【導(dǎo)讀】 1 蒂蝿袃膂薂袈芄螈螄羈莆薀蝕羀葿莃肈罿羋蕿羄羈莁蒁袀羈蒃蚇螆羇膃蒀螞羆芅蚅羈肅莇蒈袇肄葿蚄螃肅腿蒆蠆肂莁螂蚅肂蒄薅羃肁膃螀衿肀芆薃螅聿莈螈蟻膈蒀薁羀膇膀莄袆膆節(jié)蕿袂膆蒅莂螈膅膄蚈蚄膄芇蒁膃荿蚆袈膂蒁葿螄芁膁蚄蝕芁芃蕆罿芀蒞蚃羅艿薈蒅袁羋芇螁螇襖莀薄蚃襖蒂蝿袃膂薂袈芄螈螄羈莆薀蝕羀葿莃肈罿羋蕿羄羈莁蒁袀羈蒃蚇螆羇膃蒀螞羆芅蚅羈肅莇蒈袇肄葿蚄螃肅腿蒆蠆肂莁螂蚅肂蒄薅羃肁膃螀衿肀芆薃螅聿莈螈蟻膈蒀薁羀膇膀莄袆膆節(jié)蕿袂膆蒅莂螈膅膄蚈蚄膄芇蒁膃荿蚆袈膂蒁葿螄芁膁蚄蝕芁芃蕆罿芀蒞蚃羅艿薈蒅袁羋芇螁螇襖莀薄蚃襖蒂蝿袃膂薂袈芄螈螄羈莆薀蝕羀葿莃肈罿羋蕿羄羈莁蒁袀羈蒃蚇螆羇膃蒀螞羆芅蚅羈肅莇蒈袇肄葿蚄螃肅腿蒆蠆肂莁螂蚅肂蒄薅羃肁膃螀衿肀芆薃螅聿莈螈蟻膈蒀薁羀膇膀莄袆膆節(jié)蕿袂膆蒅莂螈膅膄蚈蚄膄芇蒁膃荿蚆袈膂蒁葿螄芁膁蚄蝕芁芃蕆罿芀蒞蚃羅艿薈蒅袁羋芇螁螇襖莀薄蚃襖蒂蝿袃膂薂袈芄螈螄羈莆薀蝕羀葿莃肈罿羋蕿

　　

【正文】 應(yīng)中以及反應(yīng)后可通過測定放射性標(biāo)記的 dNTP 摻入量，計(jì)算出互補(bǔ)DNA的合成效率，在凝膠電泳后，進(jìn)行放射自顯影分析產(chǎn)物的分子大小，探索最佳反應(yīng)條件。 互補(bǔ) DNA第二條鏈的合成 先用堿解或核酸酶酶解的方法除去互補(bǔ) DNAmRNA雜交鏈中的 mRNA鏈，然后以互補(bǔ) DNA 第一鏈為模板合成第二鏈，并用核酸酶 S1專一性切除單鏈 DNA。 互補(bǔ) DNA克隆 載體有兩種質(zhì)粒和噬菌體，根據(jù)重組后插入的互補(bǔ) DNA 是否能夠表達(dá)、能否經(jīng)轉(zhuǎn)錄和翻譯合成蛋白質(zhì)，又將載體分為表達(dá)型載體和非表達(dá)型載體?；パa(bǔ) DNA 插入片段小于 10 千堿基對，可選用質(zhì)粒載體，如大于 10 千堿基對則選用噬菌體作為載體。 二、化學(xué)合成法 較小的蛋白質(zhì)或多肽的編碼基因可以采用人工化學(xué)合成法合成，其先決條件是已知目的基因的核苷酸序列，或已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，按相應(yīng)的密碼子推 導(dǎo)出 DNA 的堿基序列。用化學(xué)方法合成目的基因不同部位的兩條鏈的寡核苷酸短片段，再退火成為兩端形成粘末端的 DNA雙鏈片段，然后將這些雙鏈片段按正確的次序進(jìn)行退火使連接成較長的 DNA 片段，再用連接酶連接成完整的基因。 人工化學(xué)合成的限制： 不能合成太長的基因， 5060個(gè)堿基對； 人工合成堿基對時(shí)，遺傳密碼的簡并會(huì)為選擇密碼子帶來很大的困難； 費(fèi)用較高。 1 固固 定定 化化 酶酶 及及 固固 定定 化化 酶酶 的的 特特 點(diǎn)點(diǎn) ：： 酶酶 類類 可可 粗粗 分分 為為 天天 然然 酶酶 和和 修修 飾飾 酶酶 ， 固固 定定 化化 酶酶 屬屬 于于 修修 飾飾 酶酶 ， 修修 飾飾 酶酶 類類 還還 包包 括括 經(jīng)經(jīng) 過過 化化 學(xué)學(xué) 修修 飾飾 的的酶酶 和和 用用 分分 子子 生生 物物 學(xué)學(xué) 方方 法法 在在 分分 子子 水水 平平 上上 進(jìn)進(jìn) 行行 改改 良良 的的 酶酶 等等 。 固固 定定 化化 酶酶 最最 大大 特特 點(diǎn)點(diǎn) 是是 既既 具具 有有 生生 物物 催催 化化 劑劑 的的 功功 能能 ， 又又 具具 有有 固固 相相 催催 化化 劑劑的的 特特 性性 。 固固 相相 酶酶 還還 具具 有有 以以 下下 優(yōu)優(yōu) 點(diǎn)點(diǎn) ：： ①① 可可 多多 次次 使使 用用 ， 而而 且且 在在 多多 數(shù)數(shù) 情情 況況 下下 ， 酶酶 的的 穩(wěn)穩(wěn) 定定 性性 提提 高高 。 如如 固固 定定 化化 的的 葡葡 萄萄 糖糖 異異 構(gòu)構(gòu) 酶酶 可可 以以 在在60~65℃℃ 條條 件件 下下 連連 續(xù)續(xù) 使使 用用 超超 過過 1000h；； ②② 反反 應(yīng)應(yīng) 后后 ， 酶酶 與與 底底 物物 和和 產(chǎn)產(chǎn) 物物 易易 于于 分分 開開 ， 產(chǎn)產(chǎn) 物物 中中 無無 殘殘 留留 酶酶 ， 易易 于于 純純 化化 ， 產(chǎn)產(chǎn) 品品 質(zhì)質(zhì) 量量 高高 ；； ③③反反 應(yīng)應(yīng) 條條 件件 易易 于于 控控 制制 ， 可可 實(shí)實(shí) 現(xiàn)現(xiàn) 轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 化化 反反 應(yīng)應(yīng) 的的 連連 續(xù)續(xù) 化化 和和 自自 動(dòng)動(dòng) 控控 制制 ；； ④④ 酶酶 的的 利利 用用 效效 率率 高高 ， 單單 位位 酶酶 催催 化化 的的 底底 物物 量量 增增 加加 ， 用用 酶酶 量量 減減 少少 ；；⑤⑤ 比比 水水 溶溶 性性 酶酶 更更 適適 合合 于于 多多 酶酶 反反 應(yīng)應(yīng) 。 1 酶 反應(yīng)器 操作條件及應(yīng)用的注意事項(xiàng) 反應(yīng)器 操作條件的確 酶操作條件底物濃度 、 酶濃度 、 溫度 、 PH、 反應(yīng)液的混合與流動(dòng) . 注意事項(xiàng)酶 保持酶 反應(yīng)器 操作的穩(wěn)定性 保持 反應(yīng)器 中流體的流動(dòng)方式和狀態(tài) 防止酶的變性失活 防止微生物的污染 1 兩兩 相相 法法 培培 養(yǎng)養(yǎng) 系系 統(tǒng)統(tǒng) 必必 須須 滿滿 足足 如如 下下 條條 件件 ：： ①① 添添 加加 的的 固固 相相 （（ 如如 樹樹 脂脂 ）） 或或 液液 相相 對對 細(xì)細(xì) 胞胞 無無 毒毒 害害 作作 用用 ， 不不 影影 響響 細(xì)細(xì) 胞胞 生生 長長 和和 產(chǎn)產(chǎn) 物物 的的 合合 成成 ；； ②② 產(chǎn)產(chǎn) 物物 易易 被被 固固 相相 吸吸 附附 或或 被被 有有 機(jī)機(jī) 相相 溶溶 解解 ；； 12 ③③ 兩兩 相相 易易 分分 離離 ；； ④④ 如如 為為 固固 相相 ， 不不 可可 吸吸 附附 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 中中 的的 添添 加加 成成 分分 ， 如如 植植 物物 生生 長長 調(diào)調(diào) 節(jié)節(jié) 劑劑 、 有有 機(jī)機(jī) 成成 分分 等等 。 1 體體 外外 培培 養(yǎng)養(yǎng) 細(xì)細(xì) 胞胞 培培 養(yǎng)養(yǎng) 的的 基基 本本 條條 件件 ：： （（ 1）） 絕絕 對對 無無 菌菌 操操 作作 ；； （（ 2）） 足足 夠夠 的的 營營 養(yǎng)養(yǎng) 供供 應(yīng)應(yīng) ， 排排 除除 有有 害害 物物 質(zhì)質(zhì) 包包 括括 極極 其其 微微 量量 的的 離離 子子 摻摻 入入 ；； （（ 3）） 適適 量量 氧氧 氣氣 供供 應(yīng)應(yīng) ；； （（ 4）） 隨隨 時(shí)時(shí) 清清 除除 細(xì)細(xì) 胞胞 代代 謝謝 中中 產(chǎn)產(chǎn) 生生 的的 有有 害害 產(chǎn)產(chǎn) 物物 ；； （（ 5）） 有有 良良 好好 的的 適適 于于 生生 存存 外外 界界 環(huán)環(huán) 境境 ， 包包 括括 pH、 滲滲 透透 壓壓 和和 離離 子子 濃濃 度度 等等 ；； （（ 6）） 及及 時(shí)時(shí) 分分 種種 ， 保保 持持 合合 適適 的的 細(xì)細(xì) 胞胞 密密 度度 。 1 無無 血血 清清 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 的的 優(yōu)優(yōu) 點(diǎn)點(diǎn) 如如 下下 ：： ①① 提提 高高 了了 細(xì)細(xì) 胞胞 培培 養(yǎng)養(yǎng) 的的 可可 重重 復(fù)復(fù) 性性 ， 避避 免免 ， 避避 免免 了了 由由 于于 血血 清清 批批 之之 間間 差差 異異 的的 影影 響響 ；； ②② 減減 少少 了了 由由 血血 清清 帶帶 來來 的的 病病 毒毒 、 真真 菌菌 和和 支支 原原 體體 等等 微微 生生 物物 污污 染染 的的 危危 險(xiǎn)險(xiǎn) ；； ③③ 供供 應(yīng)應(yīng) 充充 足足 、 穩(wěn)穩(wěn) 定定 ；； ④④ 細(xì)細(xì) 胞胞 產(chǎn)產(chǎn) 品品 容容 易易 純純 化化 ；； ⑤⑤ 避避 免免 了了 血血 清清 中中 某某 些些 因因 素素 對對 有有 些些 細(xì)細(xì) 胞胞 的的 毒毒 性性 ；； ⑥⑥ 減減 少少 了了 血血 清清 中中 蛋蛋 白白 對對 某某 些些 生生 物物 測測 定定 的的 干干 擾擾 ， 便便 于于 實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 結(jié)結(jié) 果果 的的 分分 析析 。 1． 基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性的兩種主要表現(xiàn)形式是什么？基因工程菌的遺傳不穩(wěn)定性 的主要機(jī)制是什么？（ 10分） 2． 在人胰島素 AB鏈分別表達(dá)法中，為何將 AB 半乳糖苷酶基因融合？（ 10分） 3．動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法有哪些？各自的特點(diǎn)是什么？（ 10分） 4. 闡述基因工程藥物研制有那些主要過程（ 10分） 5．闡述鼠源性單克隆抗體改造后的小分子抗體類型（ 10分） 三、填空題 現(xiàn)代生物藥物的四大類型包括（天然生物藥物）、（合成與部分合成生物）、 (基因重組 多肽，蛋白類治療 )、 (基因藥物）。 鹽析法最常用的中性鹽是（硫酸銨）。（ P15） 酶的固定方法主要包括（吸附法）、 (包埋法 )、 (交聯(lián)法 )、 (共價(jià)偶聯(lián)法）。（ P50） L天冬氨酸是（酸性）氨基酸， L丙氨酸是（中性）氨基酸。（ P61） 氨基酸輸液的 pH 一般在（ ~），最佳 pH為 ()。（ P67） 1953年人工合成的第一個(gè)有生物活性的多肽是（催產(chǎn)素）。（ P71） 胸腺素生產(chǎn)工藝過程中加熱的目的是（除去雜蛋白）。（ P76） 胰島素原經(jīng)過酶水解的作用，除去（ C肽）后才能 形成有活性的胰島素。（ P83） 豬與人兩種胰島素的差別僅是 B30位上，豬的是（丙氨酸），人的則是（蘇氨酸）。（ P86） 評價(jià)一個(gè)純化工藝的好壞，主要看兩個(gè)指標(biāo)：（酶比活）和（總活力回收）。（ P99） 1紅霉素的產(chǎn)生菌是（紅霉素鏈霉菌），金霉素的產(chǎn)生菌是（金色鏈霉菌）。（ P164） 1青霉素的母核是（ 6氨基青霉烷酸）。 1肝素分子結(jié)構(gòu)單元中含有 5個(gè)（硫酸基）和 2個(gè)（羧基），呈酸性。（ P135） 1肝素酶解 離子交換制備工藝過程中，酶解時(shí)加入苯酚的目的是（殺菌消毒），而加入胰酶是為了 （釋放肝素）。（ P137） 1提取多糖時(shí)要避免酸性環(huán)境是因?yàn)樗崮芷茐亩嗵墙Y(jié)構(gòu)中的（糖苷鍵）。（ P131） 1核酸類藥物的生產(chǎn)方法有許多種，其中堿水解法只適合于（ RNA）的提取。（ P113） 1氨基酸輸液與（右旋糖酐）一起可作為代血漿藥物使用。（ P65） 克隆真核基因常用的方法有 逆轉(zhuǎn)錄法 和 化學(xué)合成法 。 13 A將抗體轉(zhuǎn)變?yōu)槊缚赏ㄟ^ 誘導(dǎo)法 、 拷貝法 、 引入法 和 化學(xué)修飾法 等途徑。 B酶固定法中的包埋法可分為 網(wǎng)格型 和 微囊型 2種 A噬菌體抗體庫的表達(dá)載體系統(tǒng)為 λ噬菌體 、 單鏈絲狀噬菌體