【導(dǎo)讀】行繁殖或表達(dá)的工具稱為載體?？寺∽尤后w中，這個(gè)群體即為這種生物的基因組文庫(kù)。定目標(biāo)，改變生物性狀,生產(chǎn)生物產(chǎn)品，為人類生產(chǎn)或生活服務(wù)的科學(xué)。從體內(nèi)取出組織接種在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)到第一次。傳代前階段，一般持續(xù)1-4周?；虻闹苯舆M(jìn)化，可使已有基因獲得新的特性，分子修飾與改性和酶反應(yīng)器等。激素以及其它成分的人工膠囊。是重建、修復(fù)病損或者衰老組織、器官功能的理想種子細(xì)胞。B兩種植物細(xì)胞去掉細(xì)胞壁后，誘導(dǎo)二者的原生質(zhì)體融合，形成單核的雜種細(xì)胞，

　　

【正文】 堿基及其位置。、突變基因的獲得根據(jù)欲獲得的突變基因的堿基序列及其需要置換的堿基位置，首先用 DNA 合成儀合成含有被置換了堿基的寡核苷酶，再用此寡核苷酶為引物通過聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）等技術(shù)獲得所需的大量突變基因。、新酶的獲得將上述定位突變獲得的突變基因進(jìn)行體外重組，插入到適宜的基因載體中，然后通過轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、介導(dǎo)、基因槍、顯微注射等技術(shù)，轉(zhuǎn)入到適宜的宿主細(xì)胞，再在適宜的條件下進(jìn)行表達(dá)，就可獲得經(jīng)過修飾的新酶 。定點(diǎn)突變技術(shù)在酶分子修飾中試一種行之有效的常用方法，定點(diǎn)突變技術(shù)為氨基酸置換修飾和核苷酸置換修飾提供了先進(jìn)、可靠的手段。 1 何謂固定化酶？固定化酶的特性與游離酶的比較有哪些改變？ 答：固定化酶是指固定在一定載體上并在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行催化反應(yīng)的酶。固定化酶既保持了酶的催化功能，又克服了游離酶的不足之處，具有提高酶的催化效率，增強(qiáng)穩(wěn)定性，可反復(fù)或連續(xù)使用以及易于和反應(yīng)產(chǎn)物分開等顯著優(yōu)點(diǎn)。 固定化酶與游離酶比較，其催化特性主要有下列變化：固定化酶的穩(wěn)定性一般比游離酶的穩(wěn)定性好，主要表現(xiàn)在：對(duì)熱穩(wěn)定性提高 ，可以耐受較高的溫度；保存穩(wěn)定性好，可以在一定條件下保存較長(zhǎng)時(shí)間；對(duì)蛋白酶的抵抗性增強(qiáng)，不易被蛋白酶水解；對(duì)變性劑耐受性提高，在尿素、有機(jī)溶劑和鹽酸胍等蛋白質(zhì)變性劑 的作用下，仍可保留較高的酶活力等。固定化酶的最適作用溫度一般與游離酶差不多，活化能也變化不大，但也有些固定化酶的最適溫度與游離酶比較會(huì)有較明顯的變化。酶經(jīng)過固定化后，其作用的最適pH 往往會(huì)發(fā)生一些變化。固定化酶的底物特異性與游離酶比較可能有些不同，其變化與底物相對(duì)分子質(zhì)量的大小有一定關(guān)系。對(duì)于那些作用于低分子底物的酶，固定化前后的底物特異性沒有 明顯改變。而對(duì)于那些可作用于大分子底物，又可作用于小分子底物的酶而言，固定化酶的底物特異性往往會(huì)發(fā)生變化。 1 選擇酶反應(yīng)器的主要依據(jù)有哪些？ 答：酶反應(yīng)器的選擇是在了解酶反應(yīng)器的各種類型和特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，主要依據(jù)酶的應(yīng)個(gè)形式、酶的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、底物和產(chǎn)物的理化性質(zhì)等幾個(gè)方面進(jìn)行。 （ 1）依據(jù)酶的應(yīng)用形式選擇反應(yīng)器：酶的應(yīng)用形式主要有游離酶和固定化酶，酶的應(yīng)用形式不同，其所使用的反應(yīng)器亦有所不同。在應(yīng)用游離酶進(jìn)行催化反應(yīng)時(shí)，酶與底物均溶解在反應(yīng)溶液中，通過互相作用，進(jìn)行催化反應(yīng)，可以選用攪拌罐式反應(yīng)器 、鼓泡式反應(yīng)器、噴射式反應(yīng)器、膜反應(yīng)器等。固定化酶具有穩(wěn)定性較好，可以反復(fù)或連續(xù)使用的特點(diǎn)，應(yīng)用固定化酶進(jìn)行催化反應(yīng)，可以選擇填充床式反應(yīng)器、流化床式反應(yīng)器、鼓泡式反應(yīng)器、膜反應(yīng)器、攪拌器式反應(yīng)器等。 （ 2）依據(jù)酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性質(zhì)選擇反應(yīng)器：在考慮酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)性質(zhì)對(duì)反應(yīng)器選擇的影響方面，主要因素有酶與底物的混合程度、底物濃度對(duì)酶反應(yīng)速度的影響、反應(yīng)產(chǎn)物對(duì)酶的反饋抑制作用以及酶催化作用的溫度條件等。 （ 3）依據(jù)底物或產(chǎn)物的理化性質(zhì)選擇反應(yīng)器：酶的催化反應(yīng)是在酶的催化作用下，將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的過程。在催化 過程中，底物和產(chǎn)物的理化性質(zhì)直接影響酶催化反應(yīng)的速率，底物或產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量、溶解性、黏度等性質(zhì)也對(duì)反應(yīng)器的選擇有重要影響。 1簡(jiǎn)述現(xiàn)代生物技術(shù)在人類生產(chǎn)生活中的作用 （ 1）改善農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、解決食品短缺 ①提高農(nóng)作物產(chǎn)量及其品質(zhì)（培育抗逆的作物優(yōu)良品系、植物種苗的工廠化生產(chǎn) 、提高糧食品質(zhì)、生物固氮，減少化肥使用量 、生物農(nóng)藥，生產(chǎn)綠色食品 ） ② 發(fā)展畜牧業(yè)生產(chǎn)（動(dòng)物的大量快速無(wú)性繁殖 、培育動(dòng)物的優(yōu)良品系 ） （ 2）食品生產(chǎn)、食品加工、食品檢測(cè) （ 3）提高生命質(zhì)量、延長(zhǎng)人類壽命（開發(fā)制造奇特而又貴重的 新型藥品 、疾病的預(yù)防和診斷、基因治療 ） （ 4）解決能源危機(jī)、治理環(huán)境污染（解決能源危機(jī) 、環(huán)境保護(hù) ） （ 5）制造工業(yè)原料、生產(chǎn)貴重金屬 （制造工業(yè)原料 、生產(chǎn)貴重金屬 ） 20. PCR 的基本步驟及特點(diǎn)分別是什么？ 標(biāo)準(zhǔn)的 PCR 過程分為三步： 變性（ 90℃ 96℃）：雙鏈 DNA 模板在熱作用下， 氫鍵斷裂，形成單鏈 DNA （ 25℃ 65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與 DNA 模板結(jié)合，形成局部雙鏈。 （ 70℃ 75℃）：在 Taq DNA 聚合酶（在 72℃左右最佳的活性）的作用下，以 dNTP 為原料，從 引物的 5′端→ 3′端延伸，合成與模板互補(bǔ)的 DNA 鏈。 PCR 的特點(diǎn)：（ 1）特異性強(qiáng) （ 2）敏感性高（ 3）快速 （ 4）簡(jiǎn)便 （ 5）可以擴(kuò)增 mRNA 21. 微生物發(fā)酵生產(chǎn)中下游加工的主要工藝流程是什么？ 發(fā)酵液 — 預(yù)處理（加熱、調(diào) pH、絮凝） — 細(xì)胞分離（過濾、離心、錯(cuò)流過濾） — 細(xì)胞破碎（勻化、研磨） — 細(xì)胞碎片分離 — 初步純化（沉淀、超濾、離子交換、萃取、超濾） — 精制（沉淀、超濾、層板分離、結(jié)晶） 22. 微生物產(chǎn)酶中的工程菌的構(gòu)建中酶基因的克隆策略是什么？ （ 1）能產(chǎn)生目的酶的生物 — 總 mRNA 的純化 — mRNA— RTPCR— 與合適的載體重組、重組子的篩選與鑒定 — 轉(zhuǎn)入宿主菌 — 酶的工業(yè)化生產(chǎn)。 （ 2）能產(chǎn)生目的酶的生物 — 酶的純化 — 測(cè)定 N 端部分氨基酸序列 — 設(shè)計(jì)引物— RTPCR— 與合適的載體重組、重組子的篩選與鑒定 — 轉(zhuǎn)入宿主菌 — 酶的工業(yè)化生產(chǎn)。 23. pH 對(duì)發(fā)酵過程的影響及發(fā)酵過程中影響 pH 值的主要因素有哪些？ （ 1） pH 影響酶的活性。 （ 2） pH 的改變往往引起某些酶的激活或抑制，使菌體代謝途徑發(fā)生改變，代謝產(chǎn)物發(fā)生變化。 （ 3） pH 影響微生物細(xì)胞膜所帶電荷狀態(tài)，從而改變細(xì)胞膜 的滲透性，影響微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝產(chǎn)物的排泄。 （ 4） pH 影響培養(yǎng)基中某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和中間代謝產(chǎn)物的排泄。 （ 5） pH 對(duì)氧的溶解、氧化還原電位、營(yíng)養(yǎng)物的物理狀態(tài)等都有影響。 24. 淋巴細(xì)胞雜交瘤產(chǎn)生單克隆抗體的原理及技術(shù)流程是什么？ 單克隆抗體技術(shù)的基本原理 要制備單克隆抗體需先獲得能合成專一性抗體的單克隆 B 淋巴細(xì)胞，但這種 B 淋巴細(xì)胞不能在體外生長(zhǎng)。而實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)骨髓瘤細(xì)胞可在體外生長(zhǎng)繁殖，應(yīng)用細(xì)胞雜交技術(shù)使骨髓瘤細(xì)胞與免疫的淋巴細(xì)胞二者合二為一，得到雜種的骨髓瘤細(xì)胞。這種雜種細(xì)胞繼承兩種親代細(xì)胞的特性，它既 具有 B 淋巴細(xì)胞合成專一抗體的特性，也有骨髓瘤細(xì)胞能在體外培養(yǎng)增殖永存的特性，用這種來源于單個(gè)融合細(xì)胞培養(yǎng)增殖的細(xì)胞群，可制備抗一種抗原決定簇的特異單克隆抗體。 技術(shù)流程：（ 1）抗原制備； （ 2）免疫動(dòng)物； （ 3）免疫脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備； （ 4）細(xì)胞融合； （ 5）雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)； （ 6）雜交瘤細(xì)胞的篩選； （ 7）雜交瘤細(xì)胞的克隆化； （ 8）單克隆抗體的檢定； （ 9）分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立； （ 10）單克隆抗體的大量制備。 25. 以 pBR322 說明基因工程 中載體的基本要求及 pBR322 的優(yōu)缺點(diǎn)。（ 4 分） 載體的基本要求：（ 1）具有對(duì)受體細(xì)胞的可轉(zhuǎn)移性，并在宿主細(xì)胞 內(nèi)能獨(dú)立復(fù)制。 （ 2）有選擇性標(biāo)記，便于重組 DNA 分子的檢測(cè)。（ 3）有一段多克隆位點(diǎn)。 （ 4）分子量小，拷貝數(shù)多。 （ 5）容易從宿主細(xì)胞中分離純化。 pBR322 的優(yōu)缺點(diǎn)： 1. 酶切插入位點(diǎn)（該質(zhì)粒多達(dá) 40 個(gè)）； 2. 篩選基因（抗藥基因），該質(zhì)粒有 2 個(gè)（ amp, tet)； 。 26. 舉例說明生物技術(shù)在作物育種方面的應(yīng)用及原理。（ 5 分） （ 1）誘導(dǎo)雄性不育系（轉(zhuǎn)基因及反義 RNA） ；（ 2）利用轉(zhuǎn)基因培育抗逆性作物品種；（ 3）轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗除草劑作物（ 4）培養(yǎng)抗病蟲作物；（ 5）培育抗重金屬作物（ 6）培育抗病毒作物（轉(zhuǎn)基因） 27. 目前人工種子的制備過程中的主要技術(shù)難題及相應(yīng)措施主要有哪些？（ 5 分） （ 1）胚狀體的同步生長(zhǎng)，應(yīng)對(duì)措施主要有：低溫法，抑制劑法，分離法，通氣法，滲透壓法；（ 2）人工胚乳的制備：目前主要的人工胚乳主要有 MS 培養(yǎng)基、 SH 培養(yǎng)基加激素等其它組分。（ 3）包埋劑及人工種皮，目前仍沒有好的解決辦法，目前最常用的是褐藻酸鈉。 人工種子利用有何優(yōu)點(diǎn) ? 用于制備人工種子的繁 殖體主要有那些 ? 同游離酶相比，固定化酶的性質(zhì)改變主要有哪些？ 固定化操作對(duì)酶反應(yīng)系統(tǒng)的影響主要有哪些？ 固定化酶有何性質(zhì)？ 干細(xì)胞研究包括那幾個(gè)階段？ 從 cDNA 文庫(kù)和基因文庫(kù)中獲得目的基因有什么不同？ 簡(jiǎn)述分批培養(yǎng)過程中微生物生長(zhǎng)的規(guī)律。 動(dòng)物細(xì)胞融合的主要途徑有哪些？各有何特點(diǎn)？ 體細(xì)胞雜交和原生質(zhì)體融合有哪些類型？其產(chǎn)物和再生個(gè)體有何特點(diǎn)？ 1 細(xì)胞的固定化方法有哪些？各有何特點(diǎn)？ 1 為什么要進(jìn)行酶的修飾？ 1 闡述外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞的各種途徑？ 1 考斯質(zhì)粒的定義及基本特征是什么？ 1 簡(jiǎn)述胚胎干細(xì)胞與成體干 細(xì)胞的優(yōu)缺點(diǎn)。 1 “多莉”羊克隆的技術(shù)流程及這一科學(xué)事件的意義是什么？ 1 微生物發(fā)酵產(chǎn)酶是目前酶生產(chǎn)的重要途徑，發(fā)酵產(chǎn)酶中下游加工的主要工藝流程以及注意事項(xiàng)是什么？ 1 液體深層發(fā)酵的主要操作方式及相關(guān)的優(yōu)缺點(diǎn)分別是什么？