植物組織培養(yǎng)ppt課件(2)-資料下載頁(yè)
2024-11-25 20:13本頁(yè)面
【正文】 首要條件。 ? 其次 ，融合方法首選電融合、如果沒有條件進(jìn)行電融合，可以考慮 PEG融合 ? 其三 是融合參數(shù)，包括各種融合液都應(yīng)選擇適當(dāng)。 原生質(zhì)體融合后的培養(yǎng)同原生質(zhì)體培養(yǎng) 四、雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)與雜種植株的鑒定 雜種細(xì)胞的篩選 ? 原理： 兩種親本細(xì)胞融合的混合物中可能有多種類型細(xì)胞，篩選的目的是獲得優(yōu)良的雜種細(xì)胞 。 ? 1） 親本 ? 2） 同核體： 同源原生質(zhì)體的融合體 ? 3） 異核體 ： 非同源的原生質(zhì)體的融合體 ? 4） 多核體： 含有雙親不同比例核物質(zhì)的融合體 ? 5） 異胞質(zhì)體 ： 具有不同胞質(zhì)來源的雜合細(xì)胞。 ? 6） 核質(zhì)體 ： 有細(xì)胞核而帶有少量細(xì)胞質(zhì)的亞原生質(zhì)體 植物細(xì)胞篩選方式 1） 遺傳互補(bǔ)篩選法： 利用每一親本貢獻(xiàn)一個(gè)功能正常等位基因，糾正另一親本的缺陷，令雜種細(xì)胞表現(xiàn)正常。 ? 如 親本 1：葉綠體缺陷型 親本 2：光致死型 兩親本在光照下一種死亡，另一種呈白 色，融合細(xì)胞長(zhǎng)成植株呈綠色，并能成長(zhǎng) ?2）抗性互補(bǔ)篩選法： ? 利用親本細(xì)胞原生質(zhì)體對(duì)抗生素、除草劑及其它有毒物質(zhì)抗性差異選擇雜種細(xì)胞。 ?如： ?親本 1：對(duì)放線菌素 D抗性，但在 MS培養(yǎng)基上不能超過 50個(gè)世代 ?親本 2：對(duì)放線菌素 D很敏感，但能在 MS上生長(zhǎng) ? 雜種細(xì)胞能在含有放線菌素的 MS培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而親本和其它細(xì)胞死亡 3） 利用物理特性篩選法： 根據(jù)親本的原生質(zhì)體大小、顏色、漂浮密度及電泳遷移率、形成的愈傷組織的差異篩選雜種細(xì)胞。 親本 1： 異硫氰酸熒光素（ FITC）標(biāo)記 親本 2： 堿性蕊香紅熒光素標(biāo)記 在熒光顯微鏡下，親本 1為綠色，親本 2為紅色色，雜種細(xì)胞可以區(qū)分 ? ?4）利用生長(zhǎng)特性篩選法： ? 利用原生質(zhì)體對(duì)培養(yǎng)基成分要求與反應(yīng)的差異選擇雜種細(xì)胞。 ? 例如粉蘭煙草與朗氏煙草細(xì)胞原生質(zhì)體均需外源激素才能生長(zhǎng)，但其融合細(xì)胞可以產(chǎn)生內(nèi)源激素 ，在培養(yǎng)基上不需加激素。 體細(xì)胞雜種的鑒定 形態(tài)鑒定 ： 根據(jù)雙親的形態(tài)學(xué)性狀觀察進(jìn)行鑒定。 細(xì)胞學(xué)鑒定 ： 細(xì)胞器鑒定、染色體鑒定。 生化鑒定 ： 同功酶鑒定 。 分子鑒定 ： RFLP鑒定、 RAPD標(biāo)記鑒定。 2形態(tài)學(xué) 比較再生植株與融合親本在形態(tài)上的異同 2細(xì)胞學(xué) 染色體形態(tài)和數(shù)目的比較 18條染色體 36條染色體 五、體細(xì)胞雜種的特點(diǎn) 形態(tài)上的趨中性 ? 變異幅度大 ? 非整倍性 ? 雙親性狀的共顯性 ? 偏親現(xiàn)象 六、體細(xì)胞雜種的遺傳特性 ? 1．細(xì)胞分裂與染色體丟失 ? 如果細(xì)胞分裂而核不發(fā)生融合，在以后的發(fā)育過程中就會(huì)有兩種結(jié)果， 一是 細(xì)胞分裂幾次以后即停止生長(zhǎng)從而導(dǎo)致死亡； 二是 在發(fā)育過程中某一親本的細(xì)胞核部分或全部丟失。如果這樣就會(huì)產(chǎn)生幾種情況： A細(xì)胞＋ B細(xì)胞質(zhì)；A細(xì)胞＋ B細(xì)胞質(zhì)和部分染色體或基因 。 2．基因轉(zhuǎn)移與性狀表達(dá) ?由于染色體的部分丟失，常常使某個(gè)親本的部分或個(gè)別基因與另一親本的染色體發(fā)生整合， 其結(jié)果是實(shí)現(xiàn)了親本間的基因轉(zhuǎn)移。 基因轉(zhuǎn)移通常是在后代中某些性狀得以表達(dá)，有時(shí)由于基因的重組也可能產(chǎn)生雙親均沒有的新性狀。 3．體細(xì)胞雜種遺傳上的不穩(wěn)定性 ? 體細(xì)胞雜種后代在遺傳上常常不穩(wěn)定，這可能涉及到多方面的因素，如親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近、培養(yǎng)過程中的染色體變異、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)的重組等。 七、體細(xì)胞雜種的應(yīng)用潛力 ? 植物育種中的核質(zhì)替換 ? 細(xì)胞質(zhì)雜種的獲得 ? 遠(yuǎn)緣雜交創(chuàng)造新物種 ? 細(xì)胞器的互作研究 ? 直接應(yīng)用 C 砧木 C 接穗 ? 中間育種材料 ? 生產(chǎn)無籽柚 ?柚為我國(guó)特色水果，栽培面積已達(dá) 100萬(wàn)畝，其中 50%為沙田柚 ?沙田柚品質(zhì)佳，但不足在于種子多，最多可達(dá) 120粒 ?能能否生產(chǎn)無籽或少籽柚？ 沙田柚 ， 我國(guó)的柚子良種，種子多 沙田柚授以柑橘異源四倍體體細(xì)胞雜種花粉后結(jié)果狀。 （ 2021, 江西贛州） 對(duì)照果實(shí) 處理果實(shí) 對(duì)照種子 處理種子 八、體細(xì)胞雜交面臨的困難 ? 融合特性的高效性 ? 雜種細(xì)胞的培養(yǎng)和選擇 ? 雜種的遺傳穩(wěn)定性控制 九、體細(xì)胞雜交研究的發(fā)展趨勢(shì) ? 誘導(dǎo)融合及雜種細(xì)胞的各種生理、生化、遺傳機(jī)理的研究 ? 電融合的程序化控制研究 ? 各種類型原生質(zhì)體（胞質(zhì)體、核質(zhì)體、細(xì)胞器）的制備技術(shù)研究 ? 雜種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的程序化研究 小 結(jié) ? 植物體細(xì)胞雜交即原生質(zhì)體融合，是獲得胞質(zhì)雜種的理想途徑 ? 體細(xì)胞雜交在遠(yuǎn)緣育種與新物種、新資源創(chuàng)造中具有深遠(yuǎn)意義 ? 原生質(zhì)體融合技術(shù)主要有 PEG融合和電融合 ? 雜種的成功培養(yǎng)是建立在原生質(zhì)體的培養(yǎng)技術(shù)上的，選擇和鑒定是獲得細(xì)胞雜種的關(guān)鍵 ? 提高融合效率和培養(yǎng)重復(fù)性是該技術(shù)研究的重點(diǎn) ? 細(xì)胞雜種是體細(xì)胞遺傳研究的良好體系 思考題 原生質(zhì)體定義 原生質(zhì)體培養(yǎng)概念意義 原生質(zhì)體分離、純化方法 原生質(zhì)體融合方法及原理 原生質(zhì)體融合的意義 植物體細(xì)胞雜交的概念和類型 體細(xì)胞雜種鑒定方法 體細(xì)胞雜種應(yīng)用 植物原生質(zhì)體培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)流程
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