細胞的分離和破碎ppt課件-資料下載頁
2025-01-15 07:03本頁面
【正文】 2）化學(xué)法 用化學(xué)試劑改變細胞壁或膜的通透性，使內(nèi)含物有選擇性地滲透出來。 ① 酸堿處理 ② 化學(xué)滲透法 a. 表面活性劑 主要是破壞內(nèi)膜的磷脂雙分子層，釋放胞內(nèi)物質(zhì) b. EDTA螯合劑 處理革蘭氏陰性菌，對細胞外層膜有破壞作用 c. 有機溶劑 甲苯溶解細胞壁中的類脂 d. 變性劑 鹽酸胍 3） 物理法 ① 滲透壓沖擊法 特點：適用于易于破碎的細胞，如動物細胞和革蘭氏陰性菌；對革蘭氏陽性菌不適用。 ② 凍融法 特點：此法主要適用于大腸桿菌和細胞壁較薄的細胞，特別適用于位于胞間質(zhì)的酶的釋放。 3. 機械破碎法與非機械法的比較 比較項目 機械法 非機械法 破碎機理 切碎細胞 溶解局部壁膜 碎片大小 細小 較大 內(nèi)含物釋放 全部 部分 黏度 高（核酸多） 低（核酸少） 時間，效率 時間短，效率高 時間長，效率低 設(shè)備 需專用設(shè)備 不需專用設(shè)備 通用性 強 差 經(jīng)濟 成本低 成本高 應(yīng)用范圍 實驗室，工業(yè) 實驗室 三、破碎率的測定 1. 直接測定法 破碎前用顯微鏡或電子微粒計數(shù)器直接計數(shù)完整細胞的量，破碎后用染色法區(qū)分。例如革蘭氏染色法未受損害的酵母細胞呈紫色，而受損害的呈亮紅色。 2. 測定釋放的蛋白質(zhì)含量或酶的活力 與 100%的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)比較 3. 測定導(dǎo)電率 導(dǎo)電率隨細胞破碎率的增加而呈線性增加 。 四、細胞破碎研究方向 1. 多種破碎方法相結(jié)合 2. 與上游過程相結(jié)合 上游培養(yǎng)（培養(yǎng)基組成、 pH、溫度）；用基因工程的方法對菌種改造 3. 與下游過程相結(jié)合 在破碎細胞的同時，要考慮碎片對后分離的影響。如碎片太小，固液分 離困難，未除凈的碎片將造成層析柱和超濾膜的堵塞。 思考題 : 1 如何預(yù)處理發(fā)酵液 ? 2 凝聚和絮凝的區(qū)別 3 濾餅的重量比阻 rB 4 了解常用固 液分離設(shè)備及其特點 5 常用的細胞破碎方法 , 了解機械破碎法所用設(shè)備 6 P33 5
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