【導(dǎo)讀】九江縣婦幼保健院檢驗科程序性文件文件編號：JJXBJY-1-2020版本/修訂號：A/0 主題內(nèi)容目錄生效日期：20202020第1頁共62頁 日期撰寫人審核者負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)人 汪為寬汪為寬 薃螇荿蕿螅芅薈袇裊膁薈薇肁肇薇蠆袃蒞薆螂聿芁蚅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀袈肅莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螂羇肆芆裊蝿莄芆薄羅芀蒞蚇螈膆莄蝿羃肂莃蕿螆肈莂蟻肁莇莁螃襖芃莀袆肀腿莀薅袃肅葿蚈肈羈蒈螀袁艿蕆蒀肆膅蒆螞衿膁蒅螄膅肇蒄袆羇莆蒄薆螀節(jié)蒃蚈羆膈薂螁螈肄薁蒀羄羀薀薃螇荿蕿螅芅薈袇裊膁薈薇肁肇薇蠆袃蒞薆螂聿芁蚅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀袈肅莈艿薈羈芄羋蝕膄膀芇螂羇肆芆裊蝿莄芆薄羅芀蒞蚇螈膆莄蝿羃肂莃蕿螆肈莂蟻肁莇莁螃襖芃莀袆肀腿莀薅袃肅葿蚈肈羈蒈螀袁艿蕆蒀肆膅蒆螞衿膁蒅螄膅肇蒄袆羇莆蒄薆螀節(jié)蒃蚈羆膈薂螁螈肄薁蒀羄羀薀薃螇荿蕿螅芅薈袇裊膁薈薇肁肇薇蠆袃蒞薆螂聿芁蚅襖袂膇蚄薄肇肅芁蚆袀罿芀袈肅莈艿薈

　　

【正文】 準(zhǔn)人 汪為寬 汪為寬 檢驗方法 的 確認(rèn)程序 1 目的：適應(yīng)醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，確保檢驗方法準(zhǔn)確可靠，以滿足臨床需要。 2 適用范圍：實驗室所有開展的檢驗方法。 3 工作程序： 、器材、儀器、試劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品、供應(yīng)品。 。在檢測標(biāo)本前，實驗室必須對使用方法的下述的性能規(guī)格進(jìn)行確認(rèn)：準(zhǔn)確度、精密度。如有必要，可添 加特異性和分析靈敏度，以及檢驗結(jié)果的報告范圍、參考值以及其它適合的特性。 實驗室引進(jìn)我國注冊登記的國外方法（試劑盒）或我國取得生產(chǎn)許可證和方法（試劑盒）時，在報告檢驗結(jié)果前，必須得到下列特性的性能規(guī)格：準(zhǔn)確度、精密度、檢驗結(jié)果的報告范圍（或者線性）、參考值。實驗室至少應(yīng)檢查其準(zhǔn)確度、精密度。必要時增加特異性和分析靈敏度，以及報告范圍，參考值是否符合本實驗室的服務(wù)人群等。如與廠商提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，應(yīng)取得相符結(jié)果。 實驗室自行建立的方法，在報告結(jié)果患者前： 建立每一方法的性能 規(guī)格，包括：準(zhǔn)確度、精密度、特異性、干擾因素的影響、分析靈敏度、檢驗結(jié)果的報告范圍（或者線性）、參考范圍、其它需要檢測的性能。 建立該方法的校準(zhǔn)程序和 ICQ 規(guī)則。 實驗室必須有上述活動的記錄和文件。并保存到停止到使用這些方法后半年。 實驗室必須有與所做檢驗的專業(yè)和工作量相適應(yīng)的，足夠的器材、儀器、試劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品、供應(yīng)品。 實驗室必須確定正確制備、儲存和使用上述體外診斷用品的條件。 這些條件包括：水的質(zhì)量、溫度校準(zhǔn)。保護(hù)器材和儀器，不致由于電流的波動各中斷引起對檢驗結(jié)果的不利影響。 必須將糾正由于達(dá)不到規(guī)定所采取的改正措施文件化。 用商品試劑盒時，對于國家規(guī)定應(yīng)有生產(chǎn)許可證，注冊登記證的品種，決不能使用沒有生產(chǎn)許可證、注冊登記證的商品試劑盒。尚未規(guī)定者，生產(chǎn)廠家應(yīng)提供該產(chǎn)品性能規(guī)格以及質(zhì)量保證書。 試劑、溶液、培養(yǎng)基、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其它供應(yīng)品，必須加以標(biāo)記，標(biāo)記上應(yīng)有： 識別名：當(dāng)有意義時應(yīng)標(biāo)明濃度，效價，滴度等 儲存要求 制備日期和失效期 其它與正確使用有關(guān)的信息 應(yīng)根據(jù)儀器制造商說明或依 據(jù)權(quán)威機構(gòu)的要求來選擇和使用校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。實驗室自行選用的校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，應(yīng)有實驗依據(jù)證明其不影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。 當(dāng)試劑、溶液、培養(yǎng)基、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品或其它供應(yīng)品超過其失效期，可能已經(jīng)變質(zhì)或者質(zhì)量不合格時，不能使用。只有當(dāng)生產(chǎn)廠家或權(quán)威機構(gòu)出具書面證明或者實驗室有充足依據(jù)證明其不影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，方可在規(guī)定的延長期間使用。 除非有生產(chǎn)廠家說明，不同批號試劑盒中成分不能相互交換。 實驗方法的評價 準(zhǔn)確度的評價九江縣婦幼保健院檢驗科 程序性文件 文件編號： JJXBJY12020 版本 /修訂號： A/0 主題內(nèi)容 檢驗方法的卻認(rèn)程序 生效日期： 20202020 第 21 頁共 62 頁 日期 撰寫人 審核者 負(fù)責(zé)人 批準(zhǔn)人 汪為寬 汪為寬 準(zhǔn)確度是指測定結(jié)果偏離真值的程度，它與系統(tǒng) 誤差的隨機誤差合成的大小相對應(yīng)，其含義乃是不準(zhǔn)之意。 在實際測量過程中，往往需要做幾次平行測定。精密度是指測定結(jié)果偏離平均值的程度，常用偏差來表示： 算術(shù)平均誤差 標(biāo)準(zhǔn)偏差 其中為單次測定值，為多次測定值的平均值， n 為測定次數(shù)。精密度又稱精度，精度這個詞也常用作泛指性的廣義名詞。例如：實驗相對誤差為 ，則?；\統(tǒng)說精度為 104。如果是由系統(tǒng)誤差與隨機誤差共同引起，則可說其準(zhǔn)確度為 104。 精密度高只是準(zhǔn)確度高的必要條件，而不是充分條件，不能說精密度高則準(zhǔn)確度一定高。 精密度評價 ：精密度通常用不精密度表示，精密度評價的目的是評價檢測設(shè)備的總不精密度，是設(shè)備在一定時間內(nèi)的變異性。許多變異源可在不同程度上影響設(shè)備的精密度，通常在進(jìn)行精密度評價時要充分考慮所有影響總不精密度的來源，但不必去評價每個來源的相對大小。用于描述與時間相關(guān)的不精密度的內(nèi)容包括：批內(nèi)、批間、日內(nèi)和日間不精密度。其中，批內(nèi)不精密度和總不精密度的內(nèi)容最為重要。 ：為減少對結(jié)果的影響因素，全部實驗過程中應(yīng)使用單一批號的試劑和校準(zhǔn)物。實驗樣本可采用穩(wěn)定化、蛋白基質(zhì)、可模擬臨床樣本特性的產(chǎn)品，必要 時，可采用穩(wěn)定化的混合冷凍血清。選擇樣本濃度時應(yīng)考慮醫(yī)學(xué)決定水平，推薦使用 2 個或以上濃度的樣本。 ：精密度評價實驗應(yīng)在操作者完全熟悉實驗過程和評價方案以后（通常需要 5 天時間）進(jìn)行。每天分 2 批測定樣本，各批實驗間至少間隔 2 小時。每批測定 2 個濃度樣本，每個樣本重復(fù)測定 2 次。按表 1 記錄實驗結(jié)果。 （略） 測定線性范圍評價 線性是分析方法的一個特征，不同于準(zhǔn)確度和精密度。線性范圍（ LinearRange）是指系統(tǒng)最終的輸出值（濃度或活性）與被分析物的濃度或活性成比例的范圍。線性范 圍的測量即測定濃度曲線接近直線的程度，它反映整個系統(tǒng)的輸出特性。線性檢驗系統(tǒng)反應(yīng)，包括校準(zhǔn)、線性化技術(shù)、系數(shù)和儀器反應(yīng)。 一般要求：執(zhí)行分析過程的實驗人員必須掌握儀器操作和維護(hù)程序、樣本準(zhǔn)備方法和校準(zhǔn)。對較簡單的設(shè)備需要 5 天或更少的時間，對較復(fù)雜的多通道設(shè)備需要 5 天或更長的時間。在完成儀器熟悉過程后開始實驗并收集數(shù)據(jù)。 實驗樣本：線性實驗應(yīng)使用與病人樣本相似的樣本或注明樣本的基質(zhì)類型，最少使用 4 個濃度水平，推薦 5 個水平。高值樣本應(yīng)高于線性上限 30%，低值樣本應(yīng)低于線性低限。線性實驗可使用的樣本包括：混合病人 血清（理想的樣本基質(zhì)）、加入待測物的混合人血清（加入品在沒有干擾物存在時不需高純度）、對特殊材料透析過的混合人血清（用于降低分析物濃度，如：透析、熱處理、層析）、對鹽水透析過的混合血清（在線性實驗中使用此類樣本可掩蓋不同的基質(zhì)效應(yīng)）。商品質(zhì)控物或校準(zhǔn)物（此類樣本由于不是正常的生理形式，可掩蓋實際的線性結(jié)果）、水溶液（一般無基質(zhì)效應(yīng)），等。 實驗程序：全部實驗和數(shù)據(jù)采集應(yīng)在同一工作日內(nèi)完成。分析序列應(yīng)為隨機排列。有顯著攜帶污染時，應(yīng)用空白隔開樣本。每個濃度樣本重復(fù)測定 4 次。記錄測定結(jié)果。 結(jié)果分析：觀察結(jié)果有 無明顯的數(shù)據(jù)錯誤，若有明顯異常時，應(yīng)判斷是否為離群點。對于九江縣婦幼保健院檢驗科 程序性文件 文件編號： JJXBJY12020 版本 /修訂號： A/0 主題內(nèi)容 檢驗方法的卻認(rèn)程序 生效日期： 20202020 第 22 頁共 62 頁 日期 撰寫人 審核者 負(fù)責(zé)人 批準(zhǔn)人 汪為寬 汪為寬 特定濃度 Yi 值的離群點進(jìn)行檢驗時，需將其 4 個重復(fù)值從大到小排列（ Yi1 到 Yi4）。計算極差 D=Yi1Yi4。若 Yi1 可能是離群點，計算： D1=（ Yi1– Yi2） /D。若 Yi4 可能是離群點，計算： D4=（ Yi3– Yi4） /D。計算結(jié)果（ D1 或 D4）如果大于 ()或 ()，則該點判為離群點。全部數(shù)據(jù)中的離群點如果有 2 點或以上，則應(yīng)保留全部數(shù)據(jù)或重新進(jìn)行實驗。 以分析物濃度為 X 軸，反應(yīng)值或儀器輸出值為 Y 軸，繪制 XY 線性圖。目測線性和進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，判斷是否符合要求。 對于線性結(jié)果的分析，應(yīng)當(dāng)注意統(tǒng)計學(xué)標(biāo)準(zhǔn)和臨床可接受限不同；應(yīng)慎用方法學(xué)線性范圍從0 開始；有臨床意義的濃度應(yīng)在線性評價中，如最低線性濃度、醫(yī)學(xué)決定水平及最高線性濃度。 方法學(xué)比較 臨床實驗室中使用的檢驗方法，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展不斷更新，在引進(jìn)新方法前或用一種方法替代另一種方法時為保證臨床實驗室檢驗結(jié)果的連續(xù)性，通常要進(jìn)行偏差分析，以比較不同的分析方法在測定同一分析項目時結(jié)果的差異。 ：用于方法學(xué)對比實驗的樣本，應(yīng)來源 于健康人或患者，無明顯干擾因素，并應(yīng)盡量避免使用貯存樣本。全部樣本在醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)均勻分布，樣本至少 40 例，增加可提高可信性。 ：可采用廠家要求的實驗室常規(guī)方法或公認(rèn)的參考方法。對比方法應(yīng)具有好的精密度，沒有已知的干擾物，與評價方法單位相同，相對國家標(biāo)準(zhǔn)或參考方法的偏差為已知。 ： a)操作者應(yīng)有足夠的時間熟悉儀器操作，保養(yǎng)程序及評價方案。在全部實驗過程中，都必須建立適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制程序。 b)進(jìn)行方法學(xué)對比實驗，每天應(yīng)測定 8 份樣本，每份樣本都用評價方法和對比方法進(jìn)行雙份測定，至少 連續(xù)測定 5 天，共 40 份樣本。測定時先對樣本排序，再按順序 1 至 8 測定第一次，順序 8 至 1 測定第二次。按表 3 收集實驗數(shù)據(jù) c)結(jié)果繪圖：實驗結(jié)果可繪制 4 張圖，第一張圖是 Yi 對 Xi 的均值散點圖，第二張圖為 Yij對 Xi 散點圖，第三張為（ YiXi）對 Xi 偏差圖，第四張為（ YijXij）對 Xi的偏差圖。 方法建立時的條件選擇 在方法建立的原理確定后，尚需根據(jù)其原理來選擇合適的條件，以保證所建的方法可靠。下面以光度法為例介紹其條件選擇的主要環(huán)節(jié)。顏色反應(yīng)是光度分析的基礎(chǔ)，因此，用作光度測定的顏色反應(yīng)至少要具備以 下幾條：反應(yīng)有較高的特異性，從而干擾??；反應(yīng)產(chǎn)生的有色物質(zhì)吸光系數(shù)要大，大者靈敏度高；有色產(chǎn)物的離解度要小，小則穩(wěn)定；此外，還要求有色產(chǎn)物有恒定的組成成分，使產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定。由于影響顏色反應(yīng)的因素很多，如溫度、 pH、試劑濃度、反應(yīng)的時間等等。這些因素在建立新方法時都要逐項試驗，確定最佳實驗條件。 選擇合適的吸收光譜 實際上就是測定顏色反應(yīng)產(chǎn)生的光吸收曲線。方法是在整個可見光區(qū)（ 400700nm）以 10nm（在接近最大吸收波長范圍還應(yīng)再細(xì)分）間隔。分為十幾個點測定其在不同波長時的吸光度，然后以吸 光度為縱坐標(biāo)，波長為橫坐標(biāo)繪成光吸收曲線。在條件許可的情況下，應(yīng)采用雙光束分光光度計在可見光區(qū)進(jìn)行波長掃描，結(jié)果較為可靠。同時，還應(yīng)以同法分別測定其空白液和標(biāo)準(zhǔn)物顏色產(chǎn)物的吸收曲線。測定光吸收曲線的目的是找出最大吸收波長，九江縣婦幼保健院檢驗科 程序性文件 文件編號： JJXBJY12020 版本 /修訂號： A/0 主題內(nèi)容 檢驗 方法的卻認(rèn)程序 生效日期： 20202020 第 23 頁共 62 頁 日期 撰寫人 審核者 負(fù)責(zé)人 批準(zhǔn)人 汪為寬 汪為寬 作為光度法波長選擇的依據(jù)。因為在最大吸收波長測定，可獲得最大靈敏度，且能更符合比耳定律。然而在實際使用中，不能單純考慮靈敏度高，還要考慮在測定濃度范圍能否符合比耳定律，并能在光度計準(zhǔn)確區(qū)域內(nèi)（吸光度 之間）讀出讀數(shù)。有時由于測定的最大吸收波長并不是所要測定物質(zhì)的特性吸收波長 ，即同時存在具有相似最大吸收的干擾物質(zhì)，為了保證實驗的特異性，常改用特有而非最大吸收波長進(jìn)行測定。例如用磷鉬酸測定血糖，選用波長 420nm，溶液對此波長的吸收比其它波長光線的吸收都低，其目的是使參考值有一個較低的吸收，這樣可允許在相同情況下對高出參考值的血糖也能得到準(zhǔn)確的讀數(shù)。因為在這項測定中，高血糖是常見的變化方向。 測定方法適用的濃度范圍 根據(jù)光吸收定律，溶液的吸光度應(yīng)與溶液的濃度成正比。但由于