酵母蔗糖酶的提取及其性質(zhì)研究-資料下載頁
2025-05-26 22:00本頁面
【正文】 1kat=1mol/s 1kat = 6 107 U 酶的純度 ： ▲ 總活力 =活力單位數(shù) /mL酶液 總體積（ mL） 比活力 = 活力單位數(shù) / 毫克蛋白 純化倍數(shù) = —————— 每次比活力 第一次比活力 產(chǎn)率 %（回收率） = —————— 100 每次總活力 第一次總活力 酶的純化鑒定 ：聚丙烯酰胺凝膠電泳法、等電聚焦電泳法 稀釋后酶液的活力（按還原糖計(jì)算）： E=A650**2/ A’650*10*B 式中： A650 ──第 2~6管所測 A650 A’650──第 8管所測 A650 ── 第 8管葡萄糖取樣量 2 ── 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度 2mmol/L = 2μmol/ml 10 ──反應(yīng) 10min B ──每管加入酶液 ml數(shù) 計(jì)算各級分的比活力，純化倍數(shù)及回收率，并將數(shù)據(jù)列于下表： 級分 I II III IV 記錄體積 (ml) 蛋白質(zhì) (mg/ml) 總蛋白 (mg) Units/ml 總 Units 比活力 Units/mg 純化倍數(shù) 1 回收率 % 100 純化倍數(shù) =該步的比活力 /第一次的比活力 回收率 =該步的總活力 /第一次的總活力 ? 試管用后清洗干凈，放入烘箱 本實(shí)驗(yàn)是以蔗糖為底物，測定蔗糖酶與底物反應(yīng)的時(shí)間進(jìn)程曲線，即在酶反應(yīng)的最適條件下，每間隔一定的時(shí)間測定產(chǎn)物的生成量，然后以 酶反應(yīng)時(shí)間 為橫座標(biāo)， 產(chǎn)物生成量 為縱座標(biāo)，畫出酶反應(yīng)的時(shí)間進(jìn)程曲線，由該曲線可以看出，曲線的起始部分在某一段時(shí)間范圍內(nèi)呈直線，其 斜率 代表酶反應(yīng)的初速度。隨著反應(yīng)時(shí)間的延長，曲線斜率不斷減小，說明反應(yīng)速度逐漸降低，這可能是因?yàn)榈孜餄舛冉档秃彤a(chǎn)物濃度增高而使逆反應(yīng)加強(qiáng)等原因所致，因此測定準(zhǔn)確的酶活力，必須在進(jìn)程曲線的初速度時(shí)間范圍內(nèi)進(jìn)行，測定這一曲線和初速度的時(shí)間范圍，是酶動力學(xué)性質(zhì)分析中的組成部分和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 反應(yīng)時(shí)間對產(chǎn)物形成的影響 反應(yīng)時(shí)間對產(chǎn)物濃度的影響 管數(shù) → 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 乙酸緩沖液 H2O 葡萄糖 2M 堿性銅試劑 由加酶開始計(jì)時(shí) 蔗糖酶 反應(yīng)時(shí)間 min 0 1 3 4 8 12 20 30 40 反應(yīng)到時(shí)后立即向 “ 212”管加入 1ml堿性銅試劑中止反應(yīng) 堿性銅試劑 沸水浴上煮 8min后速冷 磷鉬酸試劑 H2O 測定 A650
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