【正文】 膽固醇濃度（mg/dL）膽固醇重量（mg）1200822259325010427511530012632513試劑 D 膽固醇氧化酶液（CO），酶活濃度：10U/mL精密稱(chēng)取 48mg CO（CO 比活 ）至 100mL 容量瓶中，用 KPB 溶解并稀 釋至刻度。溶液 E 過(guò)氧化氫酶溶液表 35 過(guò)氧化氫酶溶液配制表名稱(chēng)終濃度稱(chēng)取量4－氨基－安替比林 mg苯酚7mmol/L辣根過(guò)氧化物酶（HRP）6U/mL mg (175U/mg)TritonX1002mg/mL600 mg用 KPB 稀釋至總體積 300mL 實(shí)驗(yàn)方法A、B 兩人分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：按表 36 數(shù)據(jù)，在各樣品離心管中加入 HRP 溶液、CO 溶液，在各樣品空白離 心管中加入 HRP 溶液、KPB，混合均勻。在樣品離心管、樣品空白離心管中加入相 應(yīng)的膽固醇溶液，合蓋，振蕩均勻，室溫反應(yīng) 10min，在波長(zhǎng) 500nm 處測(cè)量吸光度。表 36 反應(yīng)操作表名稱(chēng)KPB膽固醇溶液CO 溶液HRP 溶液樣品/40μL空白40μL/ 結(jié)果1） 計(jì)算方法CH2O2（μmol/mL）＝A500－CTC 檢測(cè)（mg/dL）＝（CH2O2103100）247。TC 檢測(cè)率（%）＝（CTC 檢測(cè)247。CTC 理論）100%2） 結(jié)果A. 數(shù)據(jù)表表 37 膽固醇檢測(cè)數(shù)據(jù)表CTC 理論（mg/dL）OD500CH2O2（μmol/mL）CTC 檢測(cè)（mg/dL）檢測(cè)率（%）平均檢 測(cè)率（%）200103%108%112%225104%103%102%250106%97%88%275104%101%97%30098%98%99%325101%98%96%B. 檢測(cè)結(jié)果對(duì)比圖 見(jiàn)圖 32。 討論平均檢測(cè)率波動(dòng)范圍為 97%108%，與理論值對(duì)比，相關(guān)系數(shù)為 r=，結(jié)果 較理想。圖 32 膽固醇檢測(cè)結(jié)果對(duì)比圖 豬血清總膽固醇測(cè)定 儀器紫外分光光度計(jì)、1mL 移液管、10mL 試管、200μL 微量注射器、200mL 燒杯、100mL 容量瓶、500mL 廣口瓶。 試劑試劑 A 磷酸鉀緩沖液（KPB） 2L mL 1mol/L K2HPO4 溶液與 1mol/L KH2PO4 溶液混合，用蒸餾水稀釋 至 2L。試劑 B 生理鹽水配制 ％氯化鈉溶液。 試劑 C 豬血清到屠宰場(chǎng)取新鮮豬血，加入肝素抗凝。取 4mL 豬血放入離心機(jī)中，3000rpm 離心15min，取上層血清備用。試劑 D 膽固醇氧化酶溶液（CO，比活 ）稱(chēng)取 ，溶解于 10mL 磷酸鉀緩沖液中，CO 濃度為 20U/mL。 試劑 E 過(guò)氧化物酶溶液表 38 過(guò)氧化氫酶溶液配制表名稱(chēng)終濃度稱(chēng)取量4－氨基－安替比林 mmol/L苯酚7mmol/L辣根過(guò)氧化物酶（HRP）6U/mL mg (175U/mg)TritonX1002mg/mL400 mg用 KPB 稀釋至總體積 200mL試劑 F 膽固醇酯酶溶液 （CE，比活 170U/mg）稱(chēng)取 ，加 20mL 磷酸鉀緩沖液溶解，得 20U/mL 的 CE 溶液。 實(shí)驗(yàn)方法甲乙兩人分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)，每人做兩組平行實(shí)驗(yàn)：按下表在各樣品管中加入 HRP 溶液、CO 溶液、CE 溶液，在各樣品空白管中加 入 HRP 溶液、KPB，混合均勻。在樣品離心管、樣品空白離心管中加入相應(yīng)體積的 血清和生理鹽水，合蓋，振蕩均勻，室溫反應(yīng) 10min，在波長(zhǎng) 500nm 處測(cè)量吸光度。表 39 反應(yīng)操作表名稱(chēng)KPBCE 溶液CO 溶液豬血清＋生理鹽水HRP 溶液樣品/空白//表 310 豬血清與生理鹽水配比表樣品編號(hào)血清（μL）生理鹽水（μL）140160260140380120410010051208061406071604081802092000 結(jié)果1） 計(jì)算方法CH2O2（μmol/mL）＝A500－ WTC（mg）＝CH2O242） 結(jié)果A. 數(shù)據(jù)表見(jiàn)表 311。 B. 檢測(cè)曲線圖見(jiàn)圖 33。C. 總膽固醇濃度折算表 見(jiàn)表 312。表 311 豬血清膽固醇檢測(cè)率數(shù)據(jù)編 組 加入量 CH2O2 OD500CTCWTC平均 WTC號(hào)別（μL）（μmol/mL）（μmol/mL）（mg）（mg）A40 09 B40 18 1C40 94 D40 04 A60 51 B60 88 2C60 76 D60 73 A80 28 B80 14 3C80 57 D80 39 A100 71 B100 78 4C100 02 D100 98 A120 26 B120 54 5C120 68 D120 54 A140 75 B140 91 6C140 41 D140 39 （續(xù)上表）編 組 加入量 CH2O2 OD500CTCWTC平均 WTC號(hào)別（μL）（μmol/mL）（μmol/mL）（mg）（mg）A160 48 B160 43 7C160 18 D160 21 A180 01 B180 65 8C180 89 D180 14 A200 39 B200 35 9C200 09 D200 05 豬血清膽固醇檢測(cè)曲線200 180 反應(yīng)液中膽固醇體積（u l ）160 140 120 100 80 60 40 20 0 反應(yīng)液中膽固醇含量（m g ）圖 33 豬血清總膽固醇檢測(cè)曲線圖表 312 總膽固醇濃度折算表平均 WTC（mg）血清加入量（mL）折算 CTC（mg/dL）818476757778808180平均膽固醇濃度（mg/dL）79 討論豬血清總膽固醇檢測(cè)線性良好，檢測(cè)到的膽固醇平均為 79mg/dL，雖比文獻(xiàn)值 100mg/dL 低，但檢測(cè)率穩(wěn)定。 人血清總膽固醇測(cè)定 儀器紫外分光光度計(jì)、5mL 移液管、10mL 試管、200μL 微量注射器、200mL 燒杯、300mL 燒杯。 試劑試劑 A 磷酸鉀緩沖液（KPB） 2L mL 1mol/L K2HPO4 溶液與 1mol/L KH2PO4 溶液混合，用蒸餾水稀釋 至 2L。試劑B 人血清 隨機(jī)取附二院門(mén)診人血清樣本 10 份試劑 C 膽固醇酯酶溶液 （CE，比活 170U/mg）稱(chēng)取 ，加 40mL 磷酸鉀緩沖液溶解，得 10U/mL 的 CE 溶液。 試劑 D 膽固醇氧化酶溶液（CO，比活 ）稱(chēng)取 ，溶解于 20mL 磷酸鉀緩沖液中，CO 濃度為 10U/mL。 試劑 E 過(guò)氧化氫酶溶液表 313 過(guò)氧化氫酶溶液配制表名稱(chēng)終濃度稱(chēng)取量4－氨基－安替比林苯酚7mmol/L辣根過(guò)氧化物酶（HRP）6U/mL mg (175U/mg)TritonX1002mg/mL500 mg用 KPB 溶解并稀釋至總體積 250mL 實(shí)驗(yàn)方法甲乙兩人分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)，每人做一組平行實(shí)驗(yàn)：按下表在各樣品管中加入 HRP 溶液、CO 溶液、CE 溶液，在各樣品空白管中加 入 HRP 溶液、KPB，混合均勻。在樣品離心管、樣品空白離心管中加入相應(yīng)體積的 人血清，合蓋，振蕩均勻，室溫反應(yīng) 10min，在波長(zhǎng) 500nm 處測(cè)量吸光度。表 314 反應(yīng)操作表名稱(chēng)KPBCE 溶液CO 溶液HRP 溶液人血清樣品/空白// 結(jié)果1 ）計(jì)算方法CH2O2（μmol/mL）＝OD500－CTC 檢測(cè)（mg/dL）＝（CH2O2103100V 總）247。V 上樣膽固醇檢測(cè)率（％）＝（CTC 檢測(cè)247。CTC 院測(cè)）100％2 ） 結(jié)果A. 數(shù)據(jù)表表 315 人血清總膽固醇檢測(cè)數(shù)據(jù)表編 組號(hào)別（μmol/mL）（mmol/L）(mmol/L)（mmol/L）率（％）A1BC98%DA2BC95%DA3BC87%DA4BC93%DOD500CH2O2CTCCTC 平均醫(yī)院 CTC平均檢測(cè)（續(xù)上表）號(hào)別（μmol/mL）（mmol/L）(mmol/L)（mmol/L）率（％）A 5B 90%C D A 6B 98%C D 0．165 A 7B 99%C D 0 00A 8B 89%C D A 9B 91%C D A 10B 101%C D