【正文】 數(shù)處于穩(wěn)定狀態(tài)，細(xì)菌群體活力變化較大。此期細(xì)菌死亡數(shù)與增殖數(shù)漸趨平衡。細(xì)菌形態(tài)、染色和生物活性可出現(xiàn)改變，并產(chǎn)生很多代謝產(chǎn)物如外毒素、內(nèi)毒素、抗生素等。細(xì)菌芽胞一般在該期形成。(4). 衰亡期：隨著穩(wěn)定期發(fā)展，細(xì)菌繁殖越來越慢，死亡菌數(shù)明顯增多，與培養(yǎng)時(shí)間成正比。此期細(xì)菌生理代謝活動趨于停滯，細(xì)菌形態(tài)呈現(xiàn)腫脹或畸形衰變，甚至自溶。2．細(xì)菌生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)及其主要作用：(1) 水：細(xì)菌代謝過程中所有的生化反應(yīng)、營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和滲透壓的維持等，均需有水才能進(jìn)行。(2) 碳源：各種無機(jī)或有機(jī)的含碳化合物都能被細(xì)菌吸收利用，作為合成菌體所必需的原料及細(xì)菌代謝能量的主要來源。(3) 氮源：主要用于合成菌體細(xì)胞蛋白質(zhì)和核酸。(4) 無機(jī)鹽：①構(gòu)成菌體成分；②調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外滲透壓；③促進(jìn)酶的活性；④某些元素與細(xì)菌的生長繁殖及致病作用密切相關(guān)。(5) 生長因子：某些細(xì)菌在其生長過程中還需要一些自身不能合成的生長因子。包括維生素、某些氨基酸、脂類、嘌呤、嘧啶等。3．細(xì)菌生長繁殖的條件有：(1) 充足的營養(yǎng)物質(zhì)：包括水、碳源、氮源、無機(jī)鹽類、生長因子等。(2) 適宜的酸堿度：～。(3) 合適的溫度：大多數(shù)致病菌所需的最適溫度為37℃。(4) 必要的氣體環(huán)境：所需的主要?dú)怏w為O2和CO2，根據(jù)細(xì)菌對O2的需要情況將其分為：①專性需氧菌，在有氧條件下才能生長繁殖；②專性厭氧菌，在無氧條件下才能生長繁殖；③兼性厭氧菌，有氧無氧均能生長繁殖；④微需氧菌，在低氧壓的條件下才能生長繁殖。少數(shù)致病菌如腦膜炎球菌、淋球菌等初次分離培養(yǎng)時(shí)，需提供5%～10%的CO2 。*4. 細(xì)菌的酶在新陳代謝過程中的作用：細(xì)菌的新陳代謝是在酶的催化下進(jìn)行的。不同的酶系統(tǒng)決定細(xì)菌的代謝類型、代謝產(chǎn)物及某些生理特性的差異。根據(jù)酶發(fā)揮作用的部位，細(xì)菌的酶可分為胞外酶及胞內(nèi)酶。(1) 胞外酶：是由細(xì)菌合成后分泌到細(xì)胞外的酶，主要是一些水解酶。環(huán)境中的營養(yǎng)物質(zhì)分子較大，必須由胞外酶水解為小分子物質(zhì)后才能被細(xì)菌吸收。有些胞外酶具有致病效應(yīng)， 如血漿凝固酶、透明質(zhì)酸酶等。(2) 胞內(nèi)酶：是存在于細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用的酶，包括一系列呼吸酶以及與蛋白質(zhì)、多糖等代謝有關(guān)的酶。另外，細(xì)菌的酶有些是細(xì)菌生長代謝中必需的，稱為固有酶；而有些則是一般情況下并不產(chǎn)生的酶，只有當(dāng)環(huán)境中有誘導(dǎo)物存在時(shí)才產(chǎn)生，這些酶不是細(xì)菌所必需的，稱為誘導(dǎo)酶。如金黃色葡萄球菌在青霉素存在時(shí)可誘導(dǎo)產(chǎn)生青霉素酶，可以導(dǎo)致對青霉素的耐藥性。5．細(xì)菌的合成代謝產(chǎn)物及其臨床意義有：細(xì)菌通過新陳代謝不斷合成菌體成分，如多糖、蛋白質(zhì)、脂肪、核酸、細(xì)胞壁及各種輔酶等。此外，細(xì)菌還能合成很多在醫(yī)學(xué)上具有重要意義的代謝產(chǎn)物。(1) 熱原質(zhì)：熱原質(zhì)即菌體中的脂多糖，大多由革蘭陰性菌產(chǎn)生，注入人體或動物體內(nèi)引起發(fā)熱反應(yīng)，故名熱原質(zhì)。熱原質(zhì)耐高熱，高壓蒸氣滅菌亦不能破壞，除去熱原質(zhì)最好的方法是蒸餾。制備生物制品和注射用水必須使用無熱原質(zhì)水。(2) 內(nèi)毒素與酶：細(xì)菌可產(chǎn)生內(nèi)、外毒素及侵襲性酶，與細(xì)菌的致病性密切相關(guān)。內(nèi)毒素即革蘭陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖，其毒性成分為類脂A，當(dāng)菌體死亡崩解后才釋放出來。外毒素是由革蘭陽性菌及少數(shù)革蘭陰性菌在生長代謝過程中釋放到菌體外的蛋白質(zhì)，具有抗原性強(qiáng)、毒性強(qiáng)、作用特異性強(qiáng)的突出特點(diǎn)。某些細(xì)菌可產(chǎn)生侵襲性酶，可損傷機(jī)體組織，促使細(xì)菌的侵襲、擴(kuò)散，是細(xì)菌重要的致病因素，如鏈球菌的透明質(zhì)酸酶等。(3) 色素：有些細(xì)菌能產(chǎn)生色素，對細(xì)菌的鑒別有一定意義。細(xì)菌色素有兩類：①水溶性色素②脂溶性色素。(4) 抗生素：有些微生物代謝過程中可產(chǎn)生一些能抑制或殺死某些其他微生物或癌細(xì)胞的物質(zhì)，稱抗生素?？股囟嘤煞啪€菌和真菌產(chǎn)生，細(xì)菌僅產(chǎn)生少數(shù)幾種。(5) 細(xì)菌素：某些細(xì)菌能產(chǎn)生一種僅作用于有近緣關(guān)系的細(xì)菌的具有抗菌作用的蛋白質(zhì)，稱細(xì)菌素。有些細(xì)菌素的產(chǎn)生受質(zhì)?？刂?，其抗菌譜較窄。*6. 細(xì)菌的培養(yǎng)方法及其條件： (1) 細(xì)菌培養(yǎng)可分為分離培養(yǎng)及純培養(yǎng)兩種方法。①細(xì)菌的分離培養(yǎng)，多用于從臨床標(biāo)本中(混雜細(xì)菌)分離出某一特定的細(xì)菌(致病菌)。一般利用固體培養(yǎng)基(如選擇培養(yǎng)基)通過劃線方法接種，使標(biāo)本中的細(xì)菌分散為單個(gè)生長的菌落而獲得純種細(xì)菌。②細(xì)菌純培養(yǎng)，多用于菌種傳代和細(xì)菌的擴(kuò)增。取一個(gè)菌落接種于適當(dāng)?shù)囊后w培養(yǎng)基或固體斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)后可獲得大量純種細(xì)菌。(2) 培養(yǎng)條件：①選用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基；②提供必需的氣體環(huán)境，一般需氧菌及兼性厭氧菌置空氣中培養(yǎng)即可。專性厭氧菌則必須在嚴(yán)格元氧條件中培養(yǎng)。③溫度一般為37℃；④培養(yǎng)時(shí)間多數(shù)為18～24h，但應(yīng)根據(jù)菌種及培養(yǎng)目的酌情處理。⑤為獲取大量細(xì)菌或其代謝產(chǎn)物，可采用連續(xù)培養(yǎng)法。培養(yǎng)過程中不斷通入適當(dāng)氣體、更換培養(yǎng)液并校正pH值以維持細(xì)菌較長的對數(shù)生長狀態(tài)。*7. 用于培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基，按其用途和營養(yǎng)組成可以分為：首先根據(jù)培養(yǎng)基的性質(zhì)及用途可分為以下幾類：(1) 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有大多數(shù)細(xì)菌生長所需要的基本營養(yǎng)成分。最常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為營養(yǎng)肉湯。(2) 增菌培養(yǎng)基：若了解某種細(xì)菌的特殊營養(yǎng)要求，可配制出適合這種細(xì)菌而不適合其他細(xì)菌生長的增菌培養(yǎng)基。(3) 鑒別培養(yǎng)基：以鑒別細(xì)菌為目的而配制的培養(yǎng)基稱鑒別培養(yǎng)基。利用不同細(xì)菌對糖、蛋白質(zhì)的分解能力及代謝產(chǎn)物的差別，在培養(yǎng)基中加入特定的底物成分和指示劑，觀察細(xì)菌生長時(shí)分解底物的情況，從而鑒別細(xì)菌。如伊紅一美藍(lán)培養(yǎng)基。(4) 選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，能抑制某類細(xì)菌生長，促使另一類細(xì)菌生長，從而將后者選擇出來，這種培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。如SS瓊脂培養(yǎng)基。(5) 厭氧培養(yǎng)基：厭氧菌的培養(yǎng)需在培養(yǎng)基中加入還原劑以降低培養(yǎng)基的氧化還原電勢，并以石蠟或凡士林封口，隔絕空氣，這種無氧環(huán)境的培養(yǎng)基為厭氧培養(yǎng)基，如庖肉培養(yǎng)基。其次培養(yǎng)基如按其物理性狀可以分為固體、半固體及液體。8．細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象有：(1) 固體培養(yǎng)基：細(xì)菌經(jīng)分離培養(yǎng)生成菌落，根據(jù)菌落特點(diǎn)，可分為三型：①光滑型菌落(S型菌落)，新分離的細(xì)菌大多為光滑型菌落，表面光滑、濕潤、邊緣整齊。②粗糙型菌落(R型菌落)菌落表面粗糙、干燥、有皺紋，有時(shí)呈顆粒狀，邊緣大多不整齊。③粘液型菌落(M型菌落)多見于有肥厚莢膜或粘液層的細(xì)菌，菌落表現(xiàn)粘稠、有光澤、似水珠祥。(2) 半固體培養(yǎng)基：多用來檢查細(xì)菌的動力和保存菌種。有鞭毛的細(xì)菌可由穿刺線向四周運(yùn)動播散，培養(yǎng)后穿刺線模糊不清，呈羽毛狀或云霧狀混濁生長；無鞭毛的細(xì)菌，不能運(yùn)動，僅沿穿刺線生長，穿刺線清晰，穿刺線以外的培養(yǎng)基仍透明澄清。(3) 液體培養(yǎng)基：細(xì)菌生長呈三種狀態(tài)。①混濁生長，菌液呈均勻混濁狀態(tài)，見于大多數(shù)細(xì)菌。②沉淀生長，細(xì)菌沉于管底形成沉淀，培養(yǎng)液上清較清。如鏈球菌。③菌膜生長，多為專性需氧菌，在培養(yǎng)液表面生長，形成菌膜。如霍亂弧菌。*9. 進(jìn)行細(xì)菌分類和鑒別的生化檢測主要依據(jù)有，各種細(xì)菌因其具備的酶不完全相同，故在分解代謝過程中的產(chǎn)物亦有差異。通過生化實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)菌的分解代謝產(chǎn)物可對細(xì)菌進(jìn)行鑒定和分類。實(shí)驗(yàn)室常用的生化試驗(yàn)有：(1) 碳源利用及糖代謝產(chǎn)物的檢測：①糖發(fā)酵試驗(yàn)；②VP試驗(yàn)；③甲基紅試驗(yàn)；④枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)。(2) 蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)物檢測：①吲哚（靛青質(zhì)）試驗(yàn)；②硫化氫試驗(yàn)；③尿素分解試驗(yàn)等。吲哚、甲基紅、VP、枸櫞酸鹽四種試驗(yàn)縮寫為IMViC試驗(yàn)，大腸桿菌的IMViC結(jié)果為＋＋――，而產(chǎn)氣桿菌的IMViC結(jié)果為――＋＋。第三章消毒滅菌復(fù)習(xí)要點(diǎn)：掌握消毒、滅菌、無菌和防腐的概念。熟悉物理滅菌法和化學(xué)消毒劑的種類及用途。 了解消毒和滅菌的機(jī)制。一、基本概念 消毒：殺死物體上病原微生物的方法。一般不能全部殺死非病原菌和芽胞。 滅菌：殺死物體上所有微生物的方法，包括病原菌、非病原菌和芽胞。 防腐：防止或抑制微生物生長的方法。細(xì)菌一般不死亡。 無菌：指無活菌的狀態(tài)。是滅菌后的結(jié)果。二、物理滅菌法 物理滅菌法的種類包括熱力滅菌法、紫外線殺菌法、濾過除菌法、超聲殺菌法等多種。 1．熱力滅菌法：包括干熱滅菌法和濕熱滅菌法兩類。 (1) 干熱滅菌法有：①焚燒法，常用于醫(yī)院丟棄的廢物或尸體的焚燒；②燒灼法是直接用火焰燒灼，常用于接種環(huán)、試管口等的滅菌；③干烤法，是使用電烤箱滅菌，160℃經(jīng)2h。常用于耐干烤的玻璃器皿等的滅菌。(2) 濕熱滅菌法包括：①巴氏消毒法，加熱溫度為62℃30min，72℃30s，常用于酒類、牛奶的消毒；②煮沸法，100℃5min可殺死細(xì)菌繁殖體，殺死芽胞需煮沸1～2h，常用于消毒食具、刀剪等；③流動蒸氣滅菌法(常壓蒸氣消毒法)，100℃15～30min可殺死細(xì)菌繁殖體；④間歇蒸氣滅菌法，可用于不耐熱培養(yǎng)基的滅菌。方法是100℃15～30min→37℃過夜3次或75～80℃30～6Omin→37℃過夜3次；⑤高壓蒸氣滅菌法，是一種最常用、最有效的滅菌方法，是在密閉的蒸氣容器中進(jìn)行，℃，維持時(shí)間15～3Omin。適用于耐高溫又不怕潮濕物品的滅菌，如注射液制劑、手術(shù)物品等。2. 紫外線殺菌法：紫外線殺菌波長范圍為 200～30Onm，其中265～266nm波長作用最強(qiáng)。紫外線對生物細(xì)胞的DNA具有直接破壞作用，可使DNA斷裂或胸腺嘧啶聚合為雙聚體而干擾DNA的生物合成， 導(dǎo)致細(xì)菌死亡或變異。但紫外線的穿透力極差，只適用于物品表面或空氣的消毒。如手術(shù)室、傳染病房、實(shí)驗(yàn)室等的消毒。殺菌波長的紫外線對人體皮膚、眼有直接損害，產(chǎn)生的臭氧對呼吸道有損害。照射時(shí)，人員應(yīng)離開現(xiàn)場。3. 濾過除菌法：濾過除菌法是用濾菌器將液體或空氣中的細(xì)菌除去的一種物理方法?！⒉Ａ?、纖維素膜等過濾生物溶液，以除菌又不破壞溶液中蛋白質(zhì)的生物活性。多用于細(xì)胞培養(yǎng)液、生物制品、細(xì)胞提取物的除菌以及手術(shù)室等的空氣除菌。但病毒、支原體、細(xì)菌L型等微生物仍可通過濾菌器。三、化學(xué)消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法是用化學(xué)藥物進(jìn)行消毒滅菌的方法。消毒劑的殺菌機(jī)制主要有：①使菌體蛋白變性或凝固，如酚類(高濃度)、醇類、重金屬鹽類(高濃度)、酸堿類、醛類；②干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)和代謝，如某些氧化劑、重金屬鹽類(低濃度)；③損傷細(xì)菌的細(xì)胞膜，如酚類(低濃度)、表面活性劑、脂溶劑等。一、單項(xiàng)選擇題1．滅菌是指：A. 殺滅物體上的所有微生物包括細(xì)菌的芽孢B. 殺死物體上的病原微生物C. 殺死細(xì)菌芽胞 D. 使物體上無活菌存在E. 抑制微生物生長繁殖的方法*2. 對血清培養(yǎng)基的滅菌， 應(yīng)選用：A. 煮沸法 B. 巴氏消毒法C. 間歇滅菌法 D. 流通蒸氣滅菌法E. 高壓蒸氣滅菌法3．殺滅芽胞最常用和最有效的方法是：A. 紫外線照射 B. 煮沸5min C. 巴氏消毒法D. 流通蒸氣滅菌法 E. 高壓蒸氣滅菌法4．下述不可能殺滅細(xì)菌芽胞的方法是：A. 煮沸法 B. 巴氏消毒法C. 間歇滅菌法 D. 干熱滅菌法E. 高壓蒸氣滅菌法5．常用的腆液濃度為：% % %% %6．乙醇消毒劑常用的濃度是： % % %% %7．屬于氧化劑類的消毒劑是：A. 來蘇 B. 戊二醛 C. 龍膽紫D. 高錳酸鉀 E. 新潔爾滅二、多項(xiàng)選擇題1．影響消毒劑作用的因素有：A. 溫度 B. 酸堿度 C. 有機(jī)物D. 消毒劑的濃度 E. 消毒劑作用的時(shí)間2．殺滅芽胞，可以選擇：A. 煮沸2h B. 間歇滅菌法C. 巴氏消毒法 D. 高壓蒸氣滅菌法E. 流通蒸氣滅菌法 15～30min3．化學(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制是：A. 破壞核酸結(jié)構(gòu) B. 損傷細(xì)菌細(xì)胞膜C. 使菌體蛋白質(zhì)凝固 D. 使菌體蛋白質(zhì)變性E. 使細(xì)菌的酶失去活性4．關(guān)于紫外線，以下敘述正確的是： A. 其殺菌作用與波長有關(guān)B. 可損壞細(xì)菌的DNA構(gòu)型C. 265～266nm 殺菌作用最強(qiáng)D. 其穿透力弱，故對人體無損害E. 紫外線適用于空氣或物體表面的消毒三、填空題1．下列消毒滅菌法中，常用于基礎(chǔ)培養(yǎng)基滅菌的是 ，常用于手術(shù)敷料的滅菌的是 ，常用于牛奶的消毒的是 ，常用于血清的除菌的是 。2．常用的濕熱消毒滅菌法有 、 、 、 和 。3．巴氏消毒法常用于 和 的消毒。4．濕熱滅菌法的蒸氣壓力為 ，溫度達(dá) ，維持時(shí)間是 。5．不耐高熱的營養(yǎng)培養(yǎng)基可用 法滅菌。6．干熱滅菌法主要有 、 和 。7．紫外線殺菌力最強(qiáng)的波長為 ，常用于無菌室的 消毒。8．預(yù)防新生兒淋球菌感染常用的滴眼劑是 。9．常用于消毒地面的酚類化學(xué)消毒劑是 。10．消毒劑中的 類，可與細(xì)菌酶蛋白的SH基結(jié)合，發(fā)揮殺菌作用。11．煮沸法中 ，殺滅芽胞需煮沸。四、名詞解釋1．消毒（disinfection）2．滅菌 (sterilization) 3．抑菌 (bacteriostasis) 4．防腐 (antisepsis) 5．無菌 (asepsis) 五、問答題1．在溫度和時(shí)間相同的情況下，為什么濕熱滅菌法的效果比干熱法好？2．簡述紫外線殺菌的作用機(jī)制和注意事項(xiàng)。3．簡述化學(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制。答 案一、 單項(xiàng)選擇題 二、 多項(xiàng)選擇題 三、 填空題1. 高壓蒸氣滅菌法，