【正文】 蟲，保證無病毒植株在嚴密隔離的條件下栽培。凡接觸無病毒原原種苗的工具均應消毒并單獨保管專用，操作人員也應穿消毒的工作服。有條件的地方可以找適宜的高寒冷山地，氣候涼爽、蟲害少，有利于無病毒材料的繁殖。對隔離保存的無病毒原種應定期檢測有無病毒感染，及時將再感植株淘汰。（二）試管保存將無病毒原原種的器官或幼小植株接種于培養(yǎng)基上，在試管內(nèi)進行繁殖或置于1～9℃低溫下離體保存。五、無病毒苗的利用與效果生產(chǎn)中應用無病毒苗，需盡量防止病毒的再感染。生產(chǎn)場所應根據(jù)病毒侵染途徑做好土壤消毒或防蚜蟲工作。在應用無病毒苗時，建立無毒原原種、原種繁育圃，經(jīng)常抽查病毒的感染情況，隨時脫毒復壯，及時向生產(chǎn)基地供應無毒種苗。無病毒苗表現(xiàn)出明顯的效果，如草毒可增產(chǎn)20～50％，植株結(jié)果多，單果重增加，上等果比例提高。菊花切花品種的去病毒株，表現(xiàn)出植株高度增加，切花花朵大，莖變粗，葉色綠，切花產(chǎn)量高，大大提高觀賞效果和商品價值。 ？熱處理脫毒的方法有哪些？？莖尖培養(yǎng)脫毒的技術(shù)方法如何？？各有什么優(yōu)缺點？？第六節(jié) 主要經(jīng)濟植物組織培養(yǎng)技術(shù)一、授課章節(jié) 第六節(jié) 主要經(jīng)濟植物組織培養(yǎng)技術(shù)。二、學時安排 2學時。三、教學目標1．通過菊花組培技術(shù)的學習，掌握草本花卉的組培快繁技術(shù)。2．通過蝴蝶蘭和大花蕙蘭組培技術(shù)的學習，掌握蘭科花卉的組培快繁技術(shù)。3．通過美國紅櫨組培技術(shù)的學習，掌握木本植物的組培快繁技術(shù)。4．通過馬鈴薯組培脫毒技術(shù)的學習，進一步理解和掌握植物脫毒與快繁技術(shù)。四、教學重點、難點分析重點：各種植物的培養(yǎng)程序。難點：增殖與繼代培養(yǎng)。五、教具電化教學設備, 各種試管苗。六、教學方法講授法，演示法。七、教學過程Ⅰ.導入本次課主要介紹的是主要經(jīng)濟植物的組織培養(yǎng)技術(shù)。一、菊花的組織培養(yǎng)技術(shù)（一）培養(yǎng)意義菊花為菊科菊屬多年生宿根草本植物，為全世界普遍栽培的重要花卉。菊花的繁殖可以用播種法、扦插法、分株法、組織培養(yǎng)法。在種苗生產(chǎn)上運用最為廣泛的方法是扦插和組培。由于菊花的病毒病種類比較多，而且危害也較為嚴重。使用扦插繁殖苗，容易引起病毒病的擴張和蔓延，因此莖尖脫毒培養(yǎng)和組培快繁生產(chǎn)母株植株，再生產(chǎn)扦插苗的技術(shù)，對優(yōu)良品種的脫毒和復壯有重要意義。（二）培養(yǎng)程序 用于快繁的外植體最好采用莖尖或側(cè)芽，其次是花序軸。選取無病蟲害，粗壯的莖尖和莖段。以花序軸為外植體時，選取具有該品種典型特征的，飽滿壯實的花蕾，最好是將要開放而沒有開放的花蕾。處理時莖尖的嫩葉不要剝得太干凈，以免傷口面暴露太大，使莖尖受到過大的損害；莖段除去葉，留一段葉柄；花蕾留下一小段花柄，便于夾取。、滅菌與接種 材料初步切割后，用洗衣粉水漂洗，再用自來水沖凈后，在超凈工作臺上將其放入70%~75%的酒精中浸潤30s，轉(zhuǎn)入2%次氯酸鈉溶液中消毒8～15min，并不時搖動，最后于無菌水中漂洗3～5次后待用。將莖段兩端的切口再切去一小段，這樣可減少滅菌藥物的毒害。切除莖尖上的幼葉；若是花蕾須剝?nèi)セū?，露出里面半球形的花序軸，再視其大小縱切成4～6塊，接種到誘導培養(yǎng)基中。接種時按材料生長極性的上下端，正放在培養(yǎng)基上。 適用于菊花的培養(yǎng)基種類很多，如MS、BNWhite等等。但大多采用MS培養(yǎng)基，菊花對激素的要求不很嚴格，適用的范圍很廣。培養(yǎng)的溫度以24～26℃最好。培養(yǎng)室光照時間每天12～16h為宜，光強1000～4000Lx較好。 外植體經(jīng)培養(yǎng)后，一般10～20d莖尖處可分生出新芽，莖段的葉腋處也會萌發(fā)出新芽。而花蕾外植體經(jīng)過15～20d的培養(yǎng)，會形成愈傷組織；再經(jīng)過20～30d的培養(yǎng)，愈傷組織就會分化出較多的叢生芽。 將從以上外植體誘導分化出的單芽或叢生芽，分切成數(shù)段或數(shù)塊放入增殖培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)。開始分化率和分化苗的數(shù)量都較小，隨繼代次數(shù)增加，分生苗很快就能夠增多起來。增殖的方式除誘導叢生芽增殖外，還可用莖切段作微型扦插來繁殖，它的增殖速度也完全能滿足快速繁殖的要求。方法是用產(chǎn)生的嫩莖為材料，培養(yǎng)其長到一定高度時，將嫩梢剪成1節(jié)帶1葉的莖段，然后插入MS或MS+ mg/L的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，4～5周后，腋芽即生長成小植株，再照上述方法切剪莖段，重復培養(yǎng)，從而達到快繁的目的。 菊花無根苗生根一般較容易，通常在增殖培養(yǎng)時久不轉(zhuǎn)瓶，即可生根，但這種根的根毛較少或無，不利于將來移栽和生長，所以常用下列方法處理：一是無根苗的試管生根，切取3cm左右無根嫩莖，轉(zhuǎn)插到1／2MS+NAA(或IBA)，經(jīng)10d左右即可生根，然后移栽馴化。二是無根嫩莖直接插植到基質(zhì)中生根。利用菊花嫩莖易于生根的特點，可免去試管生根一道工序。剪取2～3cm無根苗，插植到珍珠巖或蛭石的基質(zhì)中，基質(zhì)事先用生根激素溶液浸透，l0d后生根率可達95％～100％。 菊花的有根苗移栽成活容易，將有根的植株從瓶中用鑷子輕輕夾出，洗凈根部黏附的瓊脂，栽入蛭石基質(zhì)中。然后加設小拱棚以保濕，隨著幼苗的生長，逐漸降低空氣濕度和基質(zhì)含水量，轉(zhuǎn)為正常苗的管理階段。移栽前期將空氣濕度保持在75%～85%之間，遮光率為40%，環(huán)境溫度控制在20～26℃，就可使試管苗在20d左右移栽成活，并長出新根新葉。二、蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)（一）培養(yǎng)意義蝴蝶蘭屬于蘭科、蝴蝶蘭屬，為多年生熱帶花卉，是世界上栽培最廣泛、最受喜愛的洋蘭之一。蝴蝶蘭的繁殖大多采用分株的方法，得到種苗量少，不能滿足栽培的需求。通過組織培養(yǎng)技術(shù)繁育蝴蝶蘭種苗，實現(xiàn)“蘭花工業(yè)”是目前繁殖率最高、種苗質(zhì)量最優(yōu)秀的方法。（二）培養(yǎng)程序 蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)外植體有莖尖、莖段、葉片、花梗腋芽、花梗節(jié)間、根尖等，各部位都能誘導成功，只是難易程度不一。蝴蝶蘭是單莖性熱帶氣生蘭，只有一個莖尖，如果直接從開花植株取得莖尖或莖段，整株造成浪費。以葉片或根尖作外植體，材料豐富，但誘導周期長、難度大；用花梗腋芽或花梗節(jié)間作外植體，容易誘導，外植體表面滅菌成功率高，是最合適的外植體取樣部位。、接種與初代培養(yǎng)●花梗腋芽的培養(yǎng)：蝴蝶蘭為總狀花序，近頂端的節(jié)著生花蕾，近基部的幾個節(jié)，常具有苞葉覆蓋的腋芽。剪取整枝花梗，清水沖洗30min，將花梗剪成長約2～3cm帶腋芽的切段，用無菌吸水紙或紗布吸干水分，帶入無菌操作室按無菌操作程序進行接種。先用70%的酒精溶液浸泡30s，%的升汞溶液浸泡8～10min，用無菌水反復沖洗5～8次，接種在MS+BA 3mg/L的培養(yǎng)基上，可使腋芽萌發(fā)為叢生芽?！窕ü９?jié)間的培養(yǎng)：生長中的蝴蝶蘭幼嫩花莖最具分化原球莖的能力。取生長期在45d以內(nèi)的蝴蝶蘭花梗，經(jīng)無菌操作消毒后（消毒方法同花梗腋芽），斜切成1～，平放在固體培養(yǎng)基上。培養(yǎng)溫度24～28℃，光照強度500Lx，每天光照16h培養(yǎng)。amp。W無機鹽配方，加肌醇100mg/L，維生素BBA1mg/L，蔗糖2%。形成原球莖快而多。 原球莖的增殖培養(yǎng)基以MS為好。BA的濃度對原球莖的生長和增殖有很大的影響。如果BA的濃度較低()，可以促進原球莖的分化；如果BA的濃度較高()，可以明顯促進原球莖的增殖，其中以MS+BA 5mg/L +NAA mg/L的增殖效果最好。在不含或只含低濃度BA ～，原球莖表面分化一些絨毛狀物，進而分化出芽。大約3個月就可以發(fā)育形成完整小植株?；üＲ秆空T導出叢生芽后，接種于繼代培養(yǎng)基1／3MS+NAA mg/L+ BA1～10mg/L()，培養(yǎng)溫度(26177。2)℃，光照強度2000Lx，光照時間10h／d。每40～50d繼代1次，增殖倍數(shù)2～3倍。 將分化形成的完整小植株移入壯苗培養(yǎng)基MS(KC)+NAA +10%香蕉汁中。培養(yǎng)1個月后，平均每株有4條根、4片葉片，植株生長健壯。當小苗高達3～4cm時，轉(zhuǎn)接到1/2MS+ mg/L的培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，約3個月轉(zhuǎn)移一次新鮮的培養(yǎng)基，生根率可達100%。當試管苗具有3～4條粗壯的根、株高達到7～8cm時，可以移栽。 先將試管苗帶瓶移出培養(yǎng)間，放置于溫室中煉苗，15d后打開瓶蓋，每天早、中、晚各噴水一次，保證足夠的濕度。3d以后，用鑷子將小苗輕輕夾出培養(yǎng)瓶，洗凈根部培養(yǎng)基?？上扔?500倍的多菌靈藥液浸泡5～10min，然后以水草包裹蝴蝶蘭根部，將其定植于穴盤中。定植前依葉子長度及根的生長狀況進行分級，將大小近似的苗栽植在同一規(guī)格的穴盤中，以便日后管理。環(huán)境溫度保持25～28℃，保持濕度85%左右，防陽光直射。當新葉長出、新根伸長時，%～%KH2PO4溶液追肥，成苗率可達95%以上。三、大花蕙蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)（一）培養(yǎng)意義大花蕙蘭又稱虎頭蘭，為蘭科蕙蘭屬中的大花附生種類，在亞熱帶及溫帶地區(qū)廣泛栽培，是深受各國人民喜愛的一種洋蘭。大花蕙蘭常規(guī)的繁殖方法有分株繁殖、播種繁殖。分株繁殖系數(shù)低且速度很慢；大花蕙蘭結(jié)實極少，只有在母株周圍播種才可自然萌發(fā)，而且發(fā)芽率及成活率極小，故用常規(guī)的繁殖方法不能滿足栽培的需求。通過組織培養(yǎng)技術(shù)繁育大花蕙蘭種苗，是目前生產(chǎn)中最常用、最有效的方法。（二）培養(yǎng)程序 用于大花蕙蘭組織培養(yǎng)的外植體有莖尖、莖段、芽體等。芽體經(jīng)過消毒后，在無菌條件下剝出莖尖，接種于啟動培養(yǎng)基上。 將莖尖接種在MS+BA +，25d左右外植體周圍開始出現(xiàn)許多白色、大小不一的顆粒狀愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)則由白色逐漸轉(zhuǎn)為綠色，即為原球莖。培養(yǎng)基中添加100g/L的香蕉勻漿汁，有助于誘導培養(yǎng)。 將原球莖轉(zhuǎn)至1／2MS+～／L+～／L+%的增殖培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，在幾種培養(yǎng)基上都能快速增殖，同時分化出叢芽，形成原球莖與叢生芽同時存在的現(xiàn)象。隨著BA與NAA濃度提高，原球莖的增殖速度可加快，一般可以達到5～7倍。添加10%香蕉汁不僅可提高原球莖的增殖率，而且長出的芽苗健壯；在同一培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，芽苗會長出粗壯根系，成為完整植株。 將2cm左右高的莖芽從原球莖團塊上切下，接種到1/2MS+ ～+～，莖芽2周后開始生根，葉片伸長、植株增高；1個月后可長成高5cm以上的完整植株。若在培養(yǎng)基中添加香蕉勻漿汁、肌醇(100mg/L)或水解酪蛋白(1g/L)，更易于生根，且較粗壯，同時長成的植株也健壯。 當瓶苗有3～4條根，且根長達2～3cm時，將培養(yǎng)瓶放置于有明亮散射光的溫室進行煉苗，15d后即可打開瓶蓋再放置2～3d。移栽前洗凈苗根部的培養(yǎng)基，移栽于預先消毒過的基質(zhì)中。大花蕙蘭對基質(zhì)的要求不太嚴格，泥炭土與蛭石的混合物、碎陶粒、水苔都可作為基質(zhì)，小苗移栽后，只要注意保濕、通風，就能正常生長，1個月后每周澆一次稀釋的營養(yǎng)液，移栽成活率可達95%。四、美國紅櫨的組織培養(yǎng)技術(shù)（一）培養(yǎng)意義美國紅櫨為漆樹科黃櫨屬植物，是美國黃櫨的變種類型。近幾年引入我國，是優(yōu)良而獨具特色的觀葉樹種，也是當前城市園林及生態(tài)風景區(qū)綠化的首選樹種。由于該植物屬珍稀種類，數(shù)量甚微，目前，全世界主要采用嫁接的傳統(tǒng)方法進行繁殖，或者用扦插、根插、分株和埋干出苗等繁殖，但這些都不能滿足市場需求，并且容易傳播病蟲害。（二）培養(yǎng)程序 以幼枝切段為外植體：取直徑為5～15mm的當年枝條，整理成長度為2～。先用70％～75％酒精滅菌30s，％HgCl2 滅菌8min處理效果最好，滅菌后無菌水涮洗3～5次，接種到誘導培養(yǎng)基上。 外植體接種到誘導培養(yǎng)基MS+／L +／L上，置于25℃177。2℃培養(yǎng)間進行培養(yǎng)。15d左右即可萌發(fā)出嫩芽。 將長出的嫩芽剪取下來，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基MS+／L+／L上進行繼代培養(yǎng)，增殖系數(shù)可達到4以上。 為了促進叢生芽發(fā)育，可將其轉(zhuǎn)移到壯苗培養(yǎng)基MS+ mg／L + mg／L上，在壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)了3周～～，如此反復切割與培養(yǎng)，試管苗數(shù)目即成數(shù)量級遞增。當無根的試管苗小植株在壯苗培養(yǎng)基上生長至2～3cm高時，即可在無菌條件下將其從基部切下，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上：1/2MS+／L，經(jīng)10d左右培養(yǎng)，莖基部切口附近即開始陸續(xù)長出不定根。再經(jīng)10～15d培養(yǎng)，即可成為根系發(fā)育良好的完整試管小植株。 移栽前洗凈苗根部的培養(yǎng)基，移栽于裝有蛭石的營養(yǎng)缽中，然后加設小拱棚以保濕。移栽前期將空氣濕度保持在75%～85%之間，溫度控制在20～25℃，試管苗大約在1個月左右可長出新根新葉，移栽成活率可達90%。五、馬鈴薯的脫毒與快繁技術(shù)（一）培養(yǎng)意義馬鈴薯為茄科茄屬，一年生喜冷涼草本塊莖植物，是世界第四大作物。由于長期的塊莖繁殖，使馬鈴薯的病毒危害特別嚴重，直接影響其產(chǎn)量和品質(zhì)。目前國內(nèi)外脫毒種薯產(chǎn)量還遠遠不能滿足種植脫毒馬鈴薯的要求，在國內(nèi)脫毒薯的種植面積一般僅有當?shù)伛R鈴薯的10～50%，因此脫毒馬鈴薯的培育與繁育仍有著廣闊的市場空間。（二）脫毒技術(shù)●直接從田間采下6～8cm的頂芽或腋芽，置實驗室的營養(yǎng)液中生長，2～3周后除去頂芽，以促使腋芽生長，當腋芽長至1～2cm時，切取腋生枝作為外植體?！窨蛇x擇具有品種典型性狀的薯塊，在室內(nèi)播于土箱、沙箱中進行無菌發(fā)芽，葉未充分展開時就可剪取粗壯頂芽為外植體。 剪取1～2cm長的芽，剝?nèi)ヒ壮~片，在自來水下沖洗1h左右，于超凈工作臺上進行消毒滅菌。先用75%酒精迅速浸潤組織，再用2%次氯酸鈉溶液浸泡5～10min，然后用無菌水沖洗2～3次。把消毒好的芽放在解剖鏡下進行仔細剝離，剝?nèi)ビ兹~和葉原基，露出圓滑的半球形生長點，用解剖刀仔細切取帶有1～2個葉原基的莖尖（～)，迅速接種到培養(yǎng)基上。 莖尖在MS+／L+／L+2%糖（）的培養(yǎng)基、溫度21～25℃、光強2000～3000 Lx、光照時間12h/d的條件下，接種后2～3周形成愈傷組織，4～5周出現(xiàn)綠色芽點，3～6月長成2～3cm小芽?！裰甘局参镏鸿b定 在馬鈴薯的病毒鑒定中，汁液鑒定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和紡錘塊狀病毒很容易通過汁液來接種。①鑒別寄主的選擇 馬鈴薯常用的鑒別指示植物（鑒別寄主）有莧科的千日紅，茄科的洋酸漿、毛葉蔓陀蘿等，應根據(jù)鑒定病毒的種類選擇合適的鑒別指示植物。②鑒別寄主的準備 系統(tǒng)發(fā)病的鑒別寄主一般用具有3～5片真葉的幼苗；局部發(fā)病的鑒別寄主用充分展開的葉片。鑒別寄主應培養(yǎng)在溫度為15～25℃的溫室內(nèi)，每個病毒樣品可接種3株，并做好標記。 ③接種液制備 葉片洗凈后，在消毒研缽中研成糊狀，用