生物分析中的探針ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-01 13:29本頁(yè)面
【正文】 ITEDTA)、 N[對(duì)異硫氰酸 苯基 ]二乙三胺四乙酸(ITDTTA,1)、二乙三胺五乙酸酐 (CDTPAA,2)等 ,它們除含有能絡(luò)合 Eu(Ⅲ )、 Tb(Ⅲ )等稀土離子的氨羧基團(tuán)外 ,還含有與蛋白質(zhì)、肽的氨基反應(yīng)的異硫氰酸或酸酐活性基團(tuán) ,它們能將稀土離子牢固地結(jié)合在蛋白質(zhì)的氨其上 ,在熒光增強(qiáng)液如 β二酮溶液作用下 ,檢測(cè)蛋白質(zhì)。 b) 芳香羧酸螯合劑 這類螯合劑主要是水楊酸、苯甲酸及其衍生物： 2,6吡啶二羧酸、 2,2’聯(lián)吡啶、 2,2’,2”三吡啶和鄰菲羅啉類的羧酸衍生物。它們與 Eu(Ⅲ )、Tb(Ⅲ )等稀土離子的絡(luò)離子可作分熒光探針和 時(shí)間分辨熒光免疫分析的標(biāo)記試劑 。其中 4,7雙 (氯磺酸基苯 )1,10鄰菲羅啉 2,9二羧酸 (BCPTA,3)、4[2(4異硫氰酸苯基 )乙基 ]2,6雙 [N,N雙 (羧甲基 )乙氨基 ]吡啶等衍生物都是雙功能基團(tuán)的螯合劑。芳香羧酸稀土離子絡(luò)合物有很強(qiáng)的熒光 ,不需加熒光增強(qiáng)液或協(xié)同試劑 ,可直接測(cè)量熒光強(qiáng)度。 c) β二酮類螯合劑 如：乙酰丙酮等。 d) 袋狀、籠狀或穴狀及杯芳烴大環(huán)配位體 穴醚 []、聯(lián)吡啶籠形化合物、含鄰菲羅啉的冠烯類大環(huán)化合物、杯 [4]芳烴等、袋狀化合物二胺三聯(lián)吡啶 (TBD)可以作為核酸探針。 Eu(Ⅲ )TBD絡(luò)合物很穩(wěn)定。因?yàn)?TBD分子的穴孔與 Eu(Ⅲ )的半徑大小成最佳匹配。體系中的其它離子半徑不匹配 ,不干擾。 (2) 稀土絡(luò)合物離子熒光探針的應(yīng)用 博萊霉素是一種抗生素類抗癌藥。其抗癌機(jī)理是：博萊霉素的連二噻唑基團(tuán)插入 DNA的堿基對(duì)之間以及糖肽基團(tuán)與金屬離子絡(luò)合物的結(jié)合部位 ,從而使 DNA鏈發(fā)生斷裂。應(yīng)用稀土絡(luò)離子熒光探針 [Tb(HEDTA)],采用迅速擴(kuò)散能量轉(zhuǎn)移方法研究了博萊霉素 A2與鈷 (Ⅲ )形成的 橙色 和 綠色 的鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物 ,發(fā)現(xiàn)它們與 DNA的親和力、在癌腫瘤中的聚集及促進(jìn)光誘導(dǎo)切刻 DNA等方面都存在明顯的差異。 鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物與 DNA的親和力的研究：首先用溴化乙錠為接受體 ,能量轉(zhuǎn)移速率常數(shù)為 。表明溴化乙錠嵌入 DNA后的外露部分很小 ,熒光探針[Tb(HEDTA)]與它接觸受到空間位阻影響。 接受體改為 橙色鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物 時(shí) ,能量轉(zhuǎn)移速率常數(shù)為 ,比溴化乙錠的速率常數(shù)大得多。表明 橙色鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物 嵌入 DNA后 ,熒光探針 [Tb(HEDTA)]與絡(luò)合物中心接觸受到的 空間位阻影響不大 。相互間可以有較高程度地接觸。因而 ,橙色鈷(Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物 與 DNA接觸程度比溴化乙錠差。 接受體為 綠色鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物 時(shí) ,能量轉(zhuǎn)移速率常數(shù)為 。比 橙色鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物的速率常數(shù)小。表明 綠色鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物 嵌入 DNA后 ,熒光探針 [Tb(HEDTA)]與絡(luò)合物中心接觸受到空間位阻影響增大。即 綠色 鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物比 橙色 鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物更接近 DNA。綠色鈷 (Ⅲ )博萊霉素 A2絡(luò)合物對(duì) DNA有更強(qiáng)的促進(jìn)光誘導(dǎo)切刻能力。效果更好。
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