細(xì)胞破碎分離ppt課件-資料下載頁
2025-05-04 12:01本頁面
【正文】 部分 低（核酸少） 時間長，效率低 不需專用設(shè)備 差（專一性強） 成本高 實驗室， 部分工業(yè) 45 選擇破碎方法的依據(jù)： ?細(xì)胞處理量； ?細(xì)胞壁強度和結(jié)構(gòu) (高聚物交聯(lián)程度、種類和壁厚度 )； ?目標(biāo)產(chǎn)物對破碎條件的敏感性； ?破碎程度； ?目標(biāo)產(chǎn)物的選擇性釋放 46 破碎率的測定 細(xì)胞破碎后 ， 大量帶電荷的內(nèi)含物被釋放到水相 ，使導(dǎo)電率上升 。 1)直接測定法 2)目的產(chǎn)物測定法 3)導(dǎo)電率測定法 采用染色法把破碎的細(xì)胞與未破碎的細(xì)胞區(qū)別開來。 如：采用革蘭氏染色法染色酵母破碎液，完整的細(xì)胞呈紫色，而受損害的細(xì)胞呈亮紅色。 將破碎后的細(xì)胞懸浮液離心，測定上清液中目的產(chǎn)物含量或活性，并與 100%破碎率的標(biāo)準(zhǔn)值比較，計算其破碎率。 47 用巴氏染色液（中性紅）染色 48 破碎技術(shù)的研究方向 多種破碎方法相結(jié)合 化學(xué)法、酶法、機械法相結(jié)合。 酶法與高壓勻漿、超聲波震蕩、滲透壓法結(jié)合 如用溶解酶預(yù)處理面包酵母，然后高壓勻漿， 95MPa壓力下勻漿 4次，總破碎率接近 100%。而單獨采用高壓勻漿法，同樣條件下破碎率只有 32%。 49 與上游過程相結(jié)合 ?在發(fā)酵培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基、生長期、操作參數(shù)（如 pH、溫度、通氣量、攪拌轉(zhuǎn)速、稀釋率等）等因素都對細(xì)胞壁膜的結(jié)構(gòu)與組成有一定的影響。 ?在生長后期，加入某些能抑制或阻止細(xì)胞壁物質(zhì)合成的抑制劑 (如青霉素 )，繼續(xù)培養(yǎng)一段時間后，新分裂的細(xì)胞其細(xì)胞壁有缺陷，利于破碎； ?用基因工程的方法對菌種進行改造，如在細(xì)胞內(nèi)引進噬菌體基因，培養(yǎng)結(jié)束后，控制一定條件（如溫度等），激活噬菌體基因，使細(xì)胞自內(nèi)向外溶解，釋放出內(nèi)含物。 50 討論題：青霉素?；讣?xì)胞破碎的研究 一 . 化學(xué)法 20%(W/V)大腸桿菌懸浮液 + 丁酯 37℃ 攪拌 高速離心 測上清液酶活。 R% 3h 2. 丁酯用量 條件： 37 ℃ ，攪拌 3小時 適宜的 12% ， 釋放率 R=55% 12% 55% R 12% 活 51 二 . 化學(xué)法 — 凍融法結(jié)合 加 (12%,37℃ 攪拌 3h） 菌懸液 凍融 (凍結(jié) 14h 融化 ) 釋放率 — 70%；比活 — u/mg 三 . 化學(xué) — 超聲波振蕩法結(jié)合 先丁酯處理，再超聲波（ 90秒）， 釋放率 72% 小型設(shè)備，不能工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。 四 . 高壓勻漿法 20%(W/V)菌懸液， Δ P=50MPa。 釋放率 R=%， 原因 :細(xì)胞破碎后 ,仍有較多酶吸附在細(xì)胞碎片上。 五 . 高壓勻漿 — 化學(xué)法結(jié)合 先高壓勻漿，再加 10%丁酯， 37℃ 攪拌 3h，高速離心 (3萬 rpm)，釋放率 ： R=60% 六 . 研磨 直徑 。 釋放率 ： R=95%
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