細(xì)胞生物學(xué)第三章ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-12 12:51本頁(yè)面
【正文】 荷量有所不同，所以在同電場(chǎng)中的電泳速度不同；而在恒定條件下，同種細(xì)胞的電泳速度是相對(duì)穩(wěn)定的。所以細(xì)胞電泳技術(shù)對(duì)研究細(xì)胞癌變有重要作用。此外，細(xì)胞電泳裝臵還能用來(lái)分離不同種類的活細(xì)胞。 四、其它實(shí)驗(yàn)技術(shù) ?（一）細(xì)胞培養(yǎng) cell culture ? 胚胎培養(yǎng) —— 離體組織培養(yǎng) —— 細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞生物學(xué)的基礎(chǔ)研究技術(shù)，同時(shí)在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域都有廣闊的應(yīng)用價(jià)值。 ? 原理：將生物體的某一類群細(xì)胞，甚至單個(gè)細(xì)胞分離出來(lái)，放入具有適合細(xì)胞生活條件的培養(yǎng)器皿中，維持并促進(jìn)其正常生長(zhǎng)和繁殖。 ? 技術(shù)環(huán)節(jié)：細(xì)胞分離、培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基。細(xì)胞分離方式 —— 機(jī)械分割、酶解處理，動(dòng)物組織細(xì)胞通常以胰蛋白酶消化細(xì)胞間的聯(lián)結(jié)，植物組織細(xì)胞則是以纖維素酶和果膠酶消化細(xì)胞壁等聯(lián)結(jié)物質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)條件要盡可能與生物體內(nèi)生理狀況一致，主要是培養(yǎng)溫度、 pH值和滲透壓等。此外，細(xì)胞培養(yǎng)還必須保持嚴(yán)格無(wú)菌，因?yàn)殡x體細(xì)胞已脫離了生物體免疫系統(tǒng)的保護(hù)，是極易受細(xì)菌、真菌等微生物的污染侵害。培養(yǎng)基的選擇是決定培養(yǎng)成敗的技術(shù)關(guān)鍵，培養(yǎng)基主要成分包括：各種氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽以及能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)分裂的生長(zhǎng)素、細(xì)胞激動(dòng)素等，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中還需要增添 胎牛血清 。 ?細(xì)胞培養(yǎng)方式：培養(yǎng)瓶培養(yǎng)、液體懸浮培養(yǎng)、平板培養(yǎng)、回轉(zhuǎn)玻璃管培養(yǎng)等。 ?細(xì)胞培養(yǎng)的名詞概念： ?（ 1） 傳代：當(dāng)培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)滿一層后，必須分瓶接種再培養(yǎng)。 該人為操作稱為傳代。 ?（ 2） 原代培養(yǎng)：指從組織中分離出來(lái)，連續(xù)培養(yǎng)十代之內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)。 ?（ 3） 繼代培養(yǎng)：連續(xù)培養(yǎng)十代以后的操作。 ?（ 4） 細(xì)胞系 cell line：從原代培養(yǎng)物中接種得來(lái)的一群不均一的細(xì)胞， 可長(zhǎng)期連續(xù)傳代。 ● （ 5） 細(xì)胞株 cell strain： 是從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中篩選獲得的具有某種特殊遺傳特性、生化特性和特異標(biāo)記的培養(yǎng)細(xì)胞群。 細(xì)胞系一般都是 轉(zhuǎn)化細(xì)胞 ，可以無(wú)限傳代，長(zhǎng)期繁延下去（連續(xù)細(xì)胞系）。而細(xì)胞株卻與細(xì)胞系不同，其生存期是有限的（有限細(xì)胞系）。 ? 細(xì)胞（株）系是供細(xì)胞遺傳學(xué)、細(xì)胞生理學(xué)、免疫病理學(xué)研究的好實(shí)驗(yàn)材料。例如 HeLa 細(xì)胞系是 1953 年取自一位美國(guó)黑人婦女的子宮頸瘤上皮細(xì)胞，現(xiàn)在全世界仍采用該細(xì)胞系做人體細(xì)胞生化等研究的典型材料 。 此外 , 著名的動(dòng)物細(xì)胞試驗(yàn)材料 — CHO 細(xì)胞系 （ chinese hamster ovary) 是取自中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢組織的細(xì)胞系 。 ?（ 6） 克隆 clone ?即無(wú)性繁殖系。目前有植物克隆、動(dòng)物克隆、微生物克隆、胚胎克隆、細(xì)胞克隆和分子克隆之分。 ?細(xì)胞克隆即指由單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)繁殖而成的一群遺傳性狀完全相同的細(xì)胞群體。如果一個(gè)細(xì)胞株是通過(guò)克隆形成法產(chǎn)生的， 那么這個(gè)細(xì)胞株亦可稱為一個(gè)克隆。 （ 二） 細(xì)胞顯微操作技術(shù) ? 運(yùn)用顯微操作器可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行微量注射、細(xì)胞核移植、膜電位測(cè)定、胚胎切割和基因轉(zhuǎn)移等多種細(xì)胞生物學(xué)研究工作。 ? 顯微操作器的主體部分是 倒臵顯微鏡 加上 顯微操縱儀 組成，顯微操縱儀是能精密調(diào)節(jié)的微動(dòng)機(jī)械裝臵， 可以在光鏡視野下控制微型解剖針、微電極以及毛細(xì)吸管等器械對(duì)細(xì)胞進(jìn)行顯微手術(shù)，先進(jìn)的顯微操作器還裝有閉路電視、電腦和示波器， 可以邊操作，邊監(jiān)視細(xì)胞內(nèi)的變化情況。我國(guó)著名學(xué)者童第周教授 1963年就應(yīng)用顯微操作器開(kāi)展細(xì)胞核移植 ,研究動(dòng)物細(xì)胞的核質(zhì)關(guān)系。而 1997年“多莉”克隆羊即是由顯微操作進(jìn)行 細(xì)胞核移植 的結(jié)果。 （三）細(xì)胞融合 cell fusion ?是有廣泛實(shí)用價(jià)值的 細(xì)胞工程技術(shù) 。即以融合因子誘導(dǎo)兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞融合成一體，形成新類型的雜種細(xì)胞。細(xì)胞雜交不但可以在不同種或者不同屬生物的細(xì)胞之間進(jìn)行，而且還可以在親緣差距極大的細(xì)胞之間進(jìn)行，例如人的成纖維細(xì)胞與小鼠腫瘤細(xì)胞雜交，胡蘿卜的原生質(zhì)體與蟾蜍體細(xì)胞雜交等等。 ? 誘導(dǎo)細(xì)胞雜交的融合因子： ? （ 1） 滅活的病毒（例如仙臺(tái)病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒）； ? （ 2） 聚乙二醇 PEG、溶血卵磷脂； ? （ 3） 高 pH值、高鈣離子（植物細(xì)胞融合）；（ 4） 電脈沖細(xì)胞融合 ? 細(xì)胞融合技術(shù)被廣泛應(yīng)用于人類基因定位研究、細(xì)胞分裂周期調(diào)控研究及腫瘤免疫學(xué)等研究，例如“單克隆抗體”就是應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)與免疫學(xué)技術(shù)巧妙結(jié)合的科技產(chǎn)物。 ? （四） 細(xì)胞拆合 ? 應(yīng)用某些物理方法（例如顯微操作核移植和去核）或化學(xué)方法（例如以 細(xì)胞松弛素 B 處理后離心去核），把細(xì)胞拆開(kāi)成為兩部分 —— 核體（ karyoplast）和 胞質(zhì)體 （ cytoplast）， 再把來(lái)自不同種類細(xì)胞的這兩部分融合組成“重組細(xì)胞”?？蛇m用于基礎(chǔ)理論研究和應(yīng)用基礎(chǔ)研究。
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