植物細(xì)胞組織培養(yǎng)技術(shù)-資料下載頁(yè)
2025-10-16 11:38本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】如鈣鹽等易發(fā)生沉淀的藥品不能混合，應(yīng)單位定容，最后加上蒸餾。水，定容至1升或500毫升。在定容時(shí)注意用蒸餾水洗凈燒杯和玻璃攪棒以減少。母液，即每種藥品擴(kuò)大l00倍或者l000倍。逐個(gè)溶解，混合在一起成為微量元素。母液，每配1LN6培養(yǎng)基需吸取該母液10ml或者1ml。半小時(shí)以上，冷卻后定容至1L。冰箱過夜貯藏?zé)o結(jié)晶析出，否則重新配制。配l升N6培養(yǎng)基需加該鐵鹽母液5ml。它們大都是擴(kuò)大1000倍，分別。稱量，分別定容和儲(chǔ)存，配制培養(yǎng)基時(shí)按需要的量加入。而配制2,4-D時(shí)，可先用少量的95%酒精溶解。所以本實(shí)驗(yàn)采用N6培養(yǎng)基替代MS培養(yǎng)基。加熱至沸騰片斷，以使瓊脂充分溶解，檢查時(shí)可注意燒杯內(nèi)溶。材料不同，對(duì)培養(yǎng)基的pH值要求也不同。應(yīng)在消毒后的兩周內(nèi)用完，最好不要超過一個(gè)月。好之后加入會(huì)改變pH值。pH過酸或過堿對(duì)培養(yǎng)基均是不利的，會(huì)導(dǎo)致過軟或
【正文】 臺(tái)上，倒掉消毒液，用無菌水沖洗 35次，以便去除殘留的消毒液。 4 取消毒過的胡蘿卜放入已滅菌的帶有濾紙的培養(yǎng)皿中，用無菌解剖刀從兩端各切去 10毫米，再將留下的胡蘿卜直根切成一系列一毫米厚的橫切片。取其中的一片轉(zhuǎn)到另一個(gè)已滅菌的帶有吸水紙的培養(yǎng)皿中，再將每一片切成小塊，使其每個(gè)小塊上均包含木質(zhì)部、形成層和韌皮部，外植體的大小要盡量一致。 5 接種 取下培養(yǎng)瓶的塞子（或錫鉑紙），用火灼燒 瓶口 2 cm處，手持培養(yǎng)瓶呈 45186。角，用消毒鑷子把 48塊外植體轉(zhuǎn)到瓊脂培養(yǎng)基的表面，注意把靠近根尖的一面接觸培養(yǎng)基。然后立即將燒過的封口棉塞或錫鉑紙封住瓶口。每?jī)纱无D(zhuǎn)移 9 之間都要用酒精燈灼燒鑷子，防止帶菌。 6 培養(yǎng) 接種好的外植體在 25℃的培養(yǎng)箱中，黑暗條件下培養(yǎng)四周左右就會(huì)形成一塊較大的愈傷組織。 10 實(shí)驗(yàn)五 組織培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng) 一、 材料和設(shè)備 材料 從培養(yǎng) 46周的外植體上長(zhǎng)出的愈傷組織、 叢生 芽或胚狀體 超凈工作臺(tái) 培養(yǎng)基 N6+ mg/L 2,4D N6+2 mg/L 6BA（也 可以自已設(shè)計(jì)） 三角瓶、帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿、鑷子、解剖刀 70%酒精、 95%酒精及 70%的酒精棉球 酒精燈、火柴、記號(hào)筆、酒精噴壺 二、方法步驟 1 取材 在無 菌 室的 超 凈工作臺(tái)內(nèi) ， 每次取一 瓶培 養(yǎng) 物， 灼 燒培 養(yǎng)瓶口約 20 毫米處 ，用 灼燒冷卻后 的鑷 子和解剖刀 ， 取出外 植體 或者愈傷組織放在 無菌的培養(yǎng) 皿 中 。 每個(gè)培養(yǎng)皿 中 約放 46個(gè) 外 植體 或者愈傷組織 。把 每塊 愈 傷 組織 分成兩 、三個(gè)不小于 5 mm見方的小塊 。外植體 下面向 著 中心的細(xì)胞常呈壞死狀 ,不適宜作繼 代 培 養(yǎng) 。 這些壞死的部分應(yīng)當(dāng)與正常的部分分離 并 棄去 。 每次 操 作后要 去掉 用過的吸水紙并重 新 蓋 上 培 養(yǎng) 皿 的蓋子 。 2 繼代轉(zhuǎn)接 將 正在發(fā)育的 外植體 或 愈 傷組織轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基 上， 接種方法 同 前 。轉(zhuǎn)接后在培養(yǎng)瓶上寫明培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、日期。 長(zhǎng)期培養(yǎng)的胡蘿 卜 組織會(huì)產(chǎn)生大塊愈傷組織。正在發(fā)育的 愈 傷組織作第一次 繼 代培養(yǎng)所 用 的實(shí)驗(yàn)程序與以后每隔四周轉(zhuǎn)移一次建成愈傷組織系的繼代培養(yǎng)程序相同 。 3 實(shí)驗(yàn)記錄 將實(shí)驗(yàn)記錄抄錄于筆記本上，注明實(shí)驗(yàn)開始的日期、持續(xù)期、培養(yǎng)物的數(shù)目 、污染數(shù)目和所作的不 同處理。 在 四 星 期內(nèi)， 每隔 一 星期用 肉 眼觀察 培養(yǎng)物 ， 記錄培養(yǎng)物形態(tài)的變化 ,培養(yǎng)物的生長(zhǎng)狀態(tài)、鮮重變化等，必要時(shí)作拍照記錄。 思考題及作業(yè)： 1 愈傷組織是從 剛 分離的 外植體 的 哪 些區(qū)域起源 的？ 2 所有的外植體的生長(zhǎng)速率都相同嗎？ 3 根據(jù)每組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果撰寫一份完整的實(shí)驗(yàn)論文形式的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，實(shí)驗(yàn)報(bào)告將作為平時(shí)成績(jī)記入總成績(jī)。
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