fcm原理研究生ppt課件-資料下載頁
2025-05-03 18:38本頁面
【正文】 Propidium Iodide 藍(lán) 綠 紅 Acridine Orange 藍(lán) 綠 Ethidium Bromide 藍(lán) 綠 紅 Hoechst33258/33342 紫外 藍(lán) DAPI 紫外 藍(lán) DIPI 紫外 藍(lán) Mithramycin 紫 藍(lán) 綠 Chromomycin A3 紫 藍(lán) 綠 Acriflavine 藍(lán) 綠 黃分類 染料 激發(fā)譜 發(fā)射譜細(xì)胞DNA染料 細(xì)胞 RNA Acridine Orange 藍(lán) 綠 染料 Pyronine Y 藍(lán) 綠 紅 FITC 紫 藍(lán) 綠 TRITC 藍(lán) 綠 紅 細(xì)胞蛋 Sulforhodamine 101 藍(lán)或綠 紅 白質(zhì) LN 紫外 藍(lán) 染料 DANS 紫外 綠 SITS 紫外 藍(lán) 分類 染料 激發(fā)譜 發(fā)射譜雙或多參數(shù)熒光抗體的組合標(biāo)記FITC+PE 488 525 、 575 綠色、橙色FITC+T red 488 525 綠色 568 615 紅色FITC+PeCy5 488 52 675 綠色、 紅色FITC+ ECD 488 52 625 綠色、橙紅色F+P +PeCy5 488 52 57 675 綠、橙、 紅色F+ ECD +PeCy5 488 52 57 675 綠、橙紅色、 紅色F+P+APC 488 525 、 575 綠色、橙色 633 670 紅色 熒光染料 激發(fā)波長(zhǎng)（ nm) 發(fā)射波長(zhǎng)（ nm) 顏色1. 溴化乙啶 (EB)和碘化丙啶 (PI)熒光試劑及其染色程序 : 這兩種熒光染料的理化特性類似，是平面環(huán)狀結(jié)構(gòu)的分子，分子量 300左右。同屬插入性熒光染料， 可選擇性地 定量插入核酸雙螺旋結(jié)構(gòu)的鹼基對(duì) 之間。 沒有 DNA和 RNA選擇性 不能進(jìn)入活細(xì)胞膜，可以鑒別死活細(xì)胞。 （五）細(xì)胞 DNA熒光染色 熒光探針為異硫氰酸熒光素 ( Fluorescein isothiocyanate， FITC )。 是一種酸性熒光 染料，以共價(jià)鍵結(jié)合方式與蛋白質(zhì)帶有正電荷的位點(diǎn)結(jié)合。它的激發(fā)波長(zhǎng)峰值為 488nm左右，發(fā)出亮綠色熒光。受 pH值的影響較大；受 自發(fā)熒光 的干擾，必需做對(duì)照來排除本底的干擾。 （七）細(xì)胞蛋白質(zhì)熒光染色１ .免疫熒光染色 (1)基本原理 抗原 — 抗體特異性結(jié)合 直接免疫與間接免疫熒光染色法 (2)樣品制備方法與步驟 DNA雙標(biāo)記染色 pH（八）其它熒光染色方法 2. BrdUrd和 DNA雙標(biāo)記染色 溴脫氧尿嘧啶核苷 ( Bromodeoxyuridine， BrdUrd )是胸苷的一種類似物。 它可以替代胸腺嘧啶摻入到細(xì)胞新合成的 DNA分子中，成為 S期細(xì)胞的一種標(biāo)記物。流式細(xì)胞術(shù)采用抗 BrdUrd單克隆抗體免疫熒光和 PI雙參數(shù)檢測(cè)細(xì)胞，不僅可檢測(cè)一個(gè)細(xì)胞群體的動(dòng)力學(xué)參數(shù)和 DNA含量，同時(shí)可以了解不同細(xì)胞的 DNA合成能力高低 。 流式細(xì)胞術(shù)操作流程 ：培養(yǎng)細(xì)胞新鮮組織石蠟包埋單細(xì)胞懸液制備 熒光抗體標(biāo)記 上機(jī)檢測(cè)表型測(cè)定 細(xì)胞分選繼續(xù)培養(yǎng)FISHPCR統(tǒng)計(jì)學(xué)分析重點(diǎn)題要酶消化法應(yīng)注意哪些條件 ?常用的單分散細(xì)胞的方法有哪些 ?熒光細(xì)胞化學(xué)過程的特異性熒光細(xì)胞化學(xué)的化學(xué)定量關(guān)系收獲率和純度謝謝
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