腫瘤的分子診斷ppt課件-資料下載頁
2025-05-03 03:35本頁面
【正文】 。 端粒酶的表達(dá)水平有可能為腫瘤的發(fā)生發(fā)展、診斷、預(yù)后等提供指標(biāo)，并有可能以抑制端粒酶表達(dá)為手段作為腫瘤治療的新方法。 二、端粒酶活性的檢測(cè) TRAP法 （ telomeric repeat amplification protocal， TRAP） ELISA法 TRAP法 （ telomeric repeat amplification protocal， TRAP） 首先從腫瘤細(xì)胞或組織中制備端粒酶提取液，然后進(jìn)行 TRAP反應(yīng)，即在含有一條引物、 dNTP和 TRAP緩沖液的反應(yīng)體系中，加入端粒酶提取液，使端粒以其 RNA組分為模板催化合成端粒DNA重復(fù)序列，并以此為模板，加入另一條引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增體系中加入標(biāo)記的 dATP（同位素、熒光素或地高辛等標(biāo)記物），擴(kuò)增產(chǎn)物可通過凝膠電泳、放射自顯形（同位素為標(biāo)記物）后分析，以熒光素為標(biāo)記物者可通過掃描儀分析熒光曲線。應(yīng)用地高辛標(biāo)記試劑盒，還可進(jìn)行半定量分析。 ELISA法 利用端粒酶在生物素標(biāo)記的引物上加入多個(gè) 6核苷酸端粒重復(fù)序列，反應(yīng)產(chǎn)物用生物素標(biāo)記的引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，再與鏈霉菌抗生物素蛋白包被的微量滴定板結(jié)合，與地高辛標(biāo)記的探針雜交，產(chǎn)生的有色底物用酶標(biāo)儀測(cè)量結(jié)果。 該法省時(shí)簡便。 結(jié) 語 分子診斷是具有劃時(shí)代意義的檢測(cè)手段，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中正發(fā)揮著巨大的作用，在腫瘤基礎(chǔ)和臨床研究中也顯示了極大的優(yōu)越性和應(yīng)用前景。 分子診斷的任務(wù)不完全在于去尋找和發(fā)現(xiàn)新的理論、機(jī)制，更應(yīng)致力于如何將實(shí)驗(yàn)研究成果轉(zhuǎn)化到臨床應(yīng)用階段。 需解決的問題如： 建立費(fèi)用低廉、結(jié)果可靠、操作方便的分子診斷技術(shù)； 建立標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)操作程序和標(biāo)準(zhǔn)化的分子診斷實(shí)驗(yàn)室，實(shí)現(xiàn)分子診斷標(biāo)準(zhǔn)化； 除了要在診斷技術(shù)方面逐步實(shí)行標(biāo)準(zhǔn)化外，對(duì)腫瘤診斷指標(biāo)也要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。 隨著人類基因組計(jì)劃和后基因組（蛋白質(zhì)組）計(jì)劃的實(shí)施，分子診斷也將得到進(jìn)一步完善和成熟，使人類最認(rèn)清腫瘤的本質(zhì)并攻克它。 相關(guān)技術(shù)參考文獻(xiàn) 原位雜交 Herrington CS. Mol Pathol, 1998。 51: 8 Levy ER and Herrington CS. Oxford: Oxford University Press Inc, 1995: p25 熒光原位雜交 Water JJ. et al. Mol Pathol, 1998。 51: 62 Habeebu SSM, et al. Mol Biol Med, 1990。 7: 423 Southern blot Northern blot 許良中 ， 實(shí)用腫瘤病理方法學(xué) 。 上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社 ， 1997； p129 原位 PCR Anderson V. Cell Vision, 1994。 1: 60 PCRSSCP法 Sheffield VC, et al. Genomics, 1993。 16: 325 雜合雙鏈分析法 White MB, et al Genomics, 1992。 12: 301 突變體富集 PCR Boumforth KRV, et al. Mol Pathol, 1999。 52: 8 變性梯度凝膠電泳 Buetow KH, et al. Pioc Natl Acad Sci USA,1992。 89: 9622 化學(xué)切割錯(cuò)配法 Verpy E. Pioc Natl Acad Sci USA,1994。 91: 1873 等位基因特異性寡核苷酸分析法 Saiki RK, et al. Pioc Natl Acad Sci USA,1989。 86: 6230 DNA芯片技術(shù) Yershov G, et al. Pioc Natl Acad Sci USA,1996。93:4913 Hacia JG, et al. Genome Res,1998。 8: 1245 DNA序列分析 顏?zhàn)臃f 等 ， 精編分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南 。 北京：科學(xué)出版社 ， 1998； p185 限制性酶切片段長度多態(tài)性分析 Kressner U, et al. Br J Cancer, 1998。 77: 1848 PCRRFLP Fang DC, et al. J Clin Pathol 1998。 51: 593 微衛(wèi)星不穩(wěn)定性分析 Arzimanoglou II, et al. Cancer, 1998。 82: 1808 TRAP法 Ikeda M, et al. Cancer Res, 1998。 58: 594
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