長(zhǎng)速度的數(shù)據(jù)可知，液體發(fā)酵所培養(yǎng)的金針菇的富硒能力以及生長(zhǎng)速度極顯著的高于其對(duì)應(yīng)的固體平板所培養(yǎng)出來(lái)的金針菇。4 結(jié)論與展望 結(jié)論 金針菇在液體富硒培養(yǎng)液中，發(fā)酵液基本清澈透明，透出淡淡的香味，菌絲球基本呈現(xiàn)球狀、白色。發(fā)酵終點(diǎn)pH與菌絲體干重有著較為明顯的相關(guān)性。 金針菇在固體平板富硒培養(yǎng)中，菌絲體在較低的硒濃度梯度下菌落直徑和有機(jī)物消耗量比較大，菌絲密度高，菌絲外觀比較粗壯。 針對(duì)液體發(fā)酵，在我們所測(cè)定的硒濃度梯度內(nèi)，金針菇在同一硒濃度梯度下的生長(zhǎng)速度與富硒能力基本能同時(shí)達(dá)到最佳值，并且達(dá)到生長(zhǎng)和富硒的最佳狀態(tài)時(shí)的硒濃度梯度一般都在20μg/L范圍內(nèi)。然而，固體平板培養(yǎng)金針菇菌絲體的最佳生長(zhǎng)及富硒狀態(tài)的硒濃度梯度范圍是在20~35μg/L之間?？梢?jiàn)培養(yǎng)基物性的差異改變了金針菇菌絲體的耐硒特性。 通過(guò)配對(duì)樣本t檢驗(yàn)、獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，紫外誘變沒(méi)有顯著性的改變菌絲體的生長(zhǎng)速度；卻顯著的降低了菌絲體的富硒能力，并且紫外照射時(shí)間越長(zhǎng)，減弱效應(yīng)越明顯；白色金針菇與金針菇201之間的生長(zhǎng)速度以及富硒能力沒(méi)有顯著性的差異；液體發(fā)酵所培養(yǎng)的金針菇的富硒能力以及生長(zhǎng)速度極顯著的高于其對(duì)應(yīng)的固體平板所培養(yǎng)出來(lái)的金針菇。 展望 硒元素影響著人體的健康[17]。通過(guò)富硒金針菇菌種的選育，可以得知金針菇在液體培養(yǎng)中，生長(zhǎng)速度較快，富硒能力較強(qiáng)。金針菇本身具有美味可口、味道鮮美以及多種營(yíng)養(yǎng)成分，因此非常適合作為富硒食品開(kāi)發(fā)的研究對(duì)象。 在實(shí)驗(yàn)中，液體菌種的富硒能力和生長(zhǎng)速度都是非常高的。相比于固體菌種，液體菌種更加適合于大規(guī)模菌種生產(chǎn)，在縮短生產(chǎn)周期、提高復(fù)習(xí)效率方面有著重大的潛力。目前，液體菌種越來(lái)越受到人們的青睞，它將為科研、為缺硒地區(qū)做出重大貢獻(xiàn)。 金針菇菌絲體的富硒能力大大的高于子實(shí)體，為以后提高富硒栽培試驗(yàn)奠定好基礎(chǔ)。不斷的提高金針菇菌絲體、子實(shí)體的含硒量，是解決硒缺乏的有效途徑。后續(xù)研究需要挑選出遺傳形狀穩(wěn)定的、富硒能力較高的菌絲體去栽培，為以后的深入研究子實(shí)體栽培實(shí)驗(yàn)提供保障。參考文獻(xiàn)[1]. 李春,張利霞,李暉,[J].中國(guó)食用菌,1997,17(1):2021.[2]. 李日幫,譚見(jiàn)安,王五一,[J].地理學(xué)報(bào),1999,54(2):158164.[3]. 尹良偉,馬海英,王懷瑾,[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào),2008,23(6):8183.[4]. 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Rayman, importance of selenium to human health[J].Lancet,2000,356(9225):233241.附錄培養(yǎng)基配置的原則① 營(yíng)養(yǎng)適宜 根據(jù)食用菌種類(lèi)選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)。不同食用菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求不盡相同，因此需首先根據(jù)不同食用菌的營(yíng)養(yǎng)需求，配置針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。② 營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào) 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)間的濃度比例要適宜。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)低，不能滿(mǎn)足食用菌菌絲正常生長(zhǎng)需要，濃度過(guò)高則有抑制或殺菌作用。此外，各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的比例是影響食用菌菌絲生長(zhǎng)的重要因素。在各營(yíng)養(yǎng)成分比例中，最重要的是碳氮比。碳源不足易使菌絲體衰老和自溶，氮源不足易使菌絲體生長(zhǎng)過(guò)慢。金針菇為木腐菌，可利用多種氮源，其中以有機(jī)氮最好，如蛋白胨。所需要的碳素營(yíng)養(yǎng)都來(lái)自有機(jī)碳化合物，以淀粉、葡萄糖最好。金針菇是維生素B?、B?的天然缺陷型，必須添加維生素B?、B?才能生長(zhǎng)良好。還需要一定量的無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，如KH?PO?、硫酸鎂等。添加鎂離子和硫酸根離子后，菌絲生長(zhǎng)旺盛。③ 環(huán)境條件要適宜 溫度是影響金針菇菌絲體生長(zhǎng)發(fā)育的重要因素，最適溫度為23～25℃。金針菇屬喜濕性菌類(lèi)，培養(yǎng)料含水量60%～65%時(shí)，菌絲能正常生長(zhǎng)。菌絲體生長(zhǎng)階段空氣相對(duì)濕度應(yīng)控制在60%～70%。金針菇喜弱酸性環(huán)境條件，～。④ 用料經(jīng)濟(jì)