化學(xué)檢測(cè)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-06 12:13本頁(yè)面
【正文】 酸）茚三酮反應(yīng)生成黃色化合物 ? 取 1mL樣品溶液（含氨基酸 ～ 50ug)加 1mL緩沖液（ ～ ），再加 1mL茚三酮顯色液， 100℃ 水浴 15min，自來(lái)水冷卻后，加入3mL60％乙醇溶液，測(cè)定 OD570，脯氨酸或羥脯氨酸測(cè) OD440 2 甲醛滴定法測(cè)定氨基酸 ? 氨基酸是兩性電解質(zhì)，不能用一般酸堿指示劑通過(guò)氫氧化鈉來(lái)測(cè)定。 ? 加進(jìn)甲醛生成羥甲基衍生物，可以用堿滴定。 ? 注意：需用過(guò)量中性甲醛。 三 核酸的化學(xué)檢測(cè) ? 根據(jù)核酸所含的磷及戊糖的化學(xué)性質(zhì)，可用定磷法、二苯胺法和地衣酚法等進(jìn)行檢測(cè)。 ? 1 定磷法測(cè)定核酸含量 ? （ 1）核酸的消化 ? （ 2）磷的測(cè)定 定磷試劑， 45 ℃ 水浴 25min，冷卻至室溫測(cè) OD650 無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液作標(biāo)準(zhǔn)曲線 ? （ 3）核酸含量的計(jì)算 一般 DNA含磷 ％ ,RNA含磷 ％， RNA量＝（總磷量－無(wú)機(jī)磷量） DNA量＝ （總磷量－無(wú)機(jī)磷量） 2 二苯胺法測(cè)定 DNA含量 ? DNA中的 2脫氧核糖在酸性環(huán)境中與二苯胺試劑一起加熱產(chǎn)生藍(lán)色反應(yīng)，在 595nm處有最大吸收峰。在 40～ 400μ g范圍內(nèi)， OD595與DNA濃度成正比。少量乙醛可提高反應(yīng)靈敏度。 ? （ 1）二苯胺試劑的配制 ? （ 2）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 ? （ 3）樣品 DNA含量測(cè)定 3 地衣酚法測(cè)定 RNA含量 ? 核糖核酸在濃鹽酸和三氯化鐵的存在下，與 3， 5－二羥甲苯（地衣酚）反應(yīng)，生成綠色物質(zhì)。一定濃度范圍內(nèi)， OD670與 RNA濃度成正比。所有戊糖均可進(jìn)行此反應(yīng)，注意干擾（如 DNA）。 ? 操作： 地衣酚試劑配制；標(biāo)準(zhǔn)曲線制作；樣品RNA測(cè)定 思考題 ? 1 如何區(qū)別還原糖與非還原糖？舉出常見(jiàn)的還原糖與非還原糖。 ? 2 有哪些定糖方法？熟悉各種方法的原理，所用試劑和操作要點(diǎn)。 ? 3 如何測(cè)定薯類淀粉含量？ ? 4 蛋白質(zhì)含量測(cè)定有哪些方法？熟悉各種方法的原理，所用試劑和操作要點(diǎn)。 ? 5 如何用滴定法測(cè)定氨基酸含量？ ? 7如何用定磷法測(cè)定 DNA或 RNA含量？ ? 8 二苯胺測(cè)定 DNA和地衣酚測(cè)定 RNA原理？ ? 9 三瓶未知液分別為蛋白質(zhì)、糖和 RNA，如何鑒定？
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