【正文】 圖 36 經(jīng) TBA 法處理后的磷脂脂質(zhì)體吸光值隨培養(yǎng)天數(shù)的變化 脂質(zhì)體在懸浮液中會(huì)由于光、氧、金屬等因素發(fā)生脂質(zhì)的氧化和水解反應(yīng)。 [19]卵磷脂是構(gòu)成脂質(zhì)體膜的基本物質(zhì)，它的化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，易于氧化水解，氧化產(chǎn)物，破壞脂質(zhì)體膜的完整性，影響脂質(zhì)體的包封率，也會(huì)增加毒性。因此有時(shí)在制備脂質(zhì)體的過(guò)程中除了添加膽固醇來(lái)降低其被氧化速率外，還經(jīng)常添加其他的抗氧化劑。因此找出適宜的膽固醇添加量，不僅能降低脂質(zhì)體的被氧化速率，還能減少額外的抗氧化劑的使用。這樣，不僅能夠降低成本，還能夠降低產(chǎn)品因抗氧化劑而帶來(lái)的毒性。我們可以看出沒(méi)有添加過(guò)膽固醇的脂質(zhì)體溶液經(jīng)過(guò)5天后被氧化程度較大，添加了5%濃度膽固醇的脂質(zhì)體溶液的被氧化程度明顯降低。進(jìn)一步增加膽固醇的添加量其被氧化程度并沒(méi)有明顯的降低。膽固醇不是抗氧化劑卻能起到抗氧化的作用，推測(cè)是由于膽固醇插入雙分子層中后，脂質(zhì)體分子的結(jié)構(gòu)更為緊密，混合膜的過(guò)剩面積和動(dòng)力學(xué)結(jié)果表明，膽固醇和卵磷脂是相互吸引的，即膽固醇的加入使卵磷脂囊泡更不容易被表面活性劑破壞。由以上分析我們看出，15%濃度的膽固醇就能夠很好的達(dá)到防止脂質(zhì)體遭到氧化變質(zhì)的作用。 膽固醇添加量對(duì)脂質(zhì)體膜微極性的影響芘熒光探針是一種研究介質(zhì)極性的熒光探針，其熒光發(fā)射譜圖中熒光發(fā)射第一譜帶與第三譜帶的熒光強(qiáng)度之比(I1/I3)與介質(zhì)的極性有較好的相關(guān)性，被稱為“極性標(biāo)尺”，對(duì)微環(huán)境極性特別敏感，因此可以用來(lái)測(cè)量脂質(zhì)體膜的微極性。芘的熒光強(qiáng)度I1/I3 值越大說(shuō)明脂質(zhì)體膜的微極性越大。由于芘元素非極性大，其主要分布在磷脂分子的非極性尾中，即雙層膜之間。 I1/I3值反映芘周?chē)h(huán)境的變化，比值越大，微極性越強(qiáng)，探針?biāo)幍沫h(huán)境非極性越弱；比值越小則微極性越弱，探針?biāo)幍沫h(huán)境非極性越強(qiáng) [16]。不同膽固醇濃度脂質(zhì)體的測(cè)量結(jié)果如表32所示。 表 32 不同膽固醇濃度的磷脂脂質(zhì)體的熒光強(qiáng)度Chol 摩爾百分比 I1 I3 I1/ I30% 1072 924 5% 1025 908 15% 1035 923 25% 1091 976 50% 從數(shù)據(jù)上可以看出，隨著膽固醇的濃度的上升，脂質(zhì)體溶液的I1/ I3在不斷的下降，表明脂質(zhì)體溶液的微極性在不斷地下降。這是由于膽固醇的羥基端與磷脂的極性頭基相結(jié)合，降低了脂質(zhì)體原有的極性，造成了整個(gè)體系極性的降低。極性較大的脂質(zhì)體能夠較快的被人體吸收，而極性較小的脂質(zhì)體通常能夠攜帶藥物達(dá)到人體的代謝末端。因此，我們可以根據(jù)藥物的具體情況來(lái)選擇合適極性的脂質(zhì)體作為載體。 膽固醇添加量對(duì)脂質(zhì)體膜流動(dòng)性的影響DPH作為一種非極性熒光探針，位于脂質(zhì)體脂雙層膜相中，當(dāng)它與膜結(jié)合后會(huì)產(chǎn)生熒光，我們可以通過(guò)熒光的強(qiáng)弱來(lái)判斷膜流動(dòng)性的變化，熒光強(qiáng)度越大，則流動(dòng)性和通透越弱，反之則膜流動(dòng)性和通透性越強(qiáng)。我們對(duì)不同膽固醇濃度脂質(zhì)體以DPH為探針測(cè)量其偏振度，其結(jié)果如表33所示。表 33 P 值隨膽固醇濃度的變化Chol 濃度 0% 5% 15% 25% 50%P 從以上的數(shù)據(jù)我們可以看出隨著膽固醇濃度的上升，P(熒光偏振度) 值在不斷的減小，說(shuō)明膽固醇的加入會(huì)增加脂質(zhì)體膜的流動(dòng)性以及通透性。脂質(zhì)體作為一種有效成分的載體，其流動(dòng)性以及通透性會(huì)影響其包載的有效成分的釋放速度。流動(dòng)性及通透性過(guò)強(qiáng)會(huì)使有效成分過(guò)快的釋放出來(lái)，不能達(dá)到良好的靶向定位作用。第 4 章 結(jié)論與展望 結(jié)論本次研究采用旋轉(zhuǎn)蒸餾法制備了磷脂脂質(zhì)體，研究了膽固醇的加入對(duì)于磷脂脂質(zhì)體膜性質(zhì)的影響，從而得出膽固醇最適宜的添加量，為實(shí)驗(yàn)小組下一步進(jìn)行的用植物固醇替代膽固醇的研究提供參考。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：1：利用納米粒度儀測(cè)得脂質(zhì)體的粒徑先隨著膽固醇的濃度增加而增大，之后由于膽固醇濃度過(guò)高，破壞了脂質(zhì)體穩(wěn)定的雙分子層結(jié)構(gòu)，造成脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的破裂，其粒徑急劇減小。2：使用TBA（硫代巴比妥酸）法測(cè)試不同膽固醇濃度的脂質(zhì)體的抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)添加了膽固醇的脂質(zhì)體，抗氧化能力有著顯著的提高，但膽固醇的濃度打到15%之后繼續(xù)添加并不能繼續(xù)增加脂質(zhì)體的抗氧化能力。3：根據(jù)差示掃描熱量?jī)x（DSC）所得出的結(jié)果，脂質(zhì)體的相變溫度在20%膽固醇濃度之前，隨著膽固醇濃度的升高而降低，之后隨著膽固醇濃度的升高而升高，測(cè)得的相變溫度皆在36攝氏度以上，最高不超過(guò)42攝氏度。4：采用芘作為熒光探針測(cè)量脂質(zhì)體的微極性，發(fā)現(xiàn)隨著添加的膽固醇增多，體系的微極性有所下降。5：采用DPH作為熒光探針測(cè)量脂質(zhì)體的膜流動(dòng)性，發(fā)現(xiàn)隨著添加的膽固醇的增多，磷脂脂質(zhì)體膜的流動(dòng)性有所增強(qiáng)。最后，得出的結(jié)論是膽固醇的最適添加量為15%20%。 不足之處及未來(lái)展望本次研究在制備脂質(zhì)體的過(guò)程中多采用甲醇、三氯甲烷等有機(jī)溶劑，易造成危害，如何改進(jìn)脂質(zhì)體的制備工藝，有待進(jìn)一步研發(fā)。同時(shí)，制備脂質(zhì)體過(guò)程中采用的膽固醇易造成血管粥樣硬化，實(shí)驗(yàn)組的下一個(gè)研究目標(biāo)就是如何采用植物固醇來(lái)替代膽固醇，在此祝愿實(shí)驗(yàn)組下一階段實(shí)驗(yàn)順利。參考文獻(xiàn)[1] 陳建海．藥用高分子材料與現(xiàn)代藥劑[M]．北京：科學(xué)出版社，2022：281297．[2] 藍(lán)琴．膽固醇和蛋白質(zhì)對(duì)卵磷脂囊泡穩(wěn)定性的影響研究[D]．廈門(mén)：廈門(mén)大學(xué)，2022．[3] , , of univalent ions across the lamellae of swollen of Molecular , 13(1):238252.[4] Yasufumi : evolution of the liposomes as a targeted drug delivery Drug Delivery , 43(23):197205.[5] Tayor T M,Davidson P M,Bruce B D,et nanocapsuless in food science and agriculture[J].Crit Rev Food Sci Nutr,2022,45:119.[6] 鄧意輝，. 2022.[7] 武博達(dá)．影響脂質(zhì)體穩(wěn)定性的主要因素及對(duì)策[J]．養(yǎng)殖與飼料，2022，6(6)：5962．[8] Schmedes A, Holmeer G, A new thiobarbituric add(TBA)method for determination of free malonaldehyde(MDA) and hydroperoxides selectivity as a measure of lipid peroxidation[J]. Journal of American Oil Chemistry Soc, 1989, 66:813817.[9] , , activation of the classical plement pathway does not require et Biophysica Acta(BBA),1994,1192(1):3544.[10]Zuidam N J,Martin H K,Barenholz Y,et al. Physical (in) stability of liposomes upon chemical hydrolysis: the role of lysophospholipids and fatty acids[J].Biochimi Biophysica Acta,1995,1240(1):101110.[11]史向陽(yáng)，孫曹民，吳世康．膠原、殼聚糖包覆的小單層脂質(zhì)體的體外穩(wěn)定性評(píng)價(jià)[J]．生物物理學(xué)報(bào)，1998，14(4)：635641 ．[12]紀(jì)俊敏，謝文磊．脂質(zhì)體作為藥物載體的研究進(jìn)展[J]．鄭州工程學(xué)院學(xué)報(bào)，2022，23(4)： 6872．[13]吳志榮，徐蓮莢，蔡貞貞等．雙參脂質(zhì)體口服液的研制[J]．中成藥，1989(7)：6．[14]邱德凱，沈敏，曾民德等．冬蟲(chóng)夏草多糖脂質(zhì)體治療慢性乙型肝炎的研究．中華消化雜志，199l，11(2) ：69．[15]丁玉玲，（GSL）的研制 [J] .中國(guó)藥學(xué)雜志，1995，30（7）：414417.[16][J] .中國(guó)藥學(xué)雜志，1995，30（7）：414417.[17]鄧英杰，[J] .沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，13（1）：14.[18]顧學(xué)裘，[J] .沈陽(yáng)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，14（4）：250253.[19]儲(chǔ)茂星，古宏晨，[J] .藥學(xué)學(xué)報(bào)，2022，36（6）：444.[20]沈央，[J] .中成藥，2022，26（5）：352.[21]吳時(shí)敏，吳謀成．植物甾醇進(jìn)展與趨向(II)植物甾醇的應(yīng)用基礎(chǔ)和開(kāi)發(fā)研究[J]．中國(guó)油脂，2022，27(3) ：6063 ．[22][J]．糧食與食品工業(yè)，2022，25(3)：2224．致 謝本論文是在導(dǎo)師曹棟教授的悉心指導(dǎo)下完成的，從論文的選題、實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)過(guò)程直至論文的撰寫(xiě)，都凝聚著導(dǎo)師的智慧和心血。導(dǎo)師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、開(kāi)闊的思維、淵博的知識(shí)，對(duì)我思考分析問(wèn)題能力的提高、思維方式的改進(jìn)有著重要的幫助。導(dǎo)師為人處事的寬宏胸襟，對(duì)我在日?？蒲羞^(guò)程中各種錯(cuò)誤的包容和指導(dǎo)，使我能夠順利完成課題。在此，衷心祝愿老師們工作順利、身體健康！非常感謝楊貝貝師姐在實(shí)驗(yàn)方案、研究方案實(shí)驗(yàn)過(guò)程以及論文完成過(guò)程中給與的精心指導(dǎo)；感謝他在日?？蒲羞^(guò)程中對(duì)我的幫助、鼓勵(lì)、包容和諄諄教誨；感謝他在學(xué)習(xí)生活過(guò)程中的辛勤培育和無(wú)私幫助；感謝他在教我如何做學(xué)問(wèn)的同時(shí)培養(yǎng)我思考問(wèn)題的方式和教會(huì)我一些做人的道理。祝師兄師姐工作順利、前途似錦！真誠(chéng)的感謝在本實(shí)驗(yàn)室共同奮斗的同學(xué)，我們一起在實(shí)驗(yàn)室里學(xué)習(xí)與進(jìn)步，并且相互給予幫助和鼓勵(lì)，祝可愛(ài)的同學(xué)們學(xué)業(yè)有成！在此，謹(jǐn)向曾給予我關(guān)心、幫助和支持的所有老師、同學(xué)、家人和朋友表示衷心的感謝！