20xx年醫(yī)學專題—第二章固液分離和細胞破碎講述案例-資料下載頁
2024-11-16 00:46本頁面
【正文】 當的溫度下，利用自身的蛋白酶將細胞破壞，使細胞內含物釋放出來。 自體融解時需要時間，需加少量甲苯、氯仿等。應防止細菌污染。 自體融解過程中pH 顯著變化，隨時要調節(jié)pH。 自溶溫度選在0～4℃，因自溶時間較長，不易控制，所以制備活性蛋白質時較少用。,自溶法,第四十八頁，共六十頁。,能溶解菌的酶分布很廣。尤其卵白中含量高，而多易結晶化。1g 菌體加1～10mg 溶菌酶， pH6.2～7.0 1h 內完全溶菌。 除溶菌酶外，蝸牛(wōni)酶及纖維素酶也常被選為破壞細菌及植物細胞用。,酶 法,溶菌酶對革蘭氏陽性(y225。ngx236。ng)細菌的破碎效果最好 蛋白酶和葡萄糖酶對酵母菌的破碎效果好,第四十九頁，共六十頁。,一、細胞壁的組成和結構(ji233。g242。u) 細菌類,結構(ji233。g242。u)—多層三維網狀結構,第五十頁，共六十頁。,革蘭氏陽性(y225。ngx236。ng)和陰性細菌肽聚糖結構圖,G+,G,第五十一頁，共六十頁。,霉菌類 組成(zǔ ch233。nɡ)—幾丁質（N乙酰葡聚糖胺的聚合物）、葡聚糖、蛋白質、脂類等 結構—四層三維網狀結構,酵母菌類 組成—甘露(gānl249。)聚醇、葡聚糖、蛋白質、脂類等 結構—三層三維網狀結構,第五十二頁，共六十頁。,第五十三頁，共六十頁。,3.4 物理(w249。lǐ)法和化學法的比較,物理(w249。lǐ)破碎法缺點： A、高能、高溫、高噪音、高剪切力(四高)，易使產品變性失活； B、非專一性，胞內產物均釋放，分離純化困難； C、細胞碎片大小不一，難分離。 化學破碎法缺點： A、費用高； B、引起新的污染，尤其是其他化學方法； C、一般只有有限的破碎，常需與其他物理法連用。,第五十四頁，共六十頁。,3.5 破碎方法(fāngfǎ)的選擇,選擇的一般原則 A、提取產物在細胞質內，用機械法破碎 B、提取產物在細胞膜附近，用化學法 C、提取產物與細胞膜和細胞壁結合，可采用化學法和機械法結合的方法(fāngfǎ) 破碎技術雜交研究應注意的問題 A、雜交技術可產生很大優(yōu)勢。 B、破碎技術對下游分離技術的影響。破碎顆粒清除，產物的分離純化 C、在發(fā)酵階段，考慮到發(fā)酵過程和環(huán)境對破碎難易程度的影響 D、菌種的培育，胞內產物 ? 胞外產物,第五十五頁，共六十頁。,3.6 細胞器的分離(fēnl237。),細胞器包括細胞核、線粒體、核糖體、內質網，植物細胞還有葉綠體。 如果要分離制備分布在這些細胞器中的生物大分子，為了防止其他細胞組分中的物質對制備物的干擾或污染，還需先將細胞器分離出來，然后在某一細胞器中分離某一物質。 細胞器的分離一般采用(cǎiy242。ng)差速離心法，即將破碎后的細胞在適當的介質中進行離心，常用的介質有蔗糖、甘露醇、檸檬酸、聚乙二醇等。,第五十六頁，共六十頁。,作 業(yè),1. 名詞解釋 凝聚；絮凝；破碎率；離心分離因數。 2. 簡述發(fā)酵液預處理(chǔlǐ)的目的和處理(chǔlǐ)方法。 3. 細胞破碎的方法有哪些？,第五十七頁，共六十頁。,人有了知識，就會具備各種分析能力， 明辨是非的能力。 所以我們要勤懇讀書，廣泛閱讀， 古人說“書中自有黃金屋。 ”通過閱讀科技(kēj236。)書籍，我們能豐富知識， 培養(yǎng)邏輯思維能力； 通過閱讀文學作品，我們能提高文學鑒賞水平， 培養(yǎng)文學情趣； 通過閱讀報刊，我們能增長見識，擴大自己的知識面。 有許多書籍還能培養(yǎng)我們的道德情操， 給我們巨大的精神力量， 鼓舞我們前進。,第五十八頁，共六十頁。,第五十九頁，共六十頁。,內容(n232。ir243。ng)總結,第二章 固液分離和細胞破碎。pH值直接影響發(fā)酵液中某些物質的電離度和電荷性質，適當調節(jié)pH值可改善其過濾特性。1）有機高分子聚合物，如聚丙烯酰胺類衍生物、聚苯乙烯類衍生物。當懸浮液通過濾布時，固體顆粒被濾布阻攔而逐漸形成濾餅（濾渣）。盡量使工作時間和輔助時間接近。影響破碎率的操作參數較多，過程優(yōu)化設計較復雜。除溶菌酶外，蝸牛酶及纖維素酶也常被選為破壞細菌及植物(zh237。w249。)細胞用。B、破碎技術對下游分離技術的影響,第六十頁，共六
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